酒精对KM小鼠口腔颊黏膜阿弗他溃疡的影响

陈柔蓉 张铭阳 黎富尧 徐晓夏 周晓燕 谭媛欢 张文娜 何晓茜冯梓峻 张苏珊 梁成结 王新红*

（广州医科大学附属口腔医院，广东 广州 510040）

· 论 著 ·

酒精对KM小鼠口腔颊黏膜阿弗他溃疡的影响

陈柔蓉 张铭阳 黎富尧 徐晓夏 周晓燕 谭媛欢 张文娜 何晓茜冯梓峻 张苏珊 梁成结 王新红*

（广州医科大学附属口腔医院，广东 广州 510040）

目的通过观察酒精刺激KM小鼠口腔黏膜溃疡面所产生的效果与生理性反应，探究酒精与口腔阿弗他溃疡的相关联系。方法使用苯酚灼烧KM小鼠颊黏膜制作阿弗他溃疡模型。将小鼠随机分为5组，用不同浓度酒精处理溃疡面。于48 h、72 h观察溃疡面的愈合情况。结果48 h，E组溃疡愈合情况较好。72 h，A组、B组溃疡愈合情况较好。结论低浓度酒精（浓度≤15%）需较长作用时间（48～72 h）方能有效促进溃疡面的愈合；高浓度酒精（浓度≥75%）短期作用（24～48 h）亦能促进溃疡面的愈合；高浓度酒精的作用超过72 h则易刺激黏膜组织，产生反效果。

阿弗他溃疡；动物模型；酒精

复发性阿弗他溃疡（recurrent aphthous ulcer，RAU）是临床最常见的口腔黏膜疾病[1]，又称复发性阿弗他口炎、复发性口腔溃疡、复发性口疮，患病率为10%～25%。具有周期性、复发性、自限性的特征，灼痛明显。

研究发现，日常饮食中的酒精成分与RAU关系密切[2]。大量饮酒可严重损害胃肠消化道黏膜，引起慢性、易复发的酒精性消化溃疡，对患者的个人健康及生活质量造成十分严重的负面影响[3]；同时，酒精对口腔和消化道黏膜及腺体的分泌有刺激作用，可引起口腔溃疡、牙龈炎、食管炎、胃炎、肝功能异常等疾病；此外，酒精可能诱发癌症提高病死率[4]。

已有研究表明酒精对口腔和消化道黏膜和腺体分泌有刺激作用，酒精与RAU之间存在一定关系[3]，然而酒精如何影响RAU发生及愈合的机制仍不清楚。因此，本课题拟用KM小鼠口腔黏膜制备RAU模型，对溃疡面施行不同浓度的酒精刺激，以此分析不同浓度范围的酒精对于KM小鼠RAU的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物：KM系健康、SPF小鼠40只，年龄4周，雄性，由广东实验动物中心提供（生产许可证号：SCXK（粤）2013-0002），实验室温度20～25 ℃，湿度50%～65%，动物自由饮食，等体积的恒温箱以相同条件下饲养。

1.2 分组：40只健康、清洁、在相同条件下喂食成长的雄性KM小鼠，随机分为5组，每组8只，依次为对照组（A组）、15%酒精组（B组）、35%酒精组（C组）、55%酒精组（D组）、75%酒精组（E组）；使用苦味酸在背部毛发上进行标记以分辨个体。

1.3 步骤

1.3.1 制备颊黏膜溃疡模型：每只小鼠腹腔注射0.15 mL 10%水合氯醛麻醉后，以牙线捆绑小鼠牙齿，固定。剪取小鼠颊黏膜面积大小橡皮障，于橡皮障上打孔暴露将受制备的颊黏膜面。取用小毛刷沾取少量90%苯酚溶液，于小鼠颊黏膜暴露处灼烧40 s。小鼠黏膜随即产生白斑，于1 d后白斑转为溃疡。每只小鼠取相同部位，灼烧相同时间。

1.3.2 不同浓度酒精处理溃疡面：小毛刷分别沾取生理盐水（A组），15%（B组）、35%（C组）、55%（D组）、75%（E组）浓度的酒精，擦涂溃疡处以及周围5 s，并保持每次处理的次数、时间、酒精用量以及涂抹的部位均一致，记录其溃疡面积，愈合时间。

1.3.3 结果测定：每天定时观察KM小鼠口腔黏膜溃疡情况，借助牙科显微镜以及数码摄影仪器观察并拍摄KM小鼠口腔溃疡情况。记录每组小鼠口内溃疡情况。溃疡诊断依据标准[5]，0：无溃疡/完全愈合，与正常黏膜组织无明显差别；1：溃疡边缘泛红，表面仅由薄的一层黄白色假膜，无凹陷，周围无水肿；2：溃疡表面假膜较厚，无凹陷或稍见无缺损凹陷，周围无水肿或稍见水肿；3：溃疡表面假膜较厚，有明显凹陷，且周围伴有炎性水肿；4：溃疡表面假膜较厚，凹陷较深且缺损范围较大，周围伴有明显炎性水肿。主要观察指标：溃疡面积，凹陷程度，有无假膜，周围红肿程度。

1.3.4 统计学分析：采用SPSS13.0统计软件对实验结果进行Fisher确切概率法统计分析，比较溃疡情况有无差异。若P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组间不同酒精浓度对溃疡愈合的比较：本次实验40只小鼠全部纳入结果分析。分别用生理盐水、15%、35%、55%、75%浓度酒精连续沾涂小鼠溃疡及周围黏膜6次，每次相隔24 h。结果表明，各组小鼠溃疡愈合率随时间延长而逐渐增高，48 h后愈合率显著增高，但各组间无统计学差异（表1、2）。

表1 48 h后小鼠口腔黏膜溃疡面愈合情况[n（%）]

注：Fisher确切概率法，P=0.363＞0.05，差异无统计学意义

表2 72 h后小鼠口腔黏膜溃疡面愈合情况[n（%）]

注：Fisher确切概率法，P=0.363＞0.05，差异无统计学意义

2.2 48 h后，通过检查对比分析发现，A、E两组小鼠口腔黏膜愈合情况较良好，周围炎性红肿稍有消退，肉眼可见明显黏膜凹陷深度降低。B、C、D三组小鼠口腔黏膜愈合情况一般，溃疡面覆盖有较厚假膜，伴有炎性水肿。得出结论即高浓度酒精（浓度≥75%）仅需通过短时间消毒作用（24～48 h）能有效促进口腔溃疡愈合；酒精浓度低于75%时，短时间（24～48 h）处理反而会延长口腔溃疡愈合时间。但不同浓度酒精对于溃疡愈合情况影响差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 72 h后，通过检查对比分析发现，A、B两组小鼠口腔黏膜愈合情况较良好，周围炎性红肿消退明显，与周围正常黏膜组织无明显差别。C、D、E三组小鼠口腔黏膜愈合情况一般，溃疡边缘轻度泛红，黏膜凹陷深度降低。即低浓度酒精（浓度≤15%）通过较长时间消毒作用（48～72 h）能有效促进口腔溃疡愈合，酒精浓度高于15%时，长时间（时间＞72 h）处理反而会延长口腔溃疡愈合时间，但无统计学差异，见图1。

3 讨 论

复发性阿弗他溃疡（RAU）于人群中发病率高，且病因不明确。近年来以针对治疗该疾病的漱口水及牙膏等口腔产品层出不穷。经市场走访调查发现，此类产品大多含有乙醇成分，且部分漱口水以乙醇为其主要成分。乙醇对口腔及消化道黏膜、腺体分泌有刺激作用，长期使用可诱发食管炎、胃炎、口腔溃疡、牙龈炎、肝功能异常等消化系统疾病[6]。

图1 各组KM小鼠愈合率随时间的变化

本研究采用动物模型，以涂抹不同浓度酒精的方法研究酒精对口腔溃疡的影响。实验过程中，本组使用了橡皮障来建模以期隔离创面，达到控制溃疡面大小的目的。实验数据无统计学意义，可能原因有：①在制备溃疡模型时，模型个体溃疡严重程度存在差异；②每天沾涂溃疡表面时，所用酒精的定量标准存在一定误差；③样本量过少，不同浓度酒精的影响差异不明显；④各浓度酒精配置后存放过久，因其挥发性导致浓度下降而低于预设值。

另有猜想：酒精影响RAU的发病机制—“三联因”学说提到环境与免疫[7]。内环境紊乱、免疫系统失衡可导致机体发病，添加适当浓度/剂量的酒精可以促使口腔内环境恢复为前期无溃疡的状态。有实验证明，低浓度的酒精对于小鼠胃黏膜的损伤恢复具有加速[8-9]的作用，同时口腔黏膜与胃黏膜结构相似，因而推测当低浓度酒精作用于小鼠口腔黏膜时有相似的促愈作用。但是延长使用高浓度酒精有凝固破坏蛋白质的作用，进而破坏黏膜结构，使其失去屏障作用，抑制溃疡愈合或加重病程。综上所述，低浓度酒精（浓度≤15%）需较长作用时间（48～72 h）方能有效促进溃疡面的愈合；高浓度酒精（浓度≥75%）短期作用（24～48 h）亦能促进溃疡面的愈合；高浓度酒精的作用超过72 h则易刺激黏膜组织抑制愈合或加重溃疡发展进程。

[1] Lin SS,Chou MY,Ho CC,et al.Study of the viral infections and cytokines associated with recurrent aphthous ulceration[J].Microbes Infect,2005,7(4):635-644.

[2] 马红莲.酒依赖住院患者的护理[J].中国民康医学,2013,25(22):108-109.

[3] 姚淡,李艳霞,沈磊,等.兰索啦哇治疗消化性溃疡出血的临床观察[J].药物流行病学杂志,2011,20(9):452-453.

[4] Praud D,Rota M,Rehm J,et al.Cancer incidence and mortality attributable to alcohol consumption[J].Int J Cancer,2015,269(2):188-194.

[5] 国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准[M].南京;南京大学出版社,1994:129.

[6] Vasavada N,Agarwal R.Role of oxidative stress in diabetic nephropathy[J].Adv Chronic Kidney Dis,2005,12(2):146-154.

[7] 胡雁.复发性口疮发病机制学说[J].广东牙病防治,1998,6(6):60-61.

[8] 孙阳,杜军,陈敏,等.不同浓度酒精对慢性饮酒大鼠胃黏膜细胞增殖的影响[J].南京医科大学学报:自然科学版,2004,24(4):348-350.

[9] 拓楠,余宏宇.酒精致胃黏膜损伤的研究进展[J].中国实用内科杂志,2009,29(12):1145-1146.

Alcohol Influences on Recurrent Aphthous Ulcer of KM Mice Buccal Mucosa

CHEN Rou-rong, ZHANG Ming-yang, LI Fu-yao, XU Xiao-xia, ZHOU Xiao-yan, TAN Yuan-huan, ZHANG Wen-na,HE Xiao-qian, FENG Zi-jun, ZHANG Su-shan, LIANG Cheng-jie, WANG Xin-hong
(Affiliated Stomatological Hospital of Guangzhou Medical University, Guangzhou 510040, China)

ObjectiveTo find out the links between alcohol and recurrent aphthous ulcer by observing the influences and physiological responses of the stimulation of KM mice oral ulcers with alcohol.MethodsThe model of recurrent aphthous ulcers were constructed by cauterizing with paphenol. The mice were randomly divided into 5 groups by different alcohol concentrations. The ulcer sizes were summed on the third and fifth day in order to study the alcohol effects of healing.Results48 hours, the healing situation of E group are better than the other groups. 72 hours, A and B group's ethanol ulcer healing are better.ConclusionLow concentrations of alcohol (≤15%) can effectively promote healing of ulcers by longer-term (48-72 hours); high concentration of alcohol (≥75%) disinfection also can effectively promote the healing of ulcers by short-term (24-48 hours). But the extension of the use of high concentration of alcohol is easy to stimulate ulcers and causes counter-productive.

RAU (recurrent aphthous ulcer); Animal model; Alcoho

R781.5

B

1671-8194（2017）25-0001-02

广东省大学生创新创业训练计划项目基金(2015105700043)

*通讯作者：E-mail:xinhongwang325@163.com