气相色谱法测定替格瑞洛原料药中6种残留溶剂*

杜 娟，魏双艳，徐晓阳，阴兆静，张玮杰，李惠举，徐 霞

郑州大学药学院药物分析教研室 郑州 450001

气相色谱法测定替格瑞洛原料药中6种残留溶剂*

杜 娟，魏双艳，徐晓阳，阴兆静，张玮杰，李惠举，徐 霞#

郑州大学药学院药物分析教研室 郑州 450001

替格瑞洛原料药；毛细管气相色谱法；残留溶剂

目的：建立替格瑞洛原料药中6种残留溶剂的测定方法。方法采用气相色谱法检测替格瑞洛原料药中甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、异辛烷、乙酸。色谱条件为DB-624(30 m×0.320 mm×1.8 mm)毛细管柱；载气采用高纯氮气，流速为1 mL/min；检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为250 ℃(空气流速)，进样口温度为200 ℃；程序升温，分流比201。结果6种有机溶剂在各自的检测质量范围内线性关系良好(r=0.998 31～0.999 99)，平均回收率为91.49%～100.48%(RSD=2.85%～7.17%，n=9)；甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、异辛烷、乙酸的定量限分别为7.92、7.89、6.29、0.90、0.23、4.20 mg/L，检测限分别为1.98、0.99、0.79、0.22、0.08、1.05 mg/L。用该方法测定3批次替格瑞洛原料药，只有乙酸乙酯和异辛烷被检出但均符合标准，其他残留溶剂未检测到。结论该方法操作简便、稳定、重复性好，可用于替格瑞洛原料药中上述6种残留溶剂的测定。

替格瑞洛(ticagrelor)是一种新型环戊基三唑嘧啶类口服抗血小板药物，作用于血小板细胞膜上的嘌呤2受体(purinoceptors 2，P2)亚型P2Y12，对二磷酸腺苷(ADP)引起的血小板聚集有明显的抑制作用。替格瑞洛为非前体药，是一种可逆的P2Y12受体抑制剂[1-5]。气相色谱技术是药品中残留溶剂测定的首选技术，相关的应用不断地深入和更新[6-13]。据研究[14-16]替格瑞洛原料药在合成过程中使用了甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、异辛烷、乙酸等有机溶剂，而这些溶剂大部分属于二类、三类受控毒性溶剂。因此，为保证药品质量和用药安全，在制订质量标准时必须考虑该原料药中有机溶剂残留问题。按照2015年版《中国药典》(二部)要求及人用药品注册技术国际协调会(ICH)有机溶剂残留量指导原则，作者建立了基于毛细管色谱法、测定和验证替格瑞洛原料药中上述6种有机溶剂的检测方法，为替格瑞洛制剂的质量标准修订提供科学依据。

1 材料与方法

1.1原料、仪器与试剂配备氢火焰离子化检测器的Agilent 7890B型气相色谱仪(美国安捷伦公司)，NewClassic MF型电子分析天平。替格瑞洛原料药(由郑州大学药物合成实验室提供，批号150901、160301、160501)，甲醇和乙腈(质谱级，J.T.Baker)，乙醇和乙酸乙酯(优级纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)，异辛烷(优级纯，天津市光复精细化工研究所)，N,N-二甲基甲酰胺(DMF，色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)。

1.2检测方法的建立色谱柱为DB-624 (30 m×0.320 mm×1.80 mm)毛细管柱。采用程序升温法：初始温度40 ℃维持10 min，以50 ℃/min的速率升温至160 ℃维持4 min。以氮气为载气，流速1 mL/min，尾吹10 mL/min；进样口温度200 ℃；氢火焰离子化检测器温度250 ℃(空气流速)；进样方式为分流进样，进样体积1 μL，分流比201。

1.3溶液的制备①空白溶液：精密量取DMF 1 mL，置于进样瓶中，作为空白溶液。②对照品储备液：分别精密称取甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、异辛烷、乙酸适量于含有适量DMF的25 mL容量瓶中，充分振摇溶解，加DMF稀释至刻度，摇匀，配置成1 mL含有甲醇0.792 mg、乙醇0.789 mg、乙腈0.786 mg、乙酸乙酯0.897 mg、异辛烷0.692 mg和乙酸1.05 mg的混合溶液，作为对照品储备液。③对照品溶液：精密量取对照品储备液0.25 mL置25 mL容量瓶中，用DMF稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。④供试品溶液：取替格瑞洛原料药0.16 g,精密称定，置于2.0 mL容量瓶中，加DMF 2 mL振摇使之溶解，摇匀，作为供试品溶液。

2 结果

2.1系统适应性实验取对照品和供试品溶液，按1.2色谱条件进样，记录色谱图(图1)。结果显示，溶剂DMF不干扰测定，理论塔板数均不低于5 000，各相邻物质色谱峰的分离度均大于1.5。

1：甲醇;2.乙腈;3.乙醇;4.乙酸乙酯;5.异辛烷;6.乙酸。 图1 对照品(上)和供试品(下)溶液的毛细管气相色谱图

2.2线性关系、检出限和定量限分别取对照品储备液0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64 mL于2 mL容量瓶中，加DMF稀释至刻度，摇匀，得标准溶液。取上述溶液各1 mL置于进样瓶中，按照1.2项下色谱条件分别进样。分别以甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、异辛烷、乙酸的质量浓度(c)为横坐标、峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线。将标准溶液逐级稀释，进样测定，记录色谱图及结果，直至信噪比为101和31，即得定量限和检测限。结果见表1。由表1可知，6种有机溶剂c在检测范围内与A均呈良好的线性关系，表明该方法可靠。

2.3加样回收率精密称取9份样品(批号160501)，每份0.16 g，至2 mL容量瓶，分别精密加入对照品储备液0.016、0.020、0.024 mL,再分别用DMF稀释至刻度，按1.2色谱条件进样测定，记录色谱图及结果，计算各有机溶剂的加样回收率，结果见表2。

2.4重复性取同一批样品(批号160501)5份，每份0.16 g，精密称定，按1.3项下的方法制备供试品溶液并测定。结果甲醇、乙醇、乙腈、异辛烷、乙酸均未检测出,乙酸乙酯平均含量为0.000 2%，RSD=1.27%，表明方法重复性良好。

2.5样品含量的测定取3个批号的替格瑞洛原料药各0.16 g，按1.2和1.3进行溶液配制和上样检测，结果甲醇、乙醇、乙腈、乙酸均未检测到，乙酸乙酯和异辛烷检测结果见表3。

表1 6种有机溶剂线性关系、检出限和定量限

表2 6种有机溶剂的加样回收率

续表2

表3 样品有机溶剂含量

3 讨论

3.1药物残留有机溶剂测定的必要性药物残留有机溶剂测定对于控制药品质量、保证用药安全、指导生产工艺改进都具有重要意义。根据《中国药典》2015年版(二部)要求及ICH的有关规定：药物中甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、乙酸的限度分别为0.3%、0.5%、0.041%、0.5%、0.5%；异辛烷属于第四类溶剂尚无足够的毒理学资料，如需在生产中使用这些溶剂，一般按未知单杂的限度控制，即大部分是0.1%。该研究中，用所建立的气相色谱法检测3个批号的替格瑞洛原料药中残留的有机溶剂，甲醇、乙醇、乙腈、乙酸均未检测到，乙酸乙酯和异辛烷的浓度在方法的线性方法内且含量也在限度范围内，结果准确可靠。

3.2色谱柱及色谱条件的选择由于这6种有机溶剂极性存在差异，因此不能在同一色谱条件下使用同一根色谱柱进行分离。在实验过程中，作者比较了不同极性色谱柱的分离效果，如强极性的DB-624、中等极性的DB-WAX和弱极性的HP-5-MS等毛细管柱。结果显示，在HP-5-MS上色谱峰拖尾严重，并且乙酸与DMF溶剂并未分离；在DB-WAX色谱柱上虽然各个色谱峰实现了分离，但色谱峰拖尾严重，并且所确定的检测限很高，若采用此色谱柱，所配置的样品的浓度很高，不能满足分析的要求。

甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯的沸点范围较窄(66.7～78.4 ℃)。由于色谱柱的温度对待测组分的分离影响较大，因此实验中评定色谱柱的起始温度分别为30、35、40、50、60、70 ℃，升温速率分别为10、20、30、40、50 ℃/min,最高温度150、160、180、200、220 ℃，观察色谱峰形、分离度等。结果显示，以40 ℃为初温、升温速率为50 ℃/min、最高温度为160 ℃时的色谱峰形尖锐美观，分离效果好。最终选择能实现这6种有机溶剂分离测定的DB-624毛细管柱，各待测成分互不干扰，整个分析过程在16.4 min内完成，快速简便。

3.3溶剂的选择及溶液的制备由于替格瑞洛在合成中使用了各种有机溶剂，待测溶剂种类繁多，极性差异较大，而且大多数的合成药物在DMF中均有较好的溶解，故选用溶解性好、沸点高且较为常用的DMF作为溶剂。在该实验色谱条件下，DMF在待测组分之后出峰，不干扰其他组分测定。对照品储备液应使各待测成分包含于该溶剂的线性范围内，故建议样品的浓度为80.0 g/L。由于多数有机溶剂的挥发性强，尤其是沸点低的溶剂，每次测定样品所用的对照品溶液需现用现配以确保定量的准确。

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(2016-12-09收稿 责任编辑王 曼)

Determination of six residual solvents in ticagrelor raw material by capillary gas chromatography

DUJuan，WEIShuangyan,XUXiaoyang,YINZhaojing,ZHANGWeijie,LIHuiju,XUXia

DepartmentofPharmaceuticalAnalysis,CollegeofPharmaceuticalSciences,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450001

ticagrelor raw material;capillary gas chromatography;residual solvent

Aim: To develop a method for the content determination of residual solvents in ticagrelor raw material including methanol,ethanol,acetonitrile,ethyl acetate,isooctane,and acetic acid.Methods: Capillary gas chromatography was adopted.The determination was performed on DB-624(30 m×0.320 mm×1.8 mm) capillary column, a flame ionization detector(FID) and the external standard method were used for the separation and quantitative analysis．The condition was that the injector temperature was 200 ℃, the FID temperature was 250 ℃ and the residual organic solvents were determined by the split injection mode. Results: The good linear range of the 6 kinds of residual solvents had been obtained(r=0.998 31-0.999 99) with average recoveries of 91.49%-100.48%(RSD=2.85%-7.17%,n=9).The limits of quantification of the 6 kinds of residual solvents were 7.92,7.89,6.29,0.90,0.23 and 4.20 mg/L; the detection limits were 1.98,0.99,0.79,0.22,0.08 and 1.05 mg/L .The proposed method was successfully applied to analyze the residual organic solvent in the real sample of ticagrelor raw material, and the results showed that only ethyl acetate and isooctane were detected in the samples. Conclusion: The method is rapid, stable and repeatable for the content determination of the 6 kinds of residual solvents in ticagrelor raw material.

10.13705/j.issn.1671-6825.2017.05.026

*河南省科技厅基础与前沿技术研究计划项目 142300410085；郑州市国际科技合作与交流项目 153PGJHZ204

R917

#通信作者，女，1995年4月生，博士，教授，研究方向：药物分析，E-mail:xuxia@zzu.edu.cn