汉族人HLA-G基因多态性与胃癌相关性研究

刘洪福, 张 蕾, 阳书华, 章新华, 谢荣臻, 邓龙颖, 邓 伟

(赣南医学院第一附属医院, 江西 赣州, 341000)

汉族人HLA-G基因多态性与胃癌相关性研究

刘洪福, 张 蕾, 阳书华, 章新华, 谢荣臻, 邓龙颖, 邓 伟

(赣南医学院第一附属医院, 江西 赣州, 341000)

目的探讨汉族人HLA-G基因多态性与胃癌相关性方法将123例胃癌患者作为研究对象(经过病理学确诊为胃癌的患者)，同时选取同期健康体检患者150例作为对照组。采用聚合酶链反应序列特异性引物方法(PCR SSP)对以上患者的HLA-G和HLA-DRB1等位基因亚型进行检测，观察2组患者HLA-G和HLA-DRB1等位基因亚型分布频率。结果与对照组比较，观察组中HLA-DRB1*03和HLA-DRB1*15检出率显著高于对照组(P<0.05), 且RR分别为1.427和2.209; 2组HLA-G*01012分布存在显著差异(P<0.05), 且RR值为1.75。结论胃癌发生可能与HLA-G*01012、HLA-DRB1-03和HLA-DRB1-15等位基因频率有较强的相关性，且均为保护性基因。

HLA-G; 基因多态性; 胃癌; 相关性

人类白细胞抗原(HLA)是人类的主要组织相容性复合体(MHC), 位于6号染色体上(6p21.31), 包括一系列紧密连锁的基因座，与人类的免疫系统功能密切相关。其中部分基因编码细胞表面抗原，成为每个人的细胞不可混淆的“特征”，是免疫系统区分本身和异体物质的基础[1]。研究[2]报道, HLA基因多态性与人类肿瘤的发生具有重要的联系，其中报道最多的是与胃部相关肿瘤。本研究观察不同亚型的HLA等位基因分布情况，来探讨I型(主要是HLA-G基因)和Ⅱ型(DRB1基因)多态性与胃癌的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将2013年3月—2016年4月在本院就诊的123例胃癌患者(经过消化道内镜和病理学诊断确诊)作为观察组，同时选取同期在本院行健康体检患者150例作为对照组。观察组年龄35～52岁，平均年龄(43.2±12.2)岁，男、女分别为72、51例; 对照组年龄28～56岁，平均年龄(44.1±11.9)岁，男、女分别为84、66例。以上研究对象均为汉族，均无血缘关系。2组研究对象在年龄和性别上均无显著差异(P>0.05)。

1.2 方法

对所有研究对象采用(PCR SSP)方法进行基因多态性分布测定，主要包括DNA提取(采用QIAGEN Immobilon-p滤膜吸附法)、HLA亚型测定和等位基因计算, DNA提取严格按照说明书操作步骤进行，提取DNA放到22 ℃恒温冰箱进行备用。HLA亚型检测: 将提取制备好的DNA、引物板和D-MIX管在22 ℃～24 ℃进行溶解，将DNA样本混匀。在D-MIX管中加入3.0 μL TaP酶进行混匀处理，取出15 μL注入阴性对照孔内，在D-MIX加入40 μL DNA样本，进行混匀处理，在除阴性对照孔外，其他板孔均加入以上混匀液10 μL, 完成后密封试剂板。在输入PCR程序后采用PE9800型扩增仪进行扩增，将扩增产物转载到微量琼脂糖凝胶孔内，恒压140～150 V, 电泳5 min后在UV下进行电泳结果观察，进行工作单记录和分析。通过紫外分析仪对扩增产物进行观察，记录阳性区带，分析检测基因位点，对于每个座位的基因记录等位基因个数，其中检出一个按照纯合子记录[3]。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0软件对本次研究涉及到的数据进行整理和统计分析，进行危险指数(RR)计算。计数资料采用[n(%)]进行表示，采用卡方检验进行差异性统计,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同HLA-DRB1亚型分布情况

与对照组比较，观察组中HLA-DRB1*03和HLA-DRB1*15检出率显著高于对照组 (P<0.05), 且RR分别为(1.427和2.209), 2个HLA-DRB1亚型对于胃癌的发生有保护性的作用。见表1。

2.2 不同HLA-G亚型分布情况

2组HLA-G*01012分布存在显著差异(P<0.05), 且RR=1.75为保护性基因。见表2。

表1 不同HLA-DRB1亚型分布情况[n(%)]

与对照组比较, *P<0.05。

表2 不同HLA-DQB1亚型分布情况[n(%)]

与对照组比较, *P<0.05。

3 讨 论

胃癌发病率逐年增高，死亡率较高，预后较差，对患者的生活质量造成了严重的影响，其主要的临床诊断方法是通过对血清学的筛查和病理学的活检确诊。有研究[4]显示人类白细胞抗原(HLA-G)多态性与胃癌的发生具有相关性。HLA复合体作为迄今人类多态性最复杂的遗传系统，主要是作为疾病易感性的最主要的免疫学遗传组成部分[5]。对于T细胞的提呈和激活均有重要的作用，参与整个免疫应答的重要的遗传调控[6]。从分子生物学角度来看，大量等位基因的存在，造就HLA是一个人体多态性的基因复合体, HLA可分为Ⅰ型(HLA-A、HLA-B、HLA-C和HLA-G)和Ⅱ型(DRB1、DQA1、DQB1、DQB1和DPB1)。由于基因的多态性，导致了形成抗原的构想和结合部位不同，免疫应答过程中的提呈效率不同，导致了人类对某些疾病的易感性的不同。人类相关抗原G(HLA-G)作为I型HLA的重要成员之一，最早特异性表达在胎儿的滋养层细胞，在母体免疫耐受中起到重要的作用[7]。同时有报道[8]HLA-G所表达蛋白可与CD94/PKG2A受体结合，抑制细胞毒性溶解作用，在抑制T细胞的激活和肿瘤-宿主过程中都有较大的作用，主要有4种亚型(HLA-G*01012、HLA-G*01011、HLA-G*01013、HLA-G*0103)。HLA的Ⅱ型基因中关于DRB1与疾病关系的报道有DRB1亚型中12型与IgA肾病、类天疱疮具有较好疾病相关性。冈比亚地区关于HLA的研究[9]显示, DRB1*13能够显著降低肝部感染的发生, DRB1*1与慢性乙肝患者预后较差具有重要的联系。

本研究结果显示, DRB1*3和DRB1*15两种亚型在胃癌患者体内的检出率和健康对照组的检出率存在显著差异(P<0.05), 在危险度计算后认为该两种亚型为保护作用基因; HLA-G*01012在2组中也有显著差异(P<0.05), 亚型为保护性基因。有研究表明DRB1*15和幽门螺旋杆菌的感染发生率具有负相关性，幽门螺旋感染的发生是胃炎、胃溃疡发生的重要原因，同时两种疾病的进一步发展也是以胃癌为终点。研究[10-13]显示HLA-G基因在肿瘤细胞免疫逃逸过程中发挥了重要的作用，主要与其能够调节NK细胞的细胞毒性溶解作用有关，同时有报道HLA-G与细胞因子IL-10具有相关性，同时肿瘤细胞也能够分泌可溶性的HLA-G, 而该物质具有免疫抑制作用。部分研究[14-16]指出HLA-G在肿瘤细胞的临床转移消化道鳞癌的发生具有重要联系。在肿瘤的发生和发展过程中，免疫因子的存在具有重要作用。免疫状态的异常存在和对幽门螺旋杆菌感染抑制可能是HLA与胃癌发生的相关性的重要的中间环节。

综上所述，本研究发现HLA-G的01012亚型和DRB1型的03和15亚型可能与胃癌的发生具有相关性，且均为保护性因素。

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CorrelationbetweenHLA-GgenepolymorphismandgastriccancerinHannationality

LIUHongfu,ZHANGLei,YANGShuhua,ZHANGXinhua,XIERongzhen,DENGLongying,DENGWei

(FirstAffiliatedHospitalofGannanMedicalCollege,Ganzhou,Jiangxi, 341000)

ObjectiveTo explore the correlation between HLA-G gene polymorphism and gastric cancer in Han nationality.MethodsA total of 123 gastric cancer patients in our hospital as the research objects (confirmed as gastric carcinoma by pathological diagnosis). At the same time, a total of 150 healthy controls were selected in our hospital, HLA-G and HLA-DRB1 allele subtypes were detected by polymerase chain reaction sequence specific primers (PCR SSP) detection method, and the allele distribution frequencies of subtypes of HLA-G and HLA-DRB1 were observed and analyzed.ResultsCompared with the control group, the observation group had higher detection rate in HLA-DRB1*03 and HLA-DRB1*15 (P<0.05), and RR were 1.427 and 2.209, respectively. And there were significant differences in HLA-G*01012 distribution in two groups (P<0.05).ConclusionThe incidence of gastric cancer may possibly correlated with HLA-G*01012, HLA-DRB1-03 and HLA-DRB1-15 frequencies, and they are all protective genes.

HLA-G; gene polymorphism; gastric cancer; correlation

R 735.2

A

1672-2353(2017)19-070-03

10.7619/jcmp.201719020

2017-05-12

江西省赣州市指导性科技计划项目(GZ2015ZSF068)

邓伟