高效液相色谱、|示差折光测定糯米藕中果糖和葡萄糖含量

李红梅　尤继明　韩华　杨抗震

摘要：建立了高效液相色谱＼|示差折光测定糯米藕中果糖和葡萄糖含量的实验方法。色谱柱采用Waters NH2柱（250 mm×4.6mm，5 μm），以乙腈∶水=80∶20为流动相，采用示差折光检测器测定糯米藕中果糖和葡萄糖的含量。果糖和葡萄糖的线性范围为2～40 mg/mL，检出限为0.5 mg/mL，加标回收率为97.46%～101.32%，相对标准偏差1.81%～2.52%。该方法简单、快速、准确、重现性好，适用于糯米藕中果糖和葡萄糖的定量分析。

关键词：糯米藕；葡萄糖；果糖；高效液相色谱；示差折光检测

中图分类号：TS207.3

文献标识码：A文章编号：16749944（2017）18022102

1引言

糯米藕又称蜜汁藕、桂花糯米藕、香糯莲藕等，是江苏省地方传统特色食品之一，也是特色加工农产品之一。糯米藕是以鲜藕为主要原料，配以水、糯米、白砂糖、桂花等辅料，经清洗、切节、灌糯米，蒸煮或不蒸煮，切片或不切片，包装、高温杀菌等等工序制成的莲藕制品，以其香甜、香气浓郁而享有口碑，是我国特有的传统食品之一，深受人们的喜爱，而其中的果糖和葡萄糖＼[1，2＼]含量还未见报道。目前，文献报道的还原糖的分析方法有滴定法、光度法＼[3～5＼]、毛细管电泳法＼[6＼]、离子色谱法＼[7～9＼]、液相色谱法＼[10～18＼]、质谱法＼[19＼]等。示差折光检测器（Refractive Index Detector）是一种高度稳定和灵敏的液相色谱和凝胶渗透色谱检测器，可用于检测在紫外光范围内吸光度不高的化合物，如聚合物、糖、有机酸和甘油三酸酯。因此，本研究应用高效液相色谱＼|示差折光方法对糯米藕中果糖和葡萄糖含量的测定进行了探究。

2材料与方法

2.1材料和仪器

糯米藕（企业提供）、果糖 葡萄糖；乙腈（色谱纯），Tedia公司；实验用水，超纯水。

E2695/2414液相色谱＼|示差折光检测器，Waters公司；Synergy超纯水机，美国密理博公司；BSA224S电子天平，Sartorius公司。

2.2实验方法

2.2.1色谱条件选择

色谱柱：Waters NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈∶水=80∶20；检测池温度：40℃；柱温：40℃；进样量10 μL；流速1.0 mL/min。

色谱柱方面，实验选择了C18和NH2柱，因为这两种柱子在实验室中比较常见，是分析实验中常用柱子。实验中发现糖在C18柱子中不会被保留，只有在氨基柱子上能够分离分析出，所以在实验中选择了氨基柱作为分析实验用柱。流动相的选择中，在乙腈∶水=80∶20时候，标准品达到很好的基线分离。

2.2.2标准溶液配制

准确称取果糖和葡萄糖标准品，用流动相溶解分别配制成2、5、10、20、40 mg/mL的混标溶液，摇匀，经0.45 μm 滤膜过滤，取滤液备用，作为标准品溶液。

2.2.3样品溶液配制

糯米藕样品粉碎匀浆后，称取糯米藕5 g，置于100 mL烧杯中，加入30 mL水，用玻璃棒攪拌使试样完全溶解，转移至100 mL容量瓶中，然后再用10 mL水洗烧杯三次并转移至上述100 mL容量瓶中，用流动相定容，摇匀，经0.45 μm滤膜过滤，取滤液作为样品溶液。

3结果与讨论

3.1线性关系的考察

精密吸取两种糖混合标准溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以对照品峰面积为纵坐标，以对照品溶液浓度（mg/mL）为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程跟相关系数见图1。两种糖在2～40 mg/mL之间线性关系良好。并以信噪比等于3为标准，测得果糖跟葡萄糖的检出限为0.5 mg/mL。

3.2精密度试验

精密吸取混合标准品溶液10 μL重复进样6次，记录色谱图峰面积，并测定峰面积的平均值和相对标准偏差，测定结果见表1。连续6次实验结果显示，果糖和葡萄糖精密度实验相对标准偏差为0.17%、0.08%，本实验测定果糖和葡萄糖精密度良好，具有良好的准确度。

3.3重复性实验

取同一样品，按照供试样品溶液制备方法重复测定6次，记录色谱图，测定结果见表2。

结果表明，重复性实验果糖相对标准偏差为0.99%，葡萄糖相对标准偏差为0.84%。用该方法测果糖和葡萄糖含量重复性良好。

3.4回收率实验

在上述优化好的条件下，分别在糯米藕样品中添加标样，进行添加回收率和精密度实验。测定结果见表3，回收率在97.46%～101.32%之间，重复测定7次，计算各组分的相对标准偏差在1.81%～2.52%之间。表明高效液相色谱＼|示差折光法能够满足实际样品的测定需求。

3.5样品测定

取6批糯米藕按2.3.3方法制备样品溶液，精密吸取样品供试液10μL，标准品混合溶液10 μL，分别注入高效液相色谱仪，以外标法计算含量，见表4，样品中果糖跟葡萄糖含量见表4。果糖和葡萄糖标准品及样品的HPLC色谱图见图2，3，从图中可知通过上述条件标准品和样品都能够达到很好的基线分离，果糖和葡萄糖出峰时间分别在6.5 min和7.0 min左右，结果令人满意。

4结论

采用高效液相色谱＼|示差折光方法来测定糯米藕中果糖和葡萄糖含量，对实验条件进行了优化，色谱柱采用Waters NH2柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以乙腈∶水=80∶20为流动相分离效果较好，并对该条件了进行了实验方法的考察和实际样品的测定，结果表明该法稳定、准确、快速，适用于糯米藕中果糖和葡萄糖的含量测定。endprint

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Separation and Identification of Fructose and Glucose

in Lotus Root Filled With Sticky Rice by High Performance

Liquid Chromatography-Refractive Index Detector

Li Hongmei1，2， You Jiming1，2， Han Hua1，2， Yang Kangzhen1，2

（1.National Organic Food Quality Supervision and Inspection Institute， Baoying 225800， China；

2.Baoying Products Quality Supervision and Inspection Institute， Baoying 225800， China）

Abstract： This paper established a high performance liquid chromatography method for separation and determination of fructose and glucose in Lotus Root filled with Sticky Rice. The analytical column was Waters NH2 （ 250mm×4.6mm， 5μm）.The mobile phase was acentonitrile-water （80：20， V/V）. The samples were determined by a refractive index detector. The calibration curves had good linearity in the range of 2～40mg/mL for fructose and glucose.The detection limit for fructose and glucose were 0.5 mg/Ml.The average recoveries of fructose and glucose were 97.46%～101.32% and theRSD was 1.81%～2.52%. The method was convenient， rapid and effective， which is suitable for qualitatively analysis of fructose and glucose in lotus root filled with sticky rice.

Key words： lotus root filled with sticky rice； fructose； glucose； HPLC； Refractive Index Detectorendprint