PTK7在不同级别结肠腺瘤组织及瘤旁非肿瘤黏膜组织中的表达意义

张东海　祁晓莉　张轶华　商晓青　刘洪波

【摘要】 目的：研究蛋白酪氨酸激酶-7（Protein tyrosine kinase-7，PTK7）在不同级别结肠腺瘤组织及瘤旁非肿瘤黏膜组织中的表达和意义。方法：收集31例结肠腺瘤组织标本，并进行免疫组化染色检测PTK7蛋白的表达，结合患者的临床病理资料进行统计分析。结果：非肿瘤黏膜组织中PTK7检出率为29.6%（8/27），腺瘤组织中为77.4%（24/31）。瘤旁非肿瘤黏膜组织中，高级别上皮内瘤变与低级别上皮内瘤变比较，差异无统计学意义（ 字2=0.051，P>0.05）。非肿瘤黏膜组织与腺瘤组织PTK7表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。腺瘤组织中，高级别上皮内瘤变与低级别上皮内瘤变比较，差异有统计学意义（P<0.05）。未发现PTK7表达与性别（P=0.198）或年龄（P=0.198）之间有相关性。结论：PTK7参与结肠腺瘤的发生发展，其阳性表达对结肠肿瘤的早期干预有提示意义，PTK7可作为预测结直肠癌的发生候选生物标志物。

【关键词】 蛋白酪氨酸激酶-7； 结肠腺瘤； 上皮内瘤变； 免疫组织化学

Expression and Significance of PTK7 in Different Grade of Colonic Adenoma and Non Tumor Mucosa Adjacent to Tumor/ZHANG Dong-hai，QI Xiao-li，ZHANG Yi-hua，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（27）：116-119

【Abstract】 Objective：To investigate the expression and significance of protein tyrosine kinase-7（PTK7） in different grade colorectal adenoma and non tumor mucosa adjacent to tumor.Method：31 cases of adenoma samples and immunohistochemical staining was used to detect the expression of PTK7 protein expressions，combined with cilinical pathological data were statistical analyzed.Result：The detection rate of PTK7 was 29.6%（8/27） in non-tumorous mucosa and adenoma tissues was 77.4%（24/31）.PTK7 expression in surrounding non-tumorous mucosa between high-grade adenoma and low-grade adenoma was no significant different（ 字2=0.051，P>0.05）.The difference of PTK7 expression between non-tumorous mucosa and adenoma tissues was statistically significant（P<0.05）.A marked difference of PTK7 expression was also found between high-grade epithelial adenoma and low-grade epithelial adenoma（P<0.05）.PTK7 expression was not found to be associated with patients gender（P=0.198） or age（P=0.198）.Conclusion：PTK7 may involved in the occurrence and development of colorectal adenoma，its overexpression may be a clue for early diagnosis of colorectal tumor，PTK7 may be a candidate biomarker to predict colorectal cancer genesis.

【Key words】 Protein tyrosine kinase-7； Colorectal adenoma； Intraepithelial neoplasia； Immunohistochemistry

First-authors address：Capital Medical University Daxing Hospital，Beijing 102600，China.

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.27.033

蛋白酪氨酸激酶-7（protein tyrosine kinase-7，PTK7）通常被認为是一种癌基因，研究发现PTK7与多种肿瘤如红白血病细胞系表达以及食管鳞状细胞癌、前列腺癌、黑色素瘤观察、肺鳞状细胞癌与肝细胞癌等的发生、发展有关[1-6]，但目前尚不清楚PTK7的表达是否与结直肠癌的发生、发展密切相关。本研究收集了31例结肠腺瘤组织标本进行免疫组化染色，检测PTK7蛋白在不同级别腺瘤组织以及腺瘤旁非肿瘤黏膜组织的表达情况，比较其间的差异以及预后预测意义。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2014年1-6月本院病理诊断为结肠腺瘤的标本31例，男14例，女17例。组织学分级：低级别上皮内瘤变11例，高级别上皮内瘤变20例，腺瘤旁非肿瘤黏膜组织27例。所有腺瘤标本均为结肠镜下高频电刀切除，术前均未接受过与腺瘤相关的各种其他治疗。endprint

1.2 方法

1.2.1 检测标本 由首都医科大学大兴医院提供。

1.2.2 免疫组织化学方法检测 标本经4%甲醛固定常规脱水、石蜡包埋，4 μm切片，常规HE染色，置于3%过氧化氢15 min以消除内源性过氧化物酶的活性。用EDTA（pH值8.0）（中国北京中山金桥生物技术有限公司）高压修复抗原。待冷却至室温后，用5%脱脂牛奶封闭切片1 h，之后孵育浓缩型兔多克隆抗体anti-ptk7（1∶7500，sab3500340，Sigma）在4 ℃过夜。应用兔/鼠通用型二抗（EnVisionTM Detection System Peroxidase/DAB，Dako），用现配的DAB显色液（中国北京中山金桥生物技术有限公司）显色，用苏木素复染核。

1.3 观察指标与判定标准 （1）免疫组织化学染色结果判断：PTK7染色结果及评分由两名高年资病理医生独立盲评。PTK7染色的免疫组化评分标准判定，分别按照染色阳性细胞百分数（PP）和染色强度（SI）进行计分。PP：0分（无）；1分（<25%）；2分（25%～75%）；3分（>75%）。SI：0分（无）；1分（弱）；2分（中）；3分（强）。免疫组化积分（IRS）=阳性细胞百分数计分（PP）×染色阳性强度计分（SI），0分视为阴性，大于0分为阳性。因标本量较少，故总结时仅分为0分、1分与2分三组。（2）观察比较：高级别上皮内瘤变与低级别上皮内瘤变组间的PTK7检出率；腺瘤组织的高级别上皮内瘤变与低级别上皮内瘤变组间的PTK7检出率；瘤旁非肿瘤黏膜组织与腺瘤组织之间的PTK7检出率；检验PTK7表达与31例腺瘤患者性别之间有无相关性；检验PTK7表达与31例腺瘤患者年龄之间有无相关性。

1.4 统计学处理 选择SPSS 10.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

31例结肠腺瘤组织及27例瘤旁非肿瘤黏膜组织PTK7免疫组织化学检测结果，（1）在瘤旁非肿瘤黏膜组织中PTK7检出率29.6%（8/27），高级别上皮内瘤变与低级别上皮内瘤变比较，差异无统计学意义（ 字2=0.051，P>0.05）。（2）在腺瘤组织中PTK7检出率77.4%（24/31），高级别上皮内瘤变与低级别上皮内瘤变比较，差异有统计学意义（ 字2=24.74，P<0.05）。（3）瘤旁非肿瘤黏膜组织与腺瘤组织比较，差异有统计学意义（ 字2=25.378，P<0.05）。（4）同时评估了PTK7表达与31例腺瘤患者临床病理特征的相关性，未发现PTK7表达与患者性别（P=0.198）或年龄（P=0.198）之间有相关性。见表1。

3 讨论

关于结直肠癌的发生，目前较公认的是“腺瘤→癌变（adenoma→carcinoma）”学说，因此通常将结肠腺瘤列为“结直肠癌的最主要癌前病变”[7]，临床对早期发现的结肠腺瘤多数进行摘除，按照目前治疗水平，多数在结肠镜下进行[8]。对于摘除的结肠腺瘤，目前病理诊断多将既往的异型增生改称为“上皮内瘤变”[7-8]，低级别上皮内瘤变对应于Ⅰ～Ⅱ级异型增生，高级别上皮内瘤变则对应于Ⅲ级异型增生和原位癌。上皮内瘤变是一种以形态学改变为特征的上皮性病变，包括组织结构和细胞形态学改变，伴细胞增殖动力学和分化异常，本研究分组是按照上述原则执行的。上述也提示对结肠腺瘤进行PTK7检测确有必要性及有一定的臨床意义。

有研究显示，PTK7在脊椎动物的胚胎发育和发生过程中发挥十分重要的作用，在许多肿瘤中PTK7出现高表达[9-13]。近期国内有学者在其他肿瘤方面有关于PTK7表达的研究报告[14]。王建东等[15]发现PTK7在肿瘤细胞核内皮细胞的迁移中发挥着重要的作用，在许多肿瘤中PTK7出现高表达[1]。黄群锋等[16]用免疫组化法检测了80例食管鳞状细胞癌标本有47例（56.25%）PTK7蛋白表达阳性，但在63例癌旁组织及正常组织中PTK7表达均为阴性，而且PTK7表达越高，患者的5年生存率越低。张关亭等[17]发现，在急性淋巴细胞白血病患者中PTK7的表达量高于正常对照组，血清中PTK7的含量检查对于诊断AML有潜在临床价值，可以用于AML的早期诊断。张萍[18]曾研究PTK7与头颈部鳞癌的关系，发现PTK7有可能成为头颈部鳞癌一个比较理想的治疗靶点，PTK7促进头颈部鳞癌细胞的侵袭和生长，PTK7强阳性为头颈部鳞癌的不良预后因素之一。王海燕等[19]发现，卵巢癌与正常组织及良性肿瘤中PTK7的表达差异有统计学意义，PTK7在交界性卵巢肿瘤中的表达与临床分期（P=0.038），腹膜转移和或淋巴结转移（P=0.038）均有相关性。由此可见，PTK7的表达与肿瘤的生存率、预后评估关系较密切。

本研究发现，在瘤旁非肿瘤黏膜组织PTK7检出率29.6%（8/27），这与黄群锋等[16]食管鳞状细胞癌的结果不同，是否与肿瘤发生的部位不同相关，尚待进一步研究。在高级别上皮内瘤变与低级别上皮内瘤变组的瘤旁非肿瘤黏膜组织中，PTK7表达阳性率比较，差异无统计学意义（ 字2=0.051，P>0.05），提示无论何级别腺瘤的患者均有可能表达PTK7。在腺瘤组织中，PTK7检出率77.4%（24/31），高级别上皮内瘤变组与低级别上皮内瘤变比较，差异有统计学意义（ 字2=24.74，P<0.05）。瘤旁非肿瘤黏膜组织与腺瘤组织之间PTK7检出率也存在明显差异（ 字2=25.378，P<0.05）。尚可看到，在PTK7阳性的腺瘤组织中染色强度为2分的比例达45.8%（11/24），而瘤旁非肿瘤黏膜组织无一例染色强度为2分，差异无统计学意义（P>0.05），可能与病例数较少有关，但也显示了一种趋势，即PTK7表达强度与结肠腺瘤级别有可能相关。结果提示，在结肠腺瘤组织中可以检测到PTK7且有较高的阳性率，在少数瘤旁非肿瘤黏膜组织中也可检测到。结合结肠腺瘤的病理特征，提示对于结肠腺瘤应该积极早期干预切除，同时应积极追踪，特别是对于PTK7阳性的病例。而PTK7则可能作为早期发现指标（分子标志物），纳入结肠腺瘤组织标本的常规检查中，用于肿瘤的早期诊断以及预后判断，也可能成为潜在的结、直肠癌治疗靶点[20-21]。endprint

笔者曾对一个家族性腺瘤性息肉病家系进行了系统观察，并对出现的息肉组织反复进行内镜下切除治疗。观察期间发现，患者的息肉组织反复发生，此起彼伏，平均半年治疗一次，每次治疗需要处理的息肉达67枚。经过反复治疗后，结肠组织的息肉分布逐渐稀疏，但每次治疗均可见到0.5 cm左右的息肉出现。结合本文研究结果，提示在家族性腺瘤性息肉病患者，理论上讲所有的结肠黏膜均可能发生腺瘤，而家族性腺瘤性息肉病理论上讲可能100%发生癌变[7-8]。结合本文研究结果，在患者瘤旁非肿瘤黏膜组织中也可检测到PTK7，是否提示患者的结肠黏膜瘤旁非肿瘤黏膜组织中同时存在发生的可能，只是病程未达到而已，这可能是与黄群锋等[16]食管鳞状细胞癌的结果不同的原因。而家族性腺瘤性息肉病患者在结肠镜下治疗后结肠组织的息肉分布逐渐稀疏，可能是由于电灼的作用从而使该局部组织黏膜受到破坏而失去了腺瘤发生的基础。如果不进行结肠切除，腺瘤发生的可能性是始终存在的，这就是要求对家族性腺瘤性息肉病患者全结肠切除的原因[7-8]。

综上所述，鉴于我国独生子女现象的存在，目前发现家族性腺瘤性息肉病的几率明显下降，因此发掘新的结、直肠肿瘤标志物，是一項有意义的工作，而PTK7有可能成为其中的选择。

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（收稿日期：2017-04-11） （本文编辑：程旭然）endprint