金蝉止痒颗粒质量标准分析与研究

贾琳　江龙

[摘要] 目的 对金蝉止痒颗粒建立质量标准。 方法 对金蝉止痒颗粒中栀子、苦参、黄柏药材采用薄层色谱法进行鉴别；对盐酸小檗碱、蛇床子素采用高效液相色谱法进行含量测定。 结果 薄层色谱专属性强，分离度高，阴性对照无干扰；高效液相色谱法测得盐酸小檗碱、蛇床子素分别在0.00648～0.1296 μg（r=0.9996）、0.0045～0.1125 μg（r=0.9996）范围内进样量与峰面积之间存在良好的线性关系，平均加样回收率分别为99.16%、99.22%，RSD分别为1.21%、1.33%，测得含量分别为0.1135、0.0310 mg/g。 结论 该方法准确、简便，能够很好地对金蝉止痒颗粒进行质量控制。

[关键词] 金蝉止痒颗粒；质量标准；栀子；苦参；黄柏；盐酸小檗碱；蛇床子素

[中图分类号] R961 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）08（a）-0042-05

[Abstract] Objective To establish the quality standard of Jinchanzhiyang Granules. Methods The contents of Gardenia jasminoides Ellis， Sophora flavescens， Phellodendron amurense Rupr. in Jinchanzhiyang Granules were identified by using thin layer chromatography （TLC） method. The contents of Berberine， Osthole were determined by high performance liquid chromatography （HPLC） method. Results TLC had strong specificity and high separation. Negative control without interference. The linear range was 0.00648-0.1296 μg for Berberine （r=0.9996） and 0.0045-0.1125 μg for Osthole （r=0.9996） respectively. The average recovery was 99.16% （RSD=1.21%）， 99.22% （RSD=1.33%） respectively. the content of Berberine and Osthol was 0.1135， 0.0310 mg/g respectively. Conclusion The method is accurate and simple， and can be used for the quality control of Jinchanzhiyang Granules.

[Key words] Jinchanzhiyang Granules； Quality standard； Gardenia jasminoides Ellis； Sophora flavescens； Phellodendron amurense Rupr.； Berberine； Osthole

金蝉止痒颗粒由金银花、黄柏、蛇床子、栀子、苦参、黄芩等十六味中药组成。适用于夏季皮炎，丘疹性荨麻疹等皮肤瘙痒症状的治疗，具有清热解毒、燥湿止痒的功效。在其含量测定方面，未见高效液相色谱法同时测定盐酸小檗碱、蛇床子素的报道。本文采用高效液相色谱法测定金蝉止痒颗粒中盐酸小檗碱、蛇床子素的含量。结合薄层色谱法对组方中栀子、苦参、黄柏进行定性鉴别。进一步提高金蝉止痒颗粒的质量控制。

1 仪器与试药

日本岛津SCL-10AVP，LC-10ATVP高效液相色谱仪，Welchrom C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，Waters C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；KQ5200B超声仪（昆山市超声仪器有限公司），TDD5m多管低速离心机（长沙平凡仪器仪表有限公司）。栀子苷、苦参对照品、盐酸小檗碱、蛇床子素（均由中国食品药品检定研究院提供，批号分别为110749-200714、121019-200605、 110713-200911、110822-200407）。金蝉止痒颗粒（重庆希尔安药业有限公司；规格：8 g/袋，批号：130102、130301、130401、130404）。试剂（成都科龙化工试剂厂）：乙腈、甲醇均为色谱纯试剂，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 栀子的薄层色谱鉴别 供试品溶液：取样品20 g，加水40 mL使溶解，用乙醚提取2次，每次20 mL，弃去乙醚液，水溶液用氢氧化钠试液调pH值至8～9，用正丁醇提取3次，每次10 mL，合并提取液，每次用10 mL含量为0.1 mol/L氢氧化钠溶液洗涤共2次，弃去洗涤液，蒸干正丁醇提取液，加甲醇1 mL使残渣溶解。对照品溶液：取栀子苷对照品，加甲醇制成每毫升含2 mg的溶液。根據薄层色谱法[1]，将上述两种溶液分别取10 μL，分别点在同一硅胶G薄层板上，正丁醇-醋酸-水（6∶2∶0.25）作为展开剂，展开，取出，晾干，用5%香草醛硫酸溶液喷雾，吹热空气[2-3]。相同颜色的斑点显示在供试品与对照品色谱相应的位置上（图1）。

2.1.2 黄柏的薄层色谱鉴别 供试品溶液：取样品10 g，加水20 mL使溶解，加浓氨溶液0.3 mL，用氯仿提取3次，每次10 mL，将提取液蒸干，残渣加1 mL甲醇溶解。对照品溶液：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成含量为0.1 mg/L的溶液。根据薄层色谱法[1]，将上述两种溶液分别取5 μL，分别点在同一硅胶G薄层板上，正丁醇-醋酸-水（6∶2∶0.25）作为展开剂，展开，取出，晾干，置UV光（波长365 nm）下检视[4]。相同颜色的黄色荧光斑点显示在供试品与对照品色谱相应的位置上（图2）。endprint

2.1.3 苦参的薄层色谱鉴别 供试品溶液：取鉴别“2.1.2”项下的供试品溶液。对照药材溶液：取苦参对照药材0.5 g，加浓氨试液0.3 mL，氯仿25 mL，振摇提取4 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解[5]。根据薄层色谱法[1]，将上述两种溶液分别取10 μL，分别点在同一硅胶G薄层板上，苯-丙酮-醋酸乙酯-浓氨试液（2∶3∶4∶0.2）作为展开剂，展开，取出，晾干，用稀碘化铋钾试液喷雾。相同颜色的橘黄色斑点显示在供试品与对照药材色谱相应的位置上（图3）。

2.2 盐酸小檗碱含量测定

2.2.1 高效液相色谱条件 Welchrom C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；流动相：甲醇-乙腈-水（50∶20∶30）（内含0.1%十二烷基磺酸钠及0.1%磷酸溶液）；流速为1.0 mL/min，检测波长为265 nm，柱温为32℃。

2.2.2 溶液的制备 对照品溶液：将盐酸小檗碱对照品精密称取适量置50 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解，恒定体积（0.00648 mg/mL）。供试品溶液：精密称取样品约2 g置锥形瓶中，精密加入含量60%甲醇50 mL，称重，超声波处理30 min（不低于200 W），取出，放冷，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，高速离心（10 000 r/min）10 min，上清液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液[6-7]。

2.2.3 专属性试验 取缺黄柏的阴性样品约2 g，阴性供试品溶液按“2.2.2”项方法制备。在“2.2.1”项下色谱条件测定，阴性样品色谱图中无相应特征峰，方法专属性良好[8]。盐酸小檗碱分离度>1.5，拖尾因子在0.95～1.05之间，理论塔板数不低于5000，满足定量分析要求（图4）。

2.2.4 线性关系考察 吸取对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件，分别进样1、5、10、15、20 μL，记录色谱图。以进样量X（μg）为横坐标，峰面积Y（mAU·min）为纵坐标，进行线性回归。结果盐酸小檗碱进样量在0.00648～0.1296 μg范围内与峰面积之间线性关系良好[9-10]。回归方程为Y=2495021.87X-7705.76，r=0.9999（n=7）。

2.2.5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，每次10 μL，按“2.2.1”项下色谱条件，重复进样6次，测得峰面积分别为250583、252411、249662、251269、248975、 251351，RSD为0.50% 。

2.2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件，在室温下放置0、3、5、7、9、12 h，每次进样10 μL，测得盐酸小檗碱峰面积分别为256874、258340、269465、253215、265422，RSD为2.54%，说明在12 h内供试品溶液基本稳定。

2.2.7 重复性试验 精密称取同一批号（批号：130403）样品6份，供试品溶液按照“2.2.2”项下方法制备，在“2.2.1”项下色谱条件依法测定，记录峰面积，测得盐酸小檗碱含量分别为0.1447、0.1508、0.1469、0.1483、0.1434、0.1468 mg/g，RSD为1.78%。

2.2.8 回收率试验 精密称取同一批号（批号：130403）已知含量样品9份，分成3组，每组分别添加低、中、高浓度盐酸小檗碱对照品，供试品溶液按照“2.2.2”项下方法制备，在“2.2.1”项色谱条件下依法测定，记录峰面积，计算回收率[11]，结果见表1。

2.2.9 含量测定 供试品溶液按“2.2.2”项下方法制备，在“2.2.1”项下色谱条件，对3批金蝉止痒颗粒样品测定分析，根据峰面积计算每批样品中盐酸小檗碱含量分别为0.1077、0.1312、0.1016 mg/g，即测得盐酸小檗碱含量为0.1135 mg/g。

2.3 蛇床子素含量测定

2.3.1 高效液相色谱条件 Waters C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；流动相：乙腈-水（49∶51）；流速为1.0 mL/min，检测波长为322 nm，柱温为25℃。

2.3.2 溶液的制备 对照品溶液：将蛇床子素对照品精密称定0.0045 g至100 mL棕色量瓶，加甲醇稀释至刻度（0.045 mg/mL）。供试品溶液：取样品约2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入无水乙醇25 mL，超声提取30 min（不低于200 W），过滤，滤液挥干，加甲醇5 mL，完全溶解，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过[12-13]，取续滤液。

2.3.3 专属性试验 取缺蛇床子的阴性样品约2 g，阴性供试品溶液按“2.3.2”项方法制备，在“2.3.1”项下色谱条件测定，阴性样品色谱图中无相应特征峰，方法专属性良好。蛇床子素分离度>1.5，拖尾因子在0.95～1.05之间，理论塔板数不低于4000，满足定量分析要求（图5）。

2.3.4 线性关系考察 吸取对照品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件，分别进样1、5、10、15、20 μL，记录色谱图。以进样量X（μg）為横坐标，峰面积Y（mAU·min）为纵坐标，进行线性回归。结果蛇床子素进样量在0.0045～0.1125 μg范围内与峰面积线性关系良好[14]。回归方程为Y=22956.74X-8165.36，r=0.9999（n=7）。

2.3.5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，每次10 μL，按“2.3.1”项下色谱条件，重复进样6次，测得峰面积分别为503945、506527、505570、504399、504268、 501947，RSD为0.31%。

2.3.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件，在室温下放置0、3、5、7、9、12 h，每次进样10 μL，测得蛇床子素峰面积分别为452087、456390、454766、455378、455065、453786，RSD为0.33%。说明在12 h内供试品溶液基本稳定。endprint

2.3.7 重复性试验 精密称取同一批号（批号：130403）样品6份，供试品溶液按照“2.3.2”项下方法制备，在“2.3.1”项下色谱条件依法测定，记录峰面积，测得蛇床子素分别为0.0319、0.0306、0.0299、0.0286、0.0311、0.0304 mg/g，RSD为3.67%。

2.3.8 回收率试验 精密称取同一批号（批号：130403）已知含量样品9份，分成3组，每组分别添加低、中、高浓度蛇床子素对照品，供试品溶液按“2.3.2”项下方法制备，在“2.3.1”项下色谱条件依法测定，记录峰面积，计算回收率[15]。结果见表2。

2.3.9 含量测定 供试品溶液按“2.3.2”项下方法制备，在“2.3.1”项下色谱条件，对3批金蝉止痒颗粒样品测定分析，根据峰面积计算每批样品中蛇床子素含量分别为0.0313、0.0299、0.0319 mg/g，即测得蛇床子素含量为0.0310 mg/g。

3 讨论

盐酸小檗碱在标准方法色谱条件下的峰型存在拖尾现象[16-17]。盐酸小檗碱作为碱性季铵型类生物碱，通过调节流动相中水相和有机相的比例，并加入缓冲溶液在流动相中，可以解决峰型拖尾问题；故本试验调整流动相为：甲醇-乙腈-水（50∶20∶30）（内含0.1%十二烷基磺酸钠及0.1%磷酸溶液）；配合色谱柱、柱温、流速等条件，盐酸小檗碱的峰型较好，其理论塔板数和分离度均良好。

本试验对蛇床子素在200～400 nm进行全扫描，在203、322 nm波长处蛇床子素有较强的紫外吸收，经比较采用322 nm时，杂质峰数量较少，基线较好，对测定无干扰，故选用322 nm作为检测波长。有文献[18]报道，蛇床子素见光易分解，其分解速度在避光保存的情况下显著减慢，因此本试验的样品在试验前临时处理，并对蛇床子素采用避光操作。

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（收稿日期：2017-04-25 本文编辑：李亚聪）endprint