HPLC法测定降脂颗粒中大黄素的含量

沈 伟

（上海市宝山区中西医结合医院药剂科，上海 201999）

HPLC法测定降脂颗粒中大黄素的含量

沈 伟

（上海市宝山区中西医结合医院药剂科，上海 201999）

目的 建立HPLC法测定降脂颗粒中大黄素的含量。方法 采用C18(5μm，4.6×250 mm)为色谱柱，以甲醇-0.1%磷酸(83∶17)为流动相，检测波长为289 nm，流速为1.0 mL/min的色谱条件进行大黄素含量测定。结果 大黄素在0.406～2.032μg范围内呈现良好的线性关系，r=0.9998，平均加样回收率为99.82%，RSD=1.75%。结论 本法简便、准确，重现性好，可作为降脂颗粒的质量控制方法。

降脂颗粒；HPLC；大黄素；中药化学

Abstract:Objective To establish method for determination of emodin content in Jiangzhi granules by HPLC method.Methods The chromatographic column:C18 (250 mm x 4.6mm,5μm),and Methanol-0.1%phosphoric acid (83∶17)was used as the mobile phase.The flow velocity was l mL/min,and detection wave length was 289 nm.Results Emodin showed good linear relationship in the range of 0.406～2.032μg,r=0.9998,and the average recovery rate was 99.82%,RSD=1.75%,Conclusion The method is simple,accurate and reproducible,and can be used as quality control method of Jiangzhi granules.

Keywords: Jiangzhi granules;HPLC;emodin;chemistry of Chinese materia medica

降脂颗粒为临床经验方，由制何首乌、丹参、荷叶、桑寄生、山楂、草决明等7味中药组成的复方中药制剂，具有补肝益肾、降压降脂的功效，临床上广泛用于肝肾不足、虚阳上亢型的高脂血症。方中何首乌为蓼科植物何首乌 (Polygonum muhiflorum)的干燥块根，是本制剂的重要组成药物，其有效成分为蒽醌类化合物，其中大黄素含量较高，是何首乌的主要活性成分之一，具有多方面的生物活性[1]，制剂中常选用大黄素作为质量控制的指标，因此，为了有效控制降脂颗粒质量，保证降脂颗粒的临床疗效，本研究中以方中主药首乌的有效成分大黄素作为指标成分，采用高效液相色谱(HPLC)法直接测定大黄素的含量，该方法专属性强、快速准确，方法简便，现将结果报道如下。

1 仪器与试剂

Agilent高效液相色谱仪 (四元泵，DAD检测器，自动进样器)，Agilent1200工作站；FA1004型电子分析天平 (上海书培实验设备有限公司)。大黄素对照品 (购自中国药品生物制品检定所，批号：120902-20160)；降脂颗粒（系自制）；水为超纯水，甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

2 方法

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18柱 (250 mm×4.6 mm， 5μm)；流动相：甲醇-0.1%磷酸（83-17）；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；检测波长：289 nm；进样量10μL。在此条件下，大黄素与其他色谱峰分离良好，理论板数以大黄素计算，应不低于3000.

2.2 对照品溶液的制备 取大黄素对照品，精密称取大黄素20.321 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（81.284 μg/mL）。

2.3 供试品溶液的制备 取降脂颗粒剂适量，研细，取5 g，精密称定，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL使溶解，加盐酸2 mL，三氯甲烷30 mL，水浴加热回流1 h，冷却后分取氯仿层，酸水层用氯仿提取3次，每次20 mL，合并氯仿，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液[2-3]。

2.4 阴性对照试验 按处方取缺首乌的阴性药，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液，进样，依法测定，结果阴性对照液在相同位置处无与大黄素相对应的色谱峰，表明处方中其它药材和辅料不干扰大黄素的测定。

2.5 线性关系的考察 分别精密吸取对照品溶液5，10，15，20，25μL进样，以峰面积 (Y)对进样量(X)进行回归，大黄素的回归方程为Y=465.8X+120.73，r=0.9998，表明进样量在0.406～2.032μg范围内，线性关系良好。

2.6 精密度实验 精密吸取上述对照品溶液10μL，按照上述色谱条件连续进样6次，测定大黄素峰面积值，计算大黄素RSD为1.23%，结果表明精密度良好。

2.7 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液10μL，分别于0，2，4，8，24 h测定，记录大黄素峰面积，结果RSD为1.76%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。2.8重复性实验 精密称取同一批次的样品6份，按照供试品溶液制备方法得到供试品溶液，依上述色谱条件测定大黄素的含量，计算大黄素RSD为1.89%，表明本方法重复性良好。

2.9 加样回收率实验 采用加样回收法测定，取已知含量的样品（批号：161201） 研细，取约1.5 g，精密称定，精密加入大黄素对照品适量，制成各自的供试品溶液，依法测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.10 样品测定 取3批样品，各取5 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，10μL进样。结果见表2。

表2 样品测定结果 (μg/g)

3 讨论

首乌药材中大黄素的提取方法采用甲醇，加热回流法提取[4]，本研究中，采用甲醇超声处理，酸化，三氯甲烷萃取来提取大黄素，采用的流动相是甲醇-0.1%磷酸（83-17），在此色谱条件下，可使大黄素获得良好的分离，峰形较好，理论板数高。对于测定波长的选定，我们通过用紫外分光光度计进行扫描，对照品和供试品的甲醇溶液均在289 nm波长处有最大吸收，故选择289 nm为检测波长[5]。试验中曾考察了三氯甲烷萃取1次，萃取2次，萃取3次，萃取4次，结果表明，萃取3次，与三氯甲烷萃取4次，效果相当，为了节省资源，简单方便，选择三氯甲烷萃取3次，同时对三氯甲烷每次萃取用量做了比较，分别每次30 mL，每次25 mL，每次20 mL，结果表明，每次20 mL后含量不再增加，故选择三氯甲烷萃取，每次20 mL。

[1]黎颂华.何首乌的药理分析及临床应用研究[J].中国社区医师，2017，33(7):21-23.

[2]文中湘.HPLC法测定养心降脂颗粒中大黄素的含量[J].中国实用医药，2009，4（16）：160-161.

[3]丁雁南，李群芳，张倩茹，等.高效液相色谱法测定天麻首乌胶囊中大黄素的含量[J].遵义医学院学报，2009，32（6）：602-604.

[4]黄玉剑，王秦勇，丁瑾，等.何首乌生品及不同炮制品中大黄素含量测定[J].陕西中医，2013，34（9）：1220-1222.

[5]丁晓彦，刘青，贾元印，等.HPLC法测定首乌益智胶囊中大黄素和大黄素甲醚的含量[J].山东科学，2015，29（5）：36-40.

徐大椿对临床使用人参的告诫

清·徐大椿在 《神农本草经百种录》有详细论述：“凡补气之药皆属阴，惟人参能补气，而体质属阴，故无刚燥之病，而又能入于阴分，最为可贵。然力大而峻，用之失宜，其害亦甚于他药也。今医家之用参救人者少，杀人者多。盖人之死于虚者十之一二，死于病者十之八九。人参长于补虚，而短于攻疾。医家不论病之已去未去，于病久，或体弱，或富贵之人，皆必用参。一则过为谨慎，一则借以塞责，而病家亦以用参为尽慈孝之道，不知病未去而用参，则非独元气不充，而病根遂固，诸药罔效，终无愈期。故曰杀人者多也。或曰：仲景伤寒方中，病未去而用参者不少，如小柴胡、新加汤之类。何也？曰：此则以补为泻之法也。古人曲审病情至精致密，知病有分有合。合者邪正并居，当专于攻散；分者邪正相离，有虚有实。实处宜泻，虚处宜补。一方之中，兼用无碍，且能相济，则用人参以建中生津，拓出邪气，更为有力。若邪气尚盛而未分，必从专治，无用参之法也。况用之亦皆入疏散药中，从无与熟地、萸肉等药同入感证方中者。明乎此，而后能不以生人者杀人矣。人参亦草根耳，与人殊体，何以能骤益人之精血。盖人参乃升元气之药，元气下陷，不能与精血流贯，人参能提之使起，如火药藏于炮内不能升发，则以火发之。若炮中本无火药，虽以炮投火中不能发也，此补之义也。”

——摘自祝之友教授《解读神农本草经》

Determination of Emodin Content of Jiangzhi Granules by HPLCMethod

SHENWei
(Department of Pharmacy,Baoshan District Hospital of Integrated Traditional Chinese Medicineof Shanghai,Shanghai201999,Chiina)

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.18.063

1672-2779（2017）-18-0144-02

2017-08-09）