流式细胞仪检测恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群的临床研究

王景胜 刘正君 陈 楠 李 丹 高会广

流式细胞仪检测恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群的临床研究

王景胜 刘正君 陈 楠 李 丹 高会广

目的探讨流式细胞仪检测恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群的效果及其与临床病理、肿瘤类型的关系。方法选取我院于2014年8月—2016年9月收治的98例恶性淋巴瘤患者为研究组，同期选取98例健康体检者为对照组。应用流式细胞仪检测两组外周血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)并进行比较。结果研究组CD3+、CD4+/CD8+水平分别为(55.63±11.25)，(1.32±0.62)，显著低于对照组的(68.96±12.63)，(1.59±0.59)，差异具有统计学意义(P<0.05)；研究组CD4+、CD8+水平(33.67±8.14)，(26.02±4.67)与对照组的(34.12±8.33)，(25.67±4.53)相比差异无统计学意义(P>0.05)。霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者CD3+、CD4+/CD8+水平分别为(54.63±11.36)，(1.22±0.65)和(55.52±12.02)，(1.34±0.71)，显著低于对照组的(68.96±12.63)，(1.59±0.59)，差异具有统计学意义(P<0.05)；霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者CD4+、CD8+水平分别为(33.78±8.23)，(25.74±4.88)和(33.62±8.74)，(26.32±4.85)与对照组的(34.12±8.33)，(25.67±4.53)相比，差异无统计学意义(P>0.05)。Ⅲ～Ⅳ期恶性淋巴瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平分别为(52.66±12.47)，(28.25±6.32)，(1.30±0.62)明显低于对照组的(68.96±12.63)，(34.12±8.33)，(1.59±0.59)，差异具有统计学意义(P<0.05)；Ⅰ～Ⅱ期恶性淋巴瘤患者CD3+水平为(58.63±11.85)，显著低于对照组的(68.96±12.63)，而CD8+水平为(29.63±3.57)，显著高于对照组的(25.67±4.53)，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论流式细胞仪检测外周血T细胞亚群可以作为诊断恶性淋巴瘤患者的病情、分期以及免疫状态的重要手段，具有较高的应用价值。

流式细胞仪；恶性淋巴瘤；外周血T细胞亚群

恶性淋巴瘤是临床比较常见的一种恶性肿瘤，原发于淋巴结或淋巴组织，具有较高的发病率[1]。患者临床表现以淋巴结无痛性、进行性肿大、发热、乏力、盗汗、贫血等为主，严重危害人类健康[2]。临床发现，大部分恶性淋巴瘤患者伴有机体免疫机能紊乱和下降，且在肿瘤的发生、发展中起到重要作用[3]。本研究采用流式细胞仪对不同类型、临床分期的恶性淋巴瘤患者及健康体检者的外周血T细胞亚群进行检测和比较，旨在探讨流式细胞仪检测恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群的效果及T细胞亚群与本病的发生、发展的关系，为了临床更好的诊治恶性淋巴瘤提供依据[4]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院于2014年8月—2016年9月收治的98例恶性淋巴瘤患者为研究组，其中男56例，女42例；年龄42～69岁，平均年龄(55.63±3.74)岁；肿瘤类型：霍奇金淋巴瘤18例，非霍奇金淋巴瘤80例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期48例，Ⅲ～Ⅳ期50例。选取98例同时期健康体检者为对照组，其中男58例，女40例；年龄40～66岁，平均年龄(55.42±3.56)岁。研究组患者性别、年龄等一般资料与对照组相比，差异无统计学意义(P>0.05)，可进行比较研究。

1.2 方法

采用美国BD公司生产的BD FACSCanto II流式细胞仪对CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平进行测定。抽取两组2 mL静脉血，使用乙二胺四乙酸二钠进行抗凝。各试管中加入20 μL的CD3+/CD4+/CD8+三色标记的单克隆抗体及100 μL抗凝全血，混匀后室温避光染色10 min～15 min。使用磷酸盐缓冲液洗涤1遍，弃上清后加入磷酸盐缓冲液重悬细胞0.5 mL。立即加入15 mL肝素抗凝，用流式细胞仪检测。并分离出单个的核细胞，将核细胞进行洗涤，将细胞数量控制在(1～3)×106。再取试管中加入100 μL的核细胞，依次在每支试管中加入20 μL荧光标记过的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+等。

1.2 观察指标

观察比较研究组、对照组患者的恶性肿瘤类型，临床分期对CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞水平的影响。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 两组外周血T细胞亚群比较

研究组CD3+、CD4+/CD8+水平分别为(55.63±11.25)，(1.32±0.62)，均明显低于对照组(68.96±12.63)，(1.59±0.59)，差异具有统计学意义(P<0.05)；研究组CD4+、CD8+水平(33.67±8.14)，(26.02±4.67)与对照组的(34.12±8.33)，(25.67±4.53)相比，差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。

2.2 霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者T细胞亚群与对照组比较

霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者CD3+、CD4+/CD8+水平分别为(54.63±11.36)，(1.22±0.65)和(55.52±12.02)，(1.34±0.71)，较对照组的(68.96±12.63)，(1.59±0.59)均明显偏低，差异具有统计学意义(P<0.05)；不同类型恶性淋巴瘤患者CD4+、CD8+水平分别为(33.78±8.23)，(25.74±4.88)和(33.62±8.74)，(26.32±4.85)与对照组的(34.12±8.33)，(25.67±4.53)相比，差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。

表1 两组外周血T细胞亚群比较

表2 霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤患者T细胞亚群与对照组比较

2.3 不同临床分期恶性淋巴瘤患者T细胞亚群与对照组比较

Ⅲ～Ⅳ期恶性淋巴瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平分别为(52.66±12.47)，(28.25±6.32)，(1.30±0.62)较对照组的(68.96±12.63)，(34.12±8.33)，(1.59±0.59)明显降低，差异具有统计学意义(P<0.05)；Ⅰ～Ⅱ期恶性淋巴瘤患者CD3+水平为(58.63±11.85)较对照组的(68.96±12.63)明显偏低，而CD8+水平为(29.63±3.57)较对照组的(25.67±4.53)明显偏高，差异具有统计学意义(P<0.05)(表3)。

GroupsCD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+Controlgroup(n=98)68.96±12.6334.12±8.3325.67±4.531.59±0.59Ⅰ～Ⅱperiod(n=48)58.63±11.8534.52±8.4429.63±3.571.49±0.66Ⅲ～Ⅳperiod(n=50)52.66±12.4728.25±6.3226.02±4.951.30±0.62F31.3310.8013.723.68P<0.01<0.01<0.010.027

3 讨论

近年来，我国恶性淋巴瘤的发病率不断上升，给患者的生存质量造成严重的负面影响[5]。恶性淋巴瘤发病原因复杂，目前研究提示可能与人类疱疹病毒、逆转录病毒、免疫功能低下、免疫抑制剂的应用及幽门螺杆菌等有关[6-7]。流式细胞术是一种将计算机技术、激光技术、免疫荧光化学与单克隆抗体进行结合的一项检测技术，可快速测定细胞或细胞器生物学性质，具有速度快、对异常细胞鉴别能力高、准确性好、可进行多参数测量等优点，被广泛应用于多种恶性肿瘤的诊治中[8-10]。

恶性淋巴瘤是一类全身性疾病，与机体免疫系统功能状态密切相关[11]。细胞免疫是机体抗肿瘤的主要免疫效应，尤其是T细胞介导的特异性细胞免疫[12]。当T细胞亚群的功能及数量出现异常时，可导致机体发生免疫紊乱，降低机体免疫功能，引发一系列病理变化[13-14]。本研究结果显示，研究组CD3+、CD4+/CD8+水平较对照组均明显更低。表明恶性淋巴瘤患者的免疫功能低下[15]。分析原因为CD3+仅存在于T细胞表面，由6条肽链组成，可与T细胞受体进行结合，形成复合物，参与T细胞的信号转导，且与T细胞的活化密切相关。恶性淋巴瘤患者的CD3+水平与T细胞的功能密切相关，CD3+分子的数量与T细胞功能呈正相关[16]。CD4+、CD8+作用T细胞表面的辅助分子，在组织相容性复合体限制性T细胞的活化起到重要作用[17]。大部分CD4+细胞为辅助性T细胞，可分泌大量的淋巴因子，对其他效应细胞进行激活，产生炎症反应。自然杀伤细胞(NK细胞)和CD8+细胞参与了初次免疫反应，而CD4+细胞在再次抗肿瘤免疫反应中发挥着巨大作用[18]。在CD4+细胞和其分泌的淋巴因子作用下，可杀死一部分肿瘤细胞(主要为带有致敏抗原肽-MHCⅠ类分子的细胞)及抑制性T细胞，对NK细胞及T细胞的活性进行抑制[19]。CD4+/CD8+的动态平衡可决定机体的免疫水平及免疫状态，若CD4+/CD8+下降，抑制NK细胞的活性，为肿瘤的转移、复发及扩散提供了有利条件。

武晓博研究指出[20]，淋巴瘤患者化疗前外周血CD4+、CD4+/CD8+水平低于对照组，CD3+、CD8+水平高于对照组；但本研究的结果显示，不同类型恶性淋巴瘤患者CD3+、CD4+/CD8+水平较对照组低，其中，Ⅲ～Ⅳ期恶性淋巴瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于对照组，CD4+、CD4+/CD8+水平变化则与武晓博的研究数据有较好的一致性，CD3+水平变化与之相反，低于对照组患者。但在乔文斌等的研究中[21]，淋巴瘤患者CD3+、CD4+/CD8+水平较对照组低，本研究结果与之具有一致性。

在本研究中，Ⅰ～Ⅱ期恶性淋巴瘤患者CD3+水平低于对照组，而CD8+更高。可能是因为恶性淋巴瘤患者在早期时，其免疫功能下降，但机体可通过自身免疫调节功能对T细胞亚群的数量进行调控，减少CD8+细胞数量，减轻对CD4+细胞的抑制程度。Ⅲ～Ⅳ期恶性淋巴瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平较对照组明显更低，与淋巴系统损伤有关；因为恶性淋巴瘤患者在晚期时，其淋巴系统受到严重损害，增加CD8+细胞数量，增强对CD4+细胞的抑制程度，从而降低CD4+/CD8+水平。本研究中，不同类型的恶性淋巴瘤患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平未见明显差异，表明不同类型恶性淋巴瘤患者均存在免疫功能下降的情况。

综上所述，流式细胞仪检测恶性淋巴瘤患者外周血T细胞亚群对于判断患者病情、临床分期及免疫状态具有重要意义。

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ClinicalstudyofperipheralbloodTcellsubsetsinpatientswithmalignantlymphomabyflowcytometry

WANGJingsheng，LIUZhengjun，CHENGNan，LIDan，GAOHuiguang

Department of Clinical Laboratory，The 404th Hospital of PLA，Weihai 264200，China

ObjectiveThe aim of this study was to investigate the effect of flow cytometry on peripheral blood T cell subsets in patients with malignant lymphoma and its relationship with clinicopathological and tumor types.MethodsNinety-eight patients with malignant lymphoma treated in our hospital from August 2014 to September 2016 were selected as the study group.Ninety-eight healthy subjects were selected as the control group.The peripheral blood T cell subsets(CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+)were detected in patients and healthy controls by flow cytometry.ResultsThe levels of CD3+and CD4+/CD8+in the study group were(55.63±11.25)and(1.32±0.62)，respectively，which were significantly lower than those(68.96±12.63)and(1.59±0.59)of the control group(P<0.05).The levels of CD4+and CD8+were(33.67±8.14)and(26.02±4.67)，respectively in the study group，were no difference from the control group(34.12±8.33)and(25.67±4.53)(P>0.05).The levels of CD3+and CD4+/CD8+in patients with Hodgkin′s lymphoma were(54.63±11.36)，(1.22±0.65)，respectively，and(55.52±12.02)，(1.34±0.71)for non-hodgkin lymphoma.They were significantly decreoseg in the control group(68.96±12.63 for CD3+and 1.59±0.59 for CD4+/CD8+)(P<0.05).The level of CD4+and CD8+were no difference amoupst Hodgkin′s lymphoma(33.78±8.23 for CD4+and 25.74±4.88 for CD8+)，non-Hodgkin′s lymphoma(25.74±4.88 for CD4+and 33.62±8.74 for CD8+)and control group(34.12±8.33 for CD4+and 25.67±4.53 for CD8+)(P>0.05).The levels of CD3+，CD4+and CD4+/CD8+in patients with Ⅲ ～Ⅳ stage malignant lymphoma were(52.66±12.47)，(28.25±6.32)and(1.30±0.62)，respectively，which were significantly lower than those(68.96±12.63)，(34.12±8.33)and(1.59±0.59)in the control group(P<0.05).The level of CD3+in patients with phase I-II malignant lymphoma(58.63±11.85)was significantly lower than that in the control group(68.96±12.63)(P<0.05).The level of CD8+in patients with phase I-II malignant lymphoma(29.63±3.57)was significantly higher than that in the control group(25.67±4.53)(P<0.05).ConclusionThe detection of peripheral blood T cell subsets by flow cytometry can be used as an important methods to diagnose the disease，staging and immune status of patients with malignant lymphoma，which has high application value.

Flow cytometry；Malignant lymphoma；Peripheral blood T cell subsets

解放军第404医院检验科(威海 264200)

王景胜，男，(1960-)，本科，主任技师，从事检验医学，血液病诊断的研究。

王景胜，E-mail：hamosk@sina.com

R733

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.05.008

(收稿：2017-05-11)