FCM-DNA分析和SOD检测在恶性和结核性胸腔积液鉴别诊断中的作用

覃海媚，王荣，王春芳，韦叶生，王茂水，王新锋，王俊玲，王俊利

（1. 右江民族医学院附属医院生殖遗传学实验室，广西 百色 533000；2. 右江民族医学院附属医院检验科，广西 百色 533000；3. 山东省胸科医院检验科，济南 250013）

FCM-DNA分析和SOD检测在恶性和结核性胸腔积液鉴别诊断中的作用

Differential Diagnosis Using FCM-DNA Analysis and SOD in Malignant and Tuberculous Pleural Effusion

覃海媚1，王荣2，王春芳2，韦叶生2，王茂水3，王新锋3，王俊玲3，王俊利1

（1. 右江民族医学院附属医院生殖遗传学实验室，广西 百色 533000；2. 右江民族医学院附属医院检验科，广西 百色 533000；3. 山东省胸科医院检验科，济南 250013）

对150例胸腔积液标本利用流式细胞术DNA（FCM-DNA）分析及酶联免疫吸附法检测超氧化物歧化酶（SOD）。结果显示，细胞学、FCM-DNA分析及SOD检测恶性和结核性胸腔积液的准确度分别为80.7%、88.7%、62.0%，细胞学联合FCM-DNA分析或SOD检测的准确度分别为97.3%和92.0%。 FCM-DNA分析和SOD检测均可作为细胞学的重要辅助手段，细胞学联合SOD检查可降低费用。

FCM-DNA分析； 超氧化物歧化酶； 胸腔积液，鉴别

恶性肿瘤和结核病是引起胸腔积液的主要原因，恶性和结核性胸腔积液鉴别诊断是临床上一个棘手的问题。一直以来，细胞学检查是鉴别恶性和结核性胸腔积液的重要手段之一，但其灵敏度很低。研究［1-2］发现，流式细胞术DNA（flow cytometry，FCM-DNA）分析鉴别诊断胸腔积液性质的灵敏度和特异度均较高，可作为诊断胸腔积液性质的重要参考。但FCM-DNA分析费用较昂贵，不利于临床普及。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一种抗氧化酶，催化超氧离子转化成过氧化物和氧气，SOD检测主要应用于缺血、出血性心脑等重要脏器损伤。已有研究［3］表明SOD是鉴别恶性和结核性胸腔积液的重要诊断指标。本研究评价细胞学、FCMDNA分析及SOD检测3种方法在恶性和结核性胸腔积液中鉴别诊断价值，旨在选出准确度高且经济实用的联合诊断指标。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集2015年9月至2016年10月右江民族医学院细胞室检查的150例胸腔积液标本，其中女70例，男80例，年龄18～80岁，中位年龄56.5岁。150例标本均经过病理学、实验室检查、影像学或结合临床确诊，其中恶性胸腔积液70例：肺癌40例，肝癌10例，胃癌6例，胰腺癌5例，贲门癌3例，乳腺癌3例，卵巢癌2例，恶性胸膜间皮瘤1例；结核性胸腔积液80例。

1.2 实验方法

收集入院24 h内未经治疗患者的新鲜胸腔积液（约200 mL），50 mL胸腔积液离心后制成细胞片进行常规巴氏染色用于细胞学检查，50 mL胸腔积液备用于FCM-DNA分析，100 mL胸腔积液用于SOD检测。

1.2.1 细胞学检查：由3位细胞学诊断专家盲法阅片后判定结果。如存在疑惑，再由3位细胞病理学专家会诊判定。诊断结果分为2种：（1）见到癌细胞为恶性胸腔积液；（2）未见癌细胞为恶性胸腔积液。

1.2.2 FCM-DNA分析标本制备及检测：（1）单细胞悬液制备。取50 mL胸腔积液标本1 500 r/min离心5 min，用0.9%的NaCl 洗涤制备好的脱落细胞2次，再用70%乙醇固定4 h。（2）经Flow-Check 校准仪器的光路（HalfCV＜ 2%），再用淋巴细胞质控品（CYTO-TROL）校正仪器，确保质控的结果控制在参考范围内。（3）标本上机前用PBS缓冲液洗涤3次，使细胞浓度约为1×106/mL，再300目筛网过滤，除去细胞悬液中成团的细胞群，经1 000 r/min 离心5 min，弃去上清液。最后加入碘化丙啶（PI）染液（1 mL/管） 4 ℃下避光30 min。（4）采用流式细胞仪（美国BD公司，FACSCantoⅡ）进行细胞周期分析。用健康人群的外周血淋巴细胞作为DNA中正常二倍体的标准对照，采用Multicycle软件（Pheonix公司）分析细胞周期时相。以DNA指数（DNA index，DI）表示细胞核DNA含量，即DI=样品细胞的G0/G1峰均道值/正常淋巴细胞的G0/G1峰均道值。

根据文献［4］制定FCM诊断瘤细胞标准：（1） 除外正常二倍体 G0/G1峰出现的另一个G0/G1峰作为标准，DI值＞1.10 或＜0.90，且出现相应的G2/M峰。（2） 若在直方图中仅出现单一的G0/G1峰，则要求在细胞周期中的G2/M＞2.5%；G0/G1峰的变异系数（coefficient of variation，CV）比值超过正常CV比值的平均值2倍的标准差。（3） G0/G1峰出现明显不对称。（4） S期＞10%。符合以上任一项即为异倍体。

1.2.3 SOD检测：将100 mL胸腔积液置于低速离心机1 200 r/min，离心15 min，收集500 μ L上清液于EP管中，立即入-80 ℃中冻存备用，在酶联免疫吸附试验设备（美国伯乐化学发光系统）检测SOD的水平。根据前期研究［5］测定SOD在胸腔积液中的诊断点，以SOD含量＞41 U/L为阳性计数。

1.3 统计学分析

采用 SPSS 17.0软件进行统计学分析。2组率的比较采用χ2检验，P ＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 细胞学和SOD检测结果

细胞学检查在恶性和结核性胸腔积液中的准确度为80.7%。经SOD检测，70例恶性胸腔积液中发现43例阳性，80例结核性胸腔积液中50例为阴性，检测准确率为62.0%。见表1。

2.2 FCM-DNA分析结果

表1 恶性和结核性胸腔积液细胞学、FCM-DNA及SOD检测结果

70例恶性胸腔积液细胞发现58例为异倍体，主要为超二倍体。80例结核性胸腔积液细胞发现75例为正常二倍体，其余5例为超二倍体。DNA倍体分析检测恶性和结核性胸腔积液的准确度为88.7%，见表1、图1。

2.3 FCM-DNA分析、SOD 检测联合细胞学的结果

FCM-DNA分析、SOD检测与细胞学联合分析，以2个方法中出现1个实验呈现阳性即诊断为阳性（+）；以2个方法中出现1个阴性即诊断为阴性（-）。细胞学联合FCM-DNA分析的准确率为97.3%；细胞学联合SOD检测的准确率为92.0%；2者比较差异没有统计学意义（P ＞ 0.05）。见表2。

3 讨论

图1 胸腔积液脱落细胞 FCM-DNA分析

表2 FCM-DNA分析、SOD 检测联合细胞学检查结果

近年来，邢应如等［6］研究表明，FCM-DNA分析对恶性胸腔积液的诊断具有良好的临床价值；王应霞等［7］通过研究液基细胞学检测联合DNA倍体分析在良恶性胸腹水鉴别诊断中的应用价值，发现2者联合诊断后可明显提高恶性胸腹水的阳性诊断率。本实验通过评价细胞学、FCM-DNA和SOD 3种指标在鉴别诊断恶性和结核性胸腔积液中的应用价值，发现FCM-DNA分析的准确度高，达到88.7%；细胞学联合FCM-DNA分析的准确度为97.3%，与上述学者的研究结果相符。在结核分枝杆菌的培养物滤液蛋白中，SOD是最大的分泌蛋白之一，秦立龙［8］研究SOD联合腺苷脱氨酶检测在结核性胸腔积液中的诊断价值，发现SOD 联合检测对早期结核病有较高的诊断应用价值。本研究发现单纯SOD检测的准确度为62.0%，与细胞学检查联合的准确度为92.0%，与细胞学联合FCM-DNA分析的准确度相当，差异没有统计学意义（P ＞ 0.05）。

综上所述，细胞学联合FCM-DNA分析对恶性和结核性胸腔积液鉴别诊断的准确性最好，但费用昂贵，给患者增加负担。因此，细胞学联合SOD检测作为恶性和结核性胸腔积液鉴别诊断方法，准确率高、简便、费用低、更适用于临床。当然，后期仍需要进一步证实SOD在胸腔积液的诊断点，从而验证细胞学联合SOD检测指标的准确度。性肿瘤价值的Meta分析［J］. 中国医科大学学报，2015，44（02）：136-142.

［1］ 胡艳芬，陈龙，荆超，等. 流式细胞术检测DNA倍体数对鉴别良恶

［2］ 王俊利. DNA倍体分析联合多项肿瘤标记物测定对良恶性胸腹水的鉴别诊断价值［D］. 广西医科大学，2008.

［3］ WANG M，ZHANG Z，WANG X. Superoxide dismutase 2 as a marker to differentiate tuberculous pleural effusions from malignant pleural effusions［J］. Clinics，2014，69（12）：799-803. DOI：10.6061/clinics/2014（12）02.

［4］ 王俊利，农乐根，杨凤莲，等. DNA定量分析法联合癌胚抗原测定在良恶性胸水鉴别诊断中的应用［J］. 广西医学，2012，34（1）：29-32.

［5］ WANG XF，WU YH，JIAO J，et al. Diagnostic value of superoxide dismutase in tuberculous and malignant pleural effusions ［J］. Asian Pacific J Cancer Prev，2013，14（2）：821-824.

［6］ 邢应如，胡万发，杨路宝，等. DNA倍体联合肿瘤标志物检测在胸腔积液诊断中的应用［J］. 中国肿瘤外科杂志，2013，5（3）：151-155. DOI：10.3969 /j.issn.1674-4136.2013.03.004.

［7］ 王应霞，张旋，吴莹莹，等. 液基细胞学检测联合DNA倍体分析在良恶性胸腹水鉴别诊断中的应用［J］. 临床与实验病理学杂志，2016，32（10）：1152-1155. DOI：10.13315 /j.cnki.cjcep.2016.10.018.

［8］ 秦立龙. SOD联合检测在胸部结核病中的诊断价值［D］. 皖南医学院，2015.

（编辑 武玉欣）

R52；R730.4

B

0258-4646（2017）10-0946-03

http://kns.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20170927.1457.042.html

10.12007/j.issn.0258‐4646.2017.10.021

百色市科学研究与技术开发计划（20121603）

覃海媚（1991-），女，硕士研究生.

王俊利，E-mail：13907768146@163.com

2017-01-20

网络出版时间：2017-09-27 14:57