Toll样受体4和转化生长因子-β1在子宫内膜癌中的临床表达

杨 莉 韩 萍 王秀娟 代 娟

华北理工大学附属医院妇产科 河北唐山 063000

Toll样受体4和转化生长因子-β1在子宫内膜癌中的临床表达

杨 莉 韩 萍 王秀娟 代 娟

华北理工大学附属医院妇产科 河北唐山 063000

①目的 检测Toll 样受体4 (TLR4) 和转化生长因子-β1 (TGF-β1)在子宫内膜癌中的表达及意义。②方法 应用免疫组化法检测正常增生期子宫内膜组织标本30 例、不典型增生子宫内膜组织标本30 例和子宫内膜癌组织标本60例中TLR4 和TGF-β1的表达情况。③结果 TLR4 和TGF-β1在子宫内膜癌中的表达显著高于正常增生期子宫内膜组织和不典型增生子宫内膜组织，差异均有统计学意义 (P<0.05) ；TLR4在子宫内膜癌中的表达与肌层浸润、淋巴结转移有关(P<0.05); TGF-β1在子宫内膜癌中的表达与病理分期、肌层浸润和淋巴结转移相关(P<0.05)。TLR4和TGF-β1在子宫内膜癌中的表达呈正相关(P<0.05)。④结论 TLR4 和TGF-β1的阳性表达与子宫内膜癌的发生、发展及恶性程度有一定的关系。

子宫内膜癌 Toll样受体4 转化生长因子-β1

子宫内膜癌( endometrial carcinoma，EC) 是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，威胁着女性的健康和生命，其发生发展的分子调控机制仍不明确。Toll样受体4(TLR4)是最早发现的Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)亚型之一，在炎性疾病、组织纤维化疾病及多种实体肿瘤的发生发展中发挥重要作用[1,2]。转化生长因子β-1 ( transformation growth factor β1，TGF-β1) 是一种多功能细胞因子，调控细胞的生长和分化，其在不同肿瘤中对肿瘤的发展起到不同的作用[3]。TLR4 和TGF-β1在子宫内膜癌中的研究较少且结论不一致。本研究旨在观察及分析TLR4 和TGF-β1在不同类型子宫内膜病变中的表达及其与子宫内膜癌临床参数的关系，为子宫内膜癌发生发展机制的研究提供理论基础。

1 材料与方法

1.1材料 选取2013年9月～2016年4月华北理工大学附属医院病理科子宫内膜癌蜡块包埋组织60例，正常增生期及不典型增生子宫内膜蜡块包埋组织各30例。所有病例均经病理组织学确诊，并且术前均未接受放疗、化疗或激素治疗。兔抗人TLR4 和TGF-β1多克隆抗体均购自美国SANTACRUZ试剂公司, 二抗免疫组化试剂盒(PV6001)及二氨基联苯胺(DAB)显色剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2方法 采用免疫组化S-P法检测TLR4及TGF-β1在正常增生期子宫内膜、不典型增生子宫内膜、子宫内膜癌组织中的表达。石蜡包埋组织标本进行4μm连续切片。二甲苯脱蜡，梯度酒精至水，枸橼酸缓冲液微波热修复抗原，0.3%过氧化氢(H2O2) 阻断内源性过氧化物酶室温20分钟。正常山羊血清室温封闭20分钟后加一抗。4℃过夜，PBS震洗三遍，加入二抗37℃孵育60分钟，免疫组化试剂DAB显色5～10 分钟，苏木素复染、脱水、透明、中性树脂封片。

1.3结果判定 TLR4以光镜下胞膜和/或胞浆呈淡黄至棕黄色颗粒为阳性标志。TGF-β1以光镜下胞浆呈淡黄至棕黄色颗粒为阳性标志。结果判定采用半定量积分法。每张切片于400倍镜下随机选取5个视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，根据阳性细胞比例及着色程度记分：①阳性细胞比例记分：≤25% 以下为1分，26%～50%为2分，>50%为3分；②着色程度记分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，深棕色为3分。根据二者乘积将≥2分定义为阳性表达。

1.4统计学方法 采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。TLR4和TGF-β1的表达与子宫内膜癌组织临床病理学参数之间的关系采用χ2检验，采用Logistic回归法行多因素分析，TLR4和TGF-β1表达相关性采用Spearman相关分析，P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1TLR4、TGF-β的表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系 在子宫内膜癌中TLR4的阳性表达率与子宫肌层浸润和淋巴结转移有关(P<0.05)，提示在子宫内膜癌的发生发展中TLR4阳性表达与子宫内膜组织恶变、侵袭进展有关；与患者年龄、绝经与否、组织学分级、病理分期无关(P>0.05)。TGF-β1的阳性表达与组织学分级、病理分期、肌层浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)；TGF-β1阳性表达反映肿瘤的局部浸润能力与转移的能力，与肿瘤的转移、分期及预后相关；与患者年龄、绝经与否无关(P>0.05)，见表1。

2.2TLR4、 TGF-β1的表达与子宫内膜癌临床特征的关系 将患者年龄、绝经与否、组织学分级、病理分期、子宫肌层浸润和淋巴结转移等数据进行汇总，进行Logistic回归法行多因素分析。结果显示：病理分期、子宫肌层浸润和淋巴结转移均是子宫内膜癌的TLR4阳性表达的影响因素(均P<0.01)。病理分期、组织分级、子宫肌层浸润和淋巴结转移与子宫内膜癌的TGF-β1阳性表达密切相关(均P<0.01),见表2，表3。

表1 TLR4和 TGF-β1在子宫内膜癌中的表达情况

注：*P<0.05

表2 子宫内膜癌中TLR4的表达与临床病理参数的多因素分析

表3 子宫内膜癌中TGF-β1的表达与临床病理参数的多因素分析

2.3TLR4和 TGF-β1在子宫内膜癌中表达的相关性 在子宫内膜癌中TLR4的阳性率为70%(42/60)，TGF-β1的阳性率为71.7%(43/17)，Spearman相关分析法显示TLR4和TGF-β1在子宫内膜癌中的表达呈正相关(r=0.344，P=0.011)，见表4。

表4 TRL4和TGF-β1在不同子宫内膜组织中的表达情况

3 讨论

子宫内膜癌在我国的发病率逐年增高，随着肿瘤分子诊断以及靶向治疗的进展，越来越多的研究向分子水平、基因水平深入。目前尚无用于子宫内膜癌的分子诊断及预后的分子标志物。

TLR4 是Toll 样受体重要的成员之一，既往研究认为其主要分布于各类免疫细胞，介导免疫及炎症反应。近年来，大量研究证实TLR4 在多种肿瘤中有异常表达，其在妇科肿瘤卵巢癌、宫颈癌的表达均高于正常组织，起促进肿瘤发展的作用[4,5]。而在子宫内膜癌中的表达却不一致。Allhorn等[6]研究了月经周期子宫内膜、子宫内膜异位症、绝经后子宫内膜、子宫内膜增生及子宫内膜癌中TLR3和TLR4的表达。与正常组织相比，TLR4 mRNA的表达在增生期子宫内膜及子宫内膜癌中明显减少，在异位子宫内膜异位症病灶中显著增加。其中，TLR4在低分化(3级)子宫内膜腺癌中表达最低。而也有研究显示子宫内膜癌组织中的TLR4显著高于正常子宫内膜组织及增生期内膜组织[7,8]。本研究结果显示，子宫内膜癌组织中TLR4阳性表达显著高于正常增生期和不典型增生子宫内膜组织。推测TLR4在子宫内膜由不典型增生转变为子宫内膜癌的过程当中，被逐步激活，其表达与子宫内膜癌的发生发展有密切关系。

TGF-β1是TGF-β超家族的一员，无论在生理及病理情况下都对细胞的生长和分化起重要的调节作用；与TLR4相似，其对于肿瘤细胞也起双向调节作用, 在肿瘤形成早期能抑制肿瘤形成,而在肿瘤的发生、发展过程中则有促进作用[9,10]。TGF-β1 在子宫内膜癌组织中的表达显著高于正常增生期及不典型增生子宫内膜组织, 并且其表达与TLR4均与子宫内膜癌的临床病理分期、浸润肌壁深度、淋巴结转移相关，说明TGF-β1与 TLR4在子宫内膜癌发生发展过程中均起到了促进的作用。本研究结果表明，两者在子宫内膜癌的表达具有正相关性，提示两者可能在子宫内膜癌发展中存在一定的联系，但二者在体内是否存在相互调控以及如何相互作用, 尚需进一步研究证实, 以更深入地探讨子宫内膜癌的发病机制。

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[8] 余晓茹.Toll样受体4和核因子-κB p65在子宫内膜样癌中的表达[J].新乡医学院学报,2015,32(2):157-159

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(2017-03-29 收稿)(张爱国 编辑)

ExpressionandclinicalcharacteristicsofTLR4andTGF-β1inendometrialcarcinoma

YANG Li,HAN Ping,WANG Xiujuan,et al

(Department of Obstetrics and Gynecology,Affiliated Hospital of North China University of Science and Technology,Tangshan 063000,China)

ObjectiveTo investigate the expression and significance of TLR4 and TGF-β1 in endometrial carcinoma.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the TLR4 and TGF-β1 expression in specimens of normal proliferative phase of endometrial tissues (30 cases), atypical endometrial hyperplasia tissues (30 cases) and endometrial carcinoma (60 cases).ResultsThe expression of TLR4 and TGF-β1 in endometrial carcinoma was significantly higher than that in normal proliferative phase of endometrium and atypical endometrial hyperplasia tissues (P<0.05);TLR4 expression was significant associated with myometrial invasion and lymph node metastasis in endometrial carcinoma (P<0.05); TGF-β1 expression was significant associated with pathological stage, muscle infiltration and lymph node metastasis in endometrial carcinoma (P<0.05).Expression of TLR4 and TGF-β1 in endometrial carcinoma was positively correlated (P<0.05).ConclusionThe positive expression of TLR4 and TGF-β1 have a certain relationship with the occurrence, development and malignancy degree of endometrial carcinoma.

Endometrioid carcinoma.Toll-like receptor 4,TLR4. Transformation growth factor β1,TGF-β1

R 737.33

A

2095-2694(2017)05-361-04

杨 莉(1978-)，女，硕士研究生、主治医师。研究方向：妇科肿瘤。

韩 萍。