甘肃省玛曲牦牛双芽巴贝斯虫血清学调查及风险因素分析

秦思源，初 冬，吴长江，孙贺廷，耿海东，解林红，殷铭阳，谭启东,3，周东辉

（1. 国家林业局野生动物疫源疫病监测总站，沈阳110034；2. 中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州730046；3. 北京出入境检验检疫局动物隔离场，北京101312）

甘肃省玛曲牦牛双芽巴贝斯虫血清学调查及风险因素分析

秦思源1,2，初 冬1，吴长江1，孙贺廷1，耿海东1，解林红1，殷铭阳2，谭启东2,3，周东辉2

（1. 国家林业局野生动物疫源疫病监测总站，沈阳110034；2. 中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州730046；3. 北京出入境检验检疫局动物隔离场，北京101312）

本研究旨在调查甘肃省玛曲地区牦牛双芽巴贝斯虫病的流行情况并对可能影响其感染的因素进行深入分析。本试验采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法对该地区的600份牦牛血清样品进行检测，随后运用流行病学、统计学方法对可能影响牦牛双芽巴贝斯虫感染的因素进行全面分析。调查结果表明，该地区牦牛双芽巴贝斯虫抗体阳性率为22.33%，其中性别和采样季节两个因素对牦牛双芽巴贝斯虫感染的影响均不具备显著统计学意义（P＞0.05），而年龄因素对牦牛双芽巴贝斯虫感染的影响具有显著统计学意义（P＜0.05）。综上所述，甘肃省玛曲地区牦牛双芽巴贝斯虫普遍流行并具有较高的感染率，存在向牧区其他放养牦牛及野生动物传播该病的风险隐患。因此相关部门应针对该地区牦牛双芽巴贝斯虫感染情况采取有效的预防、控制措施，严防该病扩散蔓延，保证当地及周边藏民牦牛养殖的经济效益。

双芽巴贝斯虫；流行病学；酶联免疫吸附试验；牦牛；甘肃省

Abstract:The present study aimed to investigate the seroprevalence of Babesia bigemina infection and analyse the relevant factors in yaks in Maqu area，Gansu province. ELISA methed was used to detect antibodies against Babesia bigemina in 600 yak serum samples.Then, epidemiological and statistical metheds were used to analyze the risk factors. The survey results showed that the overall positive rate was 22.33%. In addition, sampling season and gender of yaks were not signi fi cantly different for Babesia bigemina infection（P＞0.05) except the age of yaks. In conclusion, the prevalence of Babesia bigemina infection in yaks in Maqu area was high, which posted the potential risks of transmitting it to other wild animals. Therefore，effective strategies and measures should be taken to control and preventBabesia bigemina infection in yaks in this region for economic bene fi t for the local and surrounding Tibetans.

Key words:Babesia bigemina; seroprevalence; enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA); Yak; Gansu province

双芽巴贝斯虫是一种寄生在血液内的原虫，可感染牛并引发牛的巴贝斯虫病，该病的发生通常伴随有发热、贫血、黄疸及血色蛋白尿等临床症状[1,2]。高发病率和高死亡率是双芽巴贝斯虫病的一大特征，并且该病严重影响到牦牛的生长发育，导致其体重下降，给牦牛养殖业带来巨大的经济损失[3]。牛双芽巴贝斯虫病的传染源可能来自亚临床感染、慢性感染和已治愈的牛[4]。

血液涂片法通常用于诊断急性巴贝斯虫病，但是由于其敏感性较低，难以在慢性感染期和临床症状不明显时检测到该寄生虫，该方法仍存在诸多不足[5]。相比之下，酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）不仅能够检测到该病原体所携带的特异性抗体，还适用于大量血清样品的检测，因此被广泛应用于流行病学调查研究[6-8]。

近年来，我国多地报道牛感染双芽巴贝斯虫病事件，包括湖南省、湖北省及新疆维吾尔族地区，但是有关牦牛感染双芽巴贝斯虫的报道仍然较少[9-11]。我国牦牛养殖数量大约为130万头，约占世界牦牛总数的90%[12]。甘肃省玛曲县位于甘南藏族自治州，海拔3000 m以上，不仅是当地藏民的居住地，又是牦牛养殖的重要地区。众所周知，牦牛肉、牦牛乳及其他制品是当地藏民日常生活中不可或缺的重要组成部分，因此，牦牛双芽巴贝斯虫感染与否不仅关系到其自身生长发育问题，甚至会影响到当地藏民的健康安全问题。本研究旨在调查甘肃省玛曲地区牦牛双芽巴贝斯虫抗体阳性率，评估影响其阳性率的相关风险因素，以期为更好地防治该病提供基本的流行病学数据。

1 材料与方法

1.1 血清样品2013年在甘肃省玛曲县的4个牧场共采集牦牛血清600份，其中春季、夏季、秋季和冬季分别采集了208份、81份、226份和85份样品。血液样品经1000×g离心10 min后将上清液移到新的灭菌离心管中，置于-20℃保存。对牦牛的性别、年龄及采样季节等信息做详细记录。

1.2 酶联免疫吸附试验检测抗体ELISA商业试剂盒（Svanova Biotech，Uppsala，Sweden）购自瑞典。严格按照试剂盒所提供的检测说明书进行抗体检测[7]。每板设阴、阳性及空白对照各2孔，对可疑孔则进行重复检测。

1.3 数据分析采用二元逻辑回归分析方法探究性别、年龄及采样季节对牦牛双芽巴贝斯虫抗体阳性率的影响，确定牦牛双芽巴贝斯虫感染的风险因素。以P＜0.05时作为具有显著统计学意义的判断标准。本实验中所有数据均采用统计软件PASW Statistics 18.0进行统计分析，进而得到结果的优势比（odds ratio，OR）和95%的置信区间（95%confidence interval，95%CI）。当OR值＝1，表示该因素不起作用；OR值＞1，表示该因素属于危险因素；OR值＜1，表示该因素属于保护因素。

2 结果与讨论

本研究对甘肃玛曲地区600份牦牛血清样品进行血清学检测，其中发现134份双芽巴贝斯虫抗体阳性样品，总体阳性率为22.33%（表1）。该结果明显高于Saravanan等[13]使用PCR方法调查的印度阿鲁纳恰尔邦地区牦牛双芽巴贝斯虫感染率（5.32%），也高于Qin等[14]采用ELISA方法检测的甘肃天祝地区白牦牛双芽巴贝斯虫抗体阳性率（17.76%），与杜晓杰等[15]采用ELISA方法检测的新疆地区牦牛双芽巴贝斯虫感染结果（19.05%）接近。以上不同的调查结果可能是由于各地传播媒介蜱的分布、调查的种群数量、检测方法的特异性和敏感性、气候条件和牧场管理方式的差异造成的。

在不同性别分组中，公牦牛和母牦牛双芽巴贝斯虫感染率基本持平，分别为22.47%和22.99%。结果显示不同性别牦牛感染双芽巴贝斯虫的结果差异性不显著，该分析结果与Qin等[14]的调查结论一致。初步推测，玛曲牧区牦牛饲养方式为粗放型自由放养，公牦牛和母牦牛长时间频繁接触，增大了双芽巴贝斯虫在公、母牦牛间互传的风险，导致公、母牦牛双芽巴贝斯虫感染率异常接近。但是要获得更加科学、全面的原因仍需大量实验做进一步调查研究。

在不同采样季节分组中，发现夏季牦牛感染双芽巴贝斯虫的阳性率最高（28.40%），其次分别为春季（25.96%）、秋季（19.91%）和冬季（14.12%）（表1）。结果分析表明，不同季节牦牛双芽巴贝斯虫感染的结果存在有规律的变化，相比秋冬季节，春夏季节牦牛双芽巴贝斯虫感染率较高，属于易感季节。导致上述原因可能是由于春季和夏季温暖、湿润的气候条件更加适合传播媒介蜱的生存和繁殖，而秋季和冬季寒冷、干燥的气候条件不利于蜱的传播和扩散，从而降低了牦牛双芽巴贝斯虫的感染率[16]。

不同年龄段的牦牛均可感染双芽巴贝斯虫，且牦牛双芽巴贝斯虫感染率为16.27%～27.53%，其中1岁＜年龄≤2岁的牦牛感染率最高，而0岁＜年龄≤1岁的牦牛感染率最低（表1）。本试验采用二元logistic回归分析方法对此次检测结果进行统计分析，发现只有年龄是牦牛巴贝斯虫感染的风险因素（P＜0.05），该分析结果与Costa等[17]报道的结果一致。各个年龄段牦牛均有不同程度双芽巴贝斯虫感染，感染率最大相差10%以上。统计分析显示，2岁＜年龄≤4岁和1岁＜年龄≤2岁的牦牛获得双芽巴贝斯虫感染的风险均是0岁＜年龄≤1岁耗牛参考值的2.0倍（OR＝1.955，95% CI＝1.085～3.522，P＜0.05），但年龄＞4岁和0岁＜年龄≤1岁之间在牦牛双芽巴贝斯虫感染结果上不具有显著性差异（P＞0.05）（表2）。研究结果表明，年龄是牦牛双芽巴贝斯虫感染的诱发因子，在一定年龄范围内，牦牛双芽巴贝斯虫感染率随着年龄的增长而相应升高。

综上所述，甘肃玛曲地区牦牛双芽巴贝斯虫感染的总阳性率为22.33%。表明该地区牦牛双芽巴贝斯虫感染的总体情况较严重，应该引起人们的高度重视。建议有关部门对双芽巴贝斯虫病流行地区采取有效的防控措施以避免其扩散传播，确保当地藏民的经济效益。

表1 甘肃玛曲地区牦牛双芽巴贝斯虫感染结果Table 1 Seroprevalence of Babesia bigemina infection in yaks in Maqu，Gansu province

表2 影响牦牛双芽巴贝斯虫感染的年龄风险因素统计结果Table 2 Odds ratios for ages of yaks as risk factors for Babesia bigemina seroprevalence

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SEROPREVALENCE INVESTIGATION AND RISK FACTORS OF BABESIA BIGEMINA INFECTION IN YAKS IN MAQU AREA, GANSU PROVINCE

QIN Si-yuan1,2, CHU dong1, WU Chang-jiang1, SUN He-ting1, GENG Hai-dong1, XIE Lin-hong1,YIN Ming-yang1, TAN Qi-dong2,3, ZHOU Dong-hui2

(1. General Station for Surveillance of Wildlife Diseases & Wildlife Borne Diseases, State Forestry Administration (SFA), Shenyang 110034,China; 2. State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology, Lanzhou Veterinary Research Institute, CAAS, Lanzhou 730046, China; 3.Animal Quarantine Station of Beijing Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Beijing 101312, China)

S852.723

B

1674-6422（2017）04-0056-04

2016-11-17

国家公益性行业（农业）科研专项经费项目（201303037）

秦思源，男，硕士，助理工程师，主要从事野生动物疫源疫病监测管理与研究工作

周东辉，E-mail：zhoudonghui@caas.cn