中药烫伤膏组方醇提工艺的优化及体外抑菌活性

侯 爽，商学君，王 沛*

（1.长春中医药大学药学院， 长春 130117；2.吉林工商学院外国语学院，长春 130507）

·方药研究·

中药烫伤膏组方醇提工艺的优化及体外抑菌活性

侯 爽1，商学君2，王 沛1*

（1.长春中医药大学药学院， 长春 130117；2.吉林工商学院外国语学院，长春 130507）

目的 优选中药烫伤膏组方的醇提工艺条件并进行抑菌效果考察。方法 采用L9（34）正交试验法优选组方的醇提工艺，采用试管2倍稀释法测定MIC。结果 最佳工艺的影响因素：提取次数＞乙醇浓度＞料液比＞提取时间，提取液对细菌的抑制效果较好。结论 最佳工艺用为8倍药材量的60%乙醇溶液对药材提取，提取3次，每次提取90 min，且所得提取液抑菌效果明显。

中药烫伤膏；醇提工艺；抑菌浓度

Abstract: Objective To optimize the conditions of alcohol extraction of traditional Chinese medicine scald cream and study the antibacterial effect.Methods The L9(34) orthogonal experiment was used to optimize the alcohol extraction process, and the MIC was determined by 2-fold dilution.Results The optimum extraction conditions were as follows： extraction times＞ ethanol concentration＞ solid - liquid ratio＞ extraction time, and the extract had better inhibitory effect on bacteria.Conclusion The optimum process was extraction of 60% ethanol solution with 8 times the amount of herbs, extraction 3 times, 90 minutes extraction, and the antibacterial effect of the extract was obvious,it can be further studied.

Keywords: traditional Chinese medicine scald cream; alcohol extraction process; MIC

烫伤膏处方主要包括黄连、黄柏、黄芩、没药等药材。黄连、黄柏、黄芩均具有清热燥湿、祛火解毒之功效，没药可活血祛瘀、消肿止痛[1]，配伍使用可杀菌消炎、去腐生肌、促进肉芽组织及皮肤缘的快速生长。本文是在之前所做单因素试验的基础上，以提取所得小檗碱含量和挥发油含量之和为考察指标，进行正交实验以优化提取条件，小檗碱的含量通过紫外分光光度法测定，同时以最小抑菌浓度（MIC）为指标进行体外抑菌试验考察提取液抑菌活性[2-3]。

1 材料

1.1 仪器 粉碎机（北京中新），98-1-A型加热套（天津泰思特），TU-1810紫外可见分光光度计（北京普忻），旋转蒸发仪（上海远淮），蒸汽灭菌锅（济南来宝），电热恒温培养箱（金坛万华）。

1.2 药材 黄连、黄柏、黄芩、没药均购于中东城市万家医药超市，经鉴定符合《中华人民共和国药典》[1]中的各项规定；标准品盐酸小檗碱（3UGA-HEKE）购于国家药物和生物制品控制研究所。

1.3 菌株 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及大肠杆菌均由我校微生物实验室提供。

2 方法

2.1 组方醇提工艺的优化

2.1.1 浸膏的制备 黄连、黄柏、黄芩、没药适当破碎到1 000 mL 烧瓶中，加入一定量和一定浓度的乙醇溶液浸泡回流提取后，用挥发油提取器收集没药挥发油。加热回流结束后过滤，合并所有滤液。用浓盐酸将pH调节为1～2，浓缩[4]。

2.1.2 盐酸小檗碱含量测定 准确称取10 mg标准品放入500 mL容量瓶，无水乙醇溶解后定容，震荡均匀后浓度为 0.02 mg/mL。精确量取对照品溶液 1 、2 、3 、4 、5 、6 mL于10 mL容量瓶中，用乙醇稀释至刻度摇匀，浓度分别为 2、4、6、8、10、12 µg/mL，于 350 nm处测定吸光度。结果作线性回归，得盐酸小檗碱浓度C（mg/mL）与吸光度A的关系A=0.050 4C－0.052 3，r2=0.999 1，用这个方程计算小檗碱浓度和含量。

2.1.3 正交试验因素水平的确定 以早期单因素检验结果为前提，选择乙醇浓度（%）、料液比、提取时间（min）和提取次数4个因素，各因素选择3个水平进行正交设计[5-9]，见表1。

表1 提取工艺因素水平表L9（34）

2.2 体外抑菌实验

2.2.1 细菌悬浮液的制备 将试验菌种接种于琼脂培养基，37 ℃培养24 h，用生理盐水稀释细菌悬浮液0.5个麦氏浊度单位，冷藏备用[10-11]。

2.2.2 MIC的测定 采用试管2倍稀释方法测定MIC[12]。将提取液浓缩至100 mg/mL作为原液，取12个无菌试管，加入2 mL液体培养基，移取2 mL原液到1号试管并混合均匀，再从1号试管中移取2 mL加入2号试管并混合均匀，同样方法稀释至10号试管，10号试管需弃去2 mL，如此各管中药液浓度依次稀释为原液 的 1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/102 4。各试管中药液浓度分别为50 、25 、12.5 、6.25、3.125 、1.562 5 、0.781 25 mg/mL。11 号和12号试管分别作为阳性和阴性对照。将适量且等量的细菌悬浮液加到各试管中，37 ℃培养24 h后目视观察并记录MIC[13-14]。

3 结果

3.1 正交试验结果 根据表1进行试验，紫外分光光度法测定小檗碱含量，计算挥发油含量，以2种含量总和作为最终考察指标[15]，结果见表2和表3。

表2 正交试验结果

表3 方差分析表

3.2 最低抑菌浓度（MIC）测定结果 药液对以下几种细菌的MIC结果 见表4。

表4 组方提取液对细菌的最低抑菌浓度（MIC） mg/mL

4 小结

根据正交试验和方差分析结果可以看出，4个因素对提取结果的影响顺序为：D（提取次数）＞A（乙醇浓度）＞C（提取时间）＞B（料液比）。最佳的提取条件为A1B2C2D3，即选择浓度为60%的乙醇溶液，药材量与溶液量比例为1：8，回流90 min，提取3次时，所得到的浸膏中有效成分总含量最高。

由体外抑菌实验结果可知，该组方对由烧烫伤所产生的几种主要细菌种类具有良好的抑菌活性，其中对铜绿假单胞菌的抑制作用相对较强。但因实验条件和所需仪器设备过于简单，可能导致实验过程中对细节的控制不到位，难以精确计算最低抑菌浓度，尚需深入研究，实验结果有待进一步验证。

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Optimization of alcohol extraction technology of traditional Chinese medicine scald cream and study on its antibacterial activity

HOU Shuang1, SHANG Xuejun2, WANG Pei1*
（1.School of Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun 130117, China;2.School of Foreign Languages, Jilin Business and Technology College, Changchun 130507, China）

R283.6

A

2095-6258(2017)05-0714-03

2016-11-29）

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.05.009

吉林省科技厅科技支撑项目(20120446)。

侯 爽（1994 -），女，硕士研究生，主要从事中药制药工艺优化方面的研究。

*通信作者：王 沛，男，教授，电话-13578701293，电子信箱-1103463098@qq.com