联合检测RF、AKA、抗CCP抗体和抗RA33抗体在类风湿关节炎中的应用研究

洪雄新　胡润涛　尤美霞　陈辉雄

【摘要】 目的：研究类风湿因子（RF）、抗角蛋白抗体（AKA）、抗环瓜氨酸（CCP）抗体、和抗RA33抗体四项指标联合检测在类风湿关节炎（RA）诊断中的价值。方法：收集50例RA患者（RA组）和62例非RA的自身免疫病患者（自免组）血清，同时选择60例健康体检者（对照组）作为研究对象，给予所有纳入人群检查RF、AKA、抗CCP抗体和抗RA33抗体，并对检测结果进行分析。结果：RA组RF、AKA、抗CCP抗体和抗RA33抗体的阳性率均明显高于自免组和对照组，差异均有统计学意义（P<0.01）。四项指标诊断RA的敏感性高低依次为抗CCP抗体>RF>AKA>抗RA33；特异性高低依次为抗RA33>AKA>抗CCP抗体>RF；四项指标联合检测进行平行诊断试验中敏感性高达96.0%，在系列诊断试验中特异性高达100%。结论：RF、AKA、抗CCP抗体和抗RA33抗体四项指标联合检测可极大提高特异性和敏感性，有利于提高RA患者的早期诊断，临床上值得推广使用。

【关键词】 类风湿关节炎； 类风湿因子； 抗角蛋白抗体； 抗环瓜氨酸肽抗体； 抗RA33抗体

Diagnostic Value of Combined Detection of AKA Antibody，Anti CCP Antibody，Anti RA33 Antibody and RF for Rheumatoid Arthritis/HONG Xiong-xin，HU Run-tao，YOU Mei-xia，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（24）：021-024

【Abstract】 Objective：To study the value of rheumatoid factor （RF），anti keratin antibodies（AKA），anti cyclic citrullinated peptide （CCP） antibodies，and anti RA33 antibodies in the detection of rheumatoid arthritis （RA）.Method：50 patients with RA（RA group），62 patients with other autoimmune diseases （autoimmune disease group）and 60 healthy subjects （control group）under going physical examination were selected as the research subjects.The RF，AKA，anti CCP antibody and anti RA33 antibody were given to the population，and the test results were analyzed.Result：In RA group，the positive rate of RF，AKA，anti CCP antibody and anti RA33 antibody were obviously higher than those of autoimmune disease group and control group，the differences were statistically significant（P<0.01）.The sensitivity of four indicators for diagnosing RA was anti CCP antibody>RF>AKA>anti RA33；the specificity was anti RA33>AKA>anti CCP antibody>RF.In the parallel diagnostic test， the sensitivity of the four indicators in joint detection was as high as 96.0%，in the series of diagnostic tests，the specificity was as high as 100%.Conclusion：The combined detection of RF，AKA，CCP antibody and anti RA33 can significantly improve the specificity and sensitivity，to improve the early diagnosis of RA patients and should be promoted in clinical use.

【Key words】 Rheumatoid arthritis； Rheumatoid factor； Anti keratin antibody； Anti cyclic citndlinated pepfide antibody； Anti RA33 antibody

First-authors address：Shenzhen Longgang District Peoples Hospital，Shenzhen 518172，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.24.006

類风湿关节炎（RA）是一种以炎性滑膜炎为主的自身免疫性疾病，其临床主要表现为对称性的关节滑膜炎症，可致软骨破坏甚至侵蚀而造成关节强直畸形，严重时还可导致患者失去劳动力和生活自理能力，是世界上导致残疾的主要疾病之一[1-3]。及早诊断和治疗可有效减少RA致残率，本研究通过对RF、AKA、抗CCP抗体和抗RA33抗体的测定，为临床上早期诊断提供更为有价值的诊断方案。endprint

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年1月-2016年12月深圳龙岗区人民医院住院RA患者50例（RA组）作为研究对象，其中女38例，男12例，年龄23～76岁，平均（31.3±4.2）岁，所有患者均符合RA临床诊断标准，另选取其他自身免疫性疾病患者62例（自免组），其中男11例，女51例，年龄21～82岁，平均（30.5±5.3）岁。同时选取本院同期体检健康者60例作为对照组，其中男15例，女45例，年龄18～80岁，平均（28.4±6.9）岁，排除相关疾病。三组患者的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 仪器与试剂 类风湿因子（RF）检测采用BeckmanAU5810及其配套试剂，抗角蛋白抗体（AKA）检测试剂盒产自北京和杰创新生物技术有限公司；抗环瓜氨酸（CCP）抗体采用德国AESKU公司的抗CCP抗体酶联免疫检测试剂盒；抗RA33抗体是采用德国胡曼生化诊断有限责任公司的抗RA33抗体酶联免疫检测试剂盒检测。酶标仪为安图PHOMO全自动酶标仪（精度变异系数≤2%）。

1.3 方法 所有受试者均于清晨抽取空腹静脉血5 mL，待血液凝固后以3000 r/min的速度，离心10 min，分离血清后-20 ℃保存待检。所有操作均严格按照试剂说明书进行。RF检测是采用免疫散射比浊法进行定量分析。AKA、抗CCP抗体和抗RA33抗体检测采用酶联免疫吸附法测定（ELISA）。

1.4 统计学处理 数据采用SPSS 17.0统计软件进行统计学处理，计量资料用（x±s）表示，比较采用t檢验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组的RF、AKA、抗CCP抗体、抗RA33抗体的阳性表达情况比较 三组的RF、AKA、抗CCP抗体、抗RA33抗体的阳性表达情况比较，差异均有统计学意义（P<0.01）；四项指标两两组间比较，差异均有统计学意义（P<0.01）

2.2 单独检测四项指标对诊断RA的效能评价 在四项检测指标中，敏感性由高到低为抗CCP抗体>RF>AKA>抗RA33，分别为78.0%（39/50）、72.0%（36/50）、60.0%（30/50）、42.0%（21/50），特异性由高到低为抗RA33>AKA>抗CCP抗体>RF，分别为96.8%（60/62）、91.9%（57/62）、90.3%（56/62）、58.1%（36/62）；阴性预测值由高到低为抗CCP抗体>RF>AKA>抗RA33，分别为91.2%（114/125）、86.8%（92/106）、85.3%（116/136）、80.5%（120/149）；阳性预测值由高到低为抗RA33>AKA>抗CCP抗体>RF，分别为91.3%（21/23）、83.3%（30/36）、83.0%（39/47）、54.5%（36/66）；Youden指数（为敏感性+特异性-1）抗CCP抗体>AKA>抗RA33>RF，分别为0.68、0.52、0.39、0.30，见表2。

2.3 四项指标平行试验相关性能诊断 四项指标平行试验诊断结果显示，敏感性由高到低为RF+AKA+抗CCP抗体+抗RA33抗体>RF+AKA+抗CCP抗体>RF+AKA，分别为96.0%（48/50）、88.0%（44/50）、82.0%（41/50）；特异性由高到低为RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗体>RF+AKA+抗CCP抗体+抗RA33抗体，分别为71.0%（44/62）、58.1%（36/62）、43.5%（27/62）；Youden指数由高到低为RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗体>RF+AKA+抗CCP抗体+抗RA33抗体，分别为0.53、0.46、0.40。

2.4 四项指标系列试验相关性能诊断 四项指标系列试验诊断结果显示，敏感性由高到低为RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗体>RF+AKA+抗CCP抗体+抗RA33抗体，分别为76.0%（38/50）、56.0%（28/50）、40.0%（20/50）；特异性由高到低为RF+AKA+抗CCP抗体+抗RA33抗体>RF+AKA+抗CCP抗体>RF+AKA，分别为100%（62/62）、93.5%（58/62）、87.1%（54/62）；Youden指数由高到低为RF+AKA>RF+AKA+抗CCP抗体>RF+AKA+抗CCP抗体+抗RA33抗体，分别为0.63、0.50、0.40。见表4。

3 讨论

类风湿性关节炎是一种以关节软骨侵蚀为主的全身性自身免疫性疾病，随着病情进行性发展，会导致关节畸形、功能丧失等情况出现，早期发现并诊断，对指导治疗、改善病情和预后具有重要的临床意义[4-6]。本研究通过检测RA患者、非RA疾病患者与健康者血清中的RF、AKA、抗CCP抗体和抗RA33抗体四种指标，对其在RA中的诊断价值进行分析。

RF是抗人或动物免疫球蛋白IgG的Fc段的抗体，RA患者体内有产生RF的B细胞克隆，其在EB病毒或变性免疫球蛋白G（IgG）的直接作用下即可大量合成。RF是临床诊断RA的主要血清学指标，具有较高的敏感性，但其诊断特异性不高，在其他自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、干燥综合征等疾病，以及正常老年患者中均有较高的阳性率[7-9]，给临床诊断带来一定的局限性。本研究中，RF对RA的敏感性为72.0%，特异性为58.1%，结果表明有必要通过联合检测其他指标来提高RA的诊断，以减少漏诊和误诊。

AKA是在RA患者血清中发现的一种能与鼠食管中上段角质层反应的抗体，AKA对RA的诊断特异性较高，在疾病早期即可检出[10-11]。有研究表明，该抗体水平变化还与疾病的活动性与病情程度有一定的相关性[12]。在本研究中AKA的敏感度为60.0%，特异性为91.9%，与文献[13-14]报道相符。从表2可见，RA组患者AKA显著高于自免组和对照组，表明AKA对于诊断RA具有较高的价值。抗CCP抗体是含瓜氨酸氨基酸残基的蛋白，为环状聚丝蛋白的多肽片段，主要为IgG类抗体，近年来研究发现，抗CCP抗体对RA诊断有很高的特异度及敏感度，是其较好的早期诊断标志物[15]。有研究发现RA患者骨质的破坏程度与抗CCP抗体的含量有关，抗CCP抗体产生越多，与RA密切相关的表位也越多，关节损害也越严重，抗CCP抗体阳性的患者骨质的侵蚀程度较抗体阴性者更为严重[16]。因此，通过检测抗CCP抗体，可以给临床治疗和预后带来极大的帮助。本研究中，抗CCP抗体的敏感性为78.0%，特异性为90.3%，可见抗CCP抗体的特异性高于RF，可见抗CCP抗体是RA诊断中的一个较理想的指标。RA33是异质性核糖核蛋白的核心蛋白A2，与分子量33KD的核酸蛋白发生反应，因而定名为抗RA33抗体。抗RA33抗体在自身免疫病的患者也能检出，这个有可能是因为和含有针对小核糖核蛋白体（snRNP）中的A2发生了交叉反应。同时有研究发现，抗RA33抗体的含量与RA病情的严重程度无关[17-18]，说明抗体RA33有较高的稳定性，对RA有较大的诊断意义。本研究中，抗RA33抗体的敏感性为42.0%，特异性为96.8%，其特异性在四项指标中最高，但其敏感性最低，表明抗RA33抗体单项检测用于诊断RA会有较多漏检。endprint

在RA诊断的实验室检查指标中，单独检测以上各指标在RA诊断中不能同时保证有较满意的敏感性和特异性，也可能出现假阳性和假阴性，易给临床诊断带来误诊和漏诊。为了提高诊断效率，可通过平行试验和系列试验来实现。平行试验也就是通常说的并联试验，是多个试验同时进行，只要有一个阳性就可判为平行试验阳性，认为疾病的证据存在，這样可以提高敏感性，减少漏诊。在本研究中，联合检测RF和AKA两项，敏感性为80.2%，Youden指数0.53，联合检测RF、AKA和抗CCP抗体三项，敏感性上升到88.0%，通过四项指标并联联合检测，敏感性可达96.0%。系列试验即通常说的串联试验，是多个试验相继进行，前一个试验结果阳性就接着做下一个试验，一旦出现阴性结果就可判为系列试验阴性，作为无病处理，终止试验，这样可以提高特异度，减少误诊。在本研究中，联合检测RF和AKA两项，特异性为87.1%，Youden指数为0.63，联合检测RF、AKA和抗CCP抗体三项，特异性上升到93.5%，通过四项指标串联联合检测，特异度高达100%。由此说明，联合检测这四项指标能有效减少漏诊率和误诊率。

综上所述，RF、AKA、抗CCP抗体、抗RA33抗体四种指标联合检测诊断RA具有较高的可靠性，临床应用价值较高，值得临床推广应用。

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（收稿日期：2017-07-03） （本文编辑：张爽）endprint