肺结核患者肺泡灌洗液及外周血中T淋巴细胞亚群的表达

尤英霞，闫莎莎，黄庆红，常慧澜

(郑州市第六人民医院 呼吸三科，河南 郑州450000)

肺结核患者肺泡灌洗液及外周血中T淋巴细胞亚群的表达

尤英霞，闫莎莎，黄庆红，常慧澜

(郑州市第六人民医院 呼吸三科，河南 郑州450000)

肺结核的发病原因与机体的免疫功能有着密切关系，结核患者外周血免疫功能检测的报道较多，对于肺泡灌洗液的T淋巴细胞水平的研究相对较少[1]。本研究采用流式细胞仪对60例肺结核患者及40例健康体检者肺泡灌洗液(BALF)及外周血中T细胞亚群表达水平进行检测，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1临床资料

选取本院2015年1月-2016年6月收治的60例肺结核患者及40例健康体检者为研究对象，分为观察组和对照组。观察组中男37例，女23例，年龄23-72岁，平均年龄(43.23±14.34)岁。患者入选标准：(1) 入选者均符合《肺结核诊断和治疗指南》中的诊断要求；(2) 有咳嗽、咳痰、低热及痰中带血等症状；(3) X光检查可见肺部斑片状阴影；(4) 患者入院前未接受过抗结核病的治疗；(5) 患者均知情同意并签署知情同意书。对照组40例为健康体检者，其中男23例，女17例，年龄21-68岁，平均年龄(42.09±13.76)岁。入选标准：(1) 对照组患者无肺结核类相关症状；(2) 痰液结核分枝杆菌涂片及培养均阴性；(3) X胸片检查无肺结核病灶出现。排除标准：(1) 并发其他严重疾病的患者，包括心脑血管疾病、肿瘤癌症等；(2) 患有精神类疾病的受试者；(3) 妊娠和哺乳期妇女。组间患者在基线资料比较无差异性，P>0.05。

1.2 方法

患者在入院当天采集3 ml外周静脉血，保存在肝素钠抗凝管中。2 h内处理外周血样品，5 000 rpm离心10 min后，然后进行T细胞各项亚群细胞的检测。肺泡灌洗采用纤支镜在患者的肺部病变部位进行操作。操作前进行局部麻醉，采用奥林巴斯电子气管镜经口插入，其顶端紧密锲入病变段处(健康受试者统一灌洗右肺上叶)，由灌洗导管将30 ml生理盐水分次快速注入肺泡内，通过负压吸引回收，其回收率应不小于40%。除去肺泡灌洗液中的粘液并加入到硅塑瓶内，两小时内送检完毕。采用赛默飞Attune○RNxT 声波聚焦流式细胞仪对收集的样品进行T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8细胞)的检测分析，相关的单抗试剂盒均购置于美国赛默飞公司，相关检测操作均按照说明书严格进行。

1.3 统计学方法

数据处理采用SPSS 20.0进行相关操作，组间计量资料以均数±标准差表示，用t检验进行分析，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者BALF和外周T细胞对比

治疗前两组BALF和外周血中CD3、CD8比较无差别，P>0.05；观察组BALF及外周血中CD4、CD4/CD8低于对照组，P<0.05，结果见表1。

2.2 观察组不同治疗时间BALF和外周血T淋巴细胞水平比较

观察组治疗1个月后 CD4细胞水平升高，3个月后BALF和外周血中CD4、CD4/CD8水平比治疗前升高，P<0.05，结果见表2。

表1 两组患者BALF和外周血T淋巴细胞水平比较

注：与对照组相比，*P<0.05

表2 观察组不治疗时间BALF和外周血T淋巴细胞水平比较

注：与治疗前相比，*P<0.05。

3 讨论

近几年随着分子免疫学和细胞生物学科的快速发展， T细胞亚群在结核病发病过程中的重要作用得到确认[2]。CD4T淋巴细胞是一种辅助性的亚细胞群体，在肺结核免疫机制中占据重要地位，其水平值的降低提示机体有患肺结核的可能[3]。CD8细胞与CD4细胞有着相反的免疫效应，其水平值的增高提示疾病的病情加剧，治疗周期延长、增加治疗难度。对于肺结核患者T淋巴细胞的检测，常规外周静脉血的免疫细胞水平检测特异性不强，肺泡灌洗液可以较为准确的对患者的肺部免疫功能进行评价。丁士标等人[4]采用肺结核患者的肺泡灌洗液进行T淋巴细胞免疫功能方面的研究，建立了良好的诊断指标的相关性研究模型，提高了T淋巴细胞对肺结核诊断的特异性。Kumagai等[5]在研究中也表明肺泡灌洗液中T淋巴细胞的检测更能有助于对肺结核疾病的确诊。

本研究结果显示肺结核患者免疫功能的检测， BALF和外周血中CD4、CD4/CD8细胞水平值与正常组患者相比均有降低， BALF中CD4/CD8的数值下降是由CD4细胞减少和CD8细胞增多导致，外周血相应比值的降低则是单纯的CD4细胞减少导致，从而初步说明了患者的体内CD4、CD4/CD8细胞水平值的上下波动变化与肺部疾病的出现有着明显的相关性[6]。本研究中CD3在两组患者中，BALF及外周血部位的水平值均相似，无统计学意义，提示CD3细胞水平可能与肺结核患者发病无必然联系。再者，本研究对观察组患者不同治疗阶段的T淋巴细胞水平检测对比，发现在治疗后1月、3月患者的CD4细胞、CD4/CD8细胞水平均有明显增加，结合患者的临床症状改善、肺部病变减轻等结果共同表明T淋巴细胞尤其是CD4、CD8、CD4/CD8等水平值检测对肺结核的诊断和疗效判断有重要作用。

[1]中华医学会结核病学分会.气管支气管结核诊断和治疗指南(试行)[J].中华结核和呼吸杂志,2012,35(8):230.

[2]Jang H B,Lee A J,Kim M J,et al.Evaluation of CD3+CD4-CD8- (Double-negative) T Cells in Bronchoalveolar Lavage Fluid:an Effective Tool for Pulmonary Disease Diagnosis[J].Laboratory Medicine Online,2015,5(1):20.

[3]陈品儒,谭守勇.非结核分枝杆菌肺病患者外周血T淋巴细胞亚群与营养状况相互关系的探讨[J].实用医学杂志,2014,10(11):1768.

[4]丁士标,陈爱凤,潘亚萍,等.肺结核患者支气管肺泡灌洗液病原菌分布与耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2014(17):4203.

[5]Kumagai T,Tomita Y,Inoue T,et al.Pleural sarcoidosis diagnosed on the basis of an increased CD4/CD8 lymphocyte ratio in pleural effusion fluid:a case report[J].Journal of Medical Case Reports,2015,9(1):1.

[6]袁 媛，陈 骥.IL-18、OPN、INF-γ及 hs-CRP 在肺结核中的检测意义[J].湖南师范大学学报(医学版)，2016，13(2):117.

1007-4287(2017)09-1371-02

2016-11-10)