多功能超高倍显微分析仪在检测男性泌尿道病原体感染中的应用

广东省工伤康复医院（510440）刘金华 简庆佳 陈晖 邱辉强 黄健林 刘建文

近年来，国内男性发生泌尿生殖道疾病感染率呈现出逐年上升的趋势，特别是性传播疾病（STD），并且在不断增加多种病原体合并感染的数量[1][2][3]，尤其是在南方沿海地区，会严重危害男性身心健康。传统培养、PCR、免疫学检验等检测方法，是检测男性病病原体的主要措施，但因为存在操作繁琐、复杂，费用高，时间长等的影响，容易导致发生漏诊的现象[1]，在门诊患者应用中存在一定的限制。本文采取TH—II型超高倍显微进行系统分析，实行取样涂片活体镜检方法，现对我院自2014年12月～2015年10月间来自泌尿外科门诊收治以及住院实施生殖道体液检测的986例患者展开了研究，对临床涂片观察结果进行以下报告。

附表 病原体分布表[n(%)]

1 材料与方法

1.1 临床资料 选取我院泌尿外科收治的986例男性患者，其中取材尿道分泌物345例，精液116例，前列腺液525例，最大年龄70岁，最小年龄17岁，平均年龄35岁，最多的是22～45岁年龄段。

1.2 取样方法

1.2.1 尿道分泌物 消毒处理尿道口，将男性拭子插入患者尿道大约2～3cm，旋转，停留大约30S然后取出拭子进行检查。

1.2.2 前列腺液 排空患者尿液，从肛门内开始对前列腺进行按摩，收集尿道口前列腺液，并且放置在无菌试管中进行送检。

1.2.3 精液 采取常规取精液法，放置在无菌试管中进行送检。

1.3 仪器与观察方法

1.3.1 仪器 利用清华同方神火科技公司生的TH—II型超高倍显微进行系统分析，仪器特点：有效分辨率达0.25um，放大倍率为20000倍，共轭变焦，高清晰度，无级变倍，横向放大倍数为120～20000，可以随意调整；中心可以免调试，明暗场能够进行快速转换，可以显著观察明场、暗场的差距，然后利用多媒体计算机技术并且配合大屏幕，具有实时冻结、真彩色、回放、动静态存储、检索、查询、打印等特点[2]。

1.3.2 方法 在洁净玻片上直接将送检标本制成厚涂片，压上盖片，同时在TH—II型超高倍显微镜下进行活体观察，依据实际需要选择不同的视场镜检。镜检内容主要有：衣原体、支原体、线索细胞、双球菌、梅毒螺旋体、杜克雷嗜血杆菌等，同时给予常规检验的各类标本数据。

1.4 诊断标准

1.4.1 支/衣原体活体检查，具有以下特点：①衣原体与支原体的大小处于病毒以及细菌之间，在放大万倍的时候存在低于球菌的颗粒泳动，并且活跃度高于一般球菌泳动，存在不定的颗粒运动方向[3]。②上皮细胞内存在相同颗粒的不停泳动。③上皮细胞内有繁殖体或者包涵体（内含不停泳动的颗粒）。④上皮细胞外存在游离的包涵体，依据滚动式朝着前方游动，白细胞朝支原体方向进行变形运动，促使细胞表面附着支原体，并进行吞噬、吞饮，进而杀伤降解吞噬体的支原体。虽然支原体包涵体存在于细胞内、外，衣原体仅仅出现在细胞内，但是因为两种原体大小以及形态比较相似，检查时比较常见的为细胞内外均存在，如果仅仅依据人为镜下观察不能对两者进行良好的区分；所以，检测过程中将两者统称为支/衣原体感染。结果符合参照新编临床检验图谱以及曹兴午拟订标准[4][5]。

1.4.2 双球菌活体检查 基于相差视野情况下能够对细胞内、外着色相对比较深的双肾形淋球菌结构进行观察，345例尿道分泌物标本中可以检出66例细胞内双球菌，占据总数的19.1 %；细胞内外均检出35例双球菌，占据总数的10.1%，同时实施革蓝氏染色。

1.4.3 念珠菌与线索细胞的活体检查

1.4.3.1 念珠菌（霉菌） 基于相差视野情况下可以检测出芽生孢子、真菌孢子以及假菌丝，然后结合革蓝氏染色给予相应报告[4]。1.4.3.2 线索细胞（加德纳杆菌） 引发女性细菌性阴道炎中加德纳杆菌（GV）是常见病原体，经检查得出目前男性也存在不低的感染率，一般都是双重感染，在986例标本中检出137例阳性，占据总数的13.9%，98例双重感染，占据71.5%。

1.4.4 其他病原体涂片活检 取患者体表溃烂处皮肤制作印片，加盖片之后基于暗视野中对活动梅毒螺旋体进行直观观察，利用相差视野显微设备还能够直观、方便的观察出各类球菌、滴虫及杆菌[5]。

2 结果

986例次标本中的病原体分布，以支/衣原体感染率最高，检出292例，占总标本例数的30%，其次是念珠菌和线索细胞，结果见附表。

3 讨论

泌尿生殖道感染是因不同因素引发的疾病，一般显微镜仅仅只能观察到比较大的病原体，例如加德纳杆菌、念珠菌以及滴虫等，一般来说支原体大小在0.3～0.5um范围内，呈高度多形性，无细胞壁，存在杆形、球形、丝状等多种形态；在体内衣原体存在两种形式，一是直径约0.1～0.5um的原体，另一形式为直径约为0.6～1.2um的繁殖体，利用用普通光学显微镜不能检测到如此微小病原体，目前国内近年来寻找的主要方式为简便、准确、快速的非培养检测生殖系统病原体感染。多功能超高倍显微分析系统是属于超高倍率显微放大系统之一，设备使用独有的共轭放大技术，存在120～20000的倍率变化范围，达到0.25um的分辨率，是完美结合数字化图像处理与显微放大技术的检测方式。在不同视野下应用超高倍显微分析仪可对活体动态直接进行镜检，可以检测出男性泌尿道感染的主要原因，例如衣原体、支原体、念珠菌、淋病双球菌等。本文在统计了986例男性标本病原体数据之后发现，662例结果显示为阳性标本，阳性率占据67.1%，其中292例支/衣原体感染，占44.1%，是所有当中感染率最高的；69例淋病双球菌感染，占10.4%，一般都是双重感染；44例精液中支/衣原体感染，阳性率37.9%，是引发致男性不育的根本因素[6]。