HPLC法测定丹灯通脑片中葛根素的含量

童艳

黑龙江省济仁药业有限公司 150000

HPLC法测定丹灯通脑片中葛根素的含量

童艳

黑龙江省济仁药业有限公司 150000

目的：通过使用HPLC这一测定方式对丹灯通脑片之中所含有的葛根素进行分析。方法：使用Gemini类型色谱柱，并使用乙腈物质，百分之一的磷酸溶液来作为梯度洗脱物质，同时在整个实验的过程之中保持整体流速为一摩尔每分钟，设定相应的检测波长度为三百一十八纳米，在实验过程之中维持实验柱的温度为三十五摄氏度。实验结果：葛根素物质以及阿魏酸物质在二十一毫克每毫升到二百一十毫克每毫升的浓度数值范围内其数据分析表封面面积和浓度数值表现出了良好的线性关系。结论：这种物质分析、检测的方式在实验之中表现出了实验方式简便、整体实验速度快、实验结果准确性高、试验再现性良好的特点，所以这一方法也就成为了分析丹灯通脑药物之中相应的葛根素物质的了优秀技术。

丹灯通脑片；HPLC法；葛根素

由于目前社会之中生活、工作方面的节奏较快，并且一部分在工作之中超负荷进行，所以也就容易导致身体健康受到不同程度的影响，甚至在长时间的影响之下会出现的冠心病等类型的疾病，使得人们的正常生活受到较大影响，甚至在危险的情况下还会造成的人们生命安全方面的危险。为了有效的治疗这种疾病，目前出现了丹灯通脑片这种药物，这种药物是中医治疗理念和现代只要科技相结合的产物，这一药物的原药方在我国出现的时间较早，在和现代化的只要技术相互融合之后实现了批量化的生产，通过这一药物的使用能有效的治疗患者自身出现的脑中风疾病、冠心病症状、心绞痛症状等症状，能改善颅脑内血液循环，增加动脉血氧含量。增加脑和心脏冠状动脉的血流量，增强心肌对缺血、缺氧的耐受性；增强血液内溶纤酶的活性，改善血液粘度；抑制血小板集聚和凝血过程；扩张周围血管，改善毛细血管通透性，增加局部血流量，改善人体微循环，在这一药方之中含有较多的药材，而其中最为主要的就是葛根药物以及川芎药物，从现代化制药理论的基础上对这些药物进行分析就会发现这其中虽为重要的元素就葛根素物质以及阿魏酸物质，同时在进行丹灯通脑片这一药物检验的过程中也主要是对这两种进行检验。在本次实验的过程之中主要是对药物之中的葛根素进行相应的检验。

1.实验仪器以及药物

岛津LC－20AT型高效液相色谱仪，BS-124S电子分析天平;Ⅺ对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110752-200511，供含量测定用)，Ⅻ对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110773-200612，供含量测定用);丹灯通脑软胶囊 3批(云南某药厂，批号:C1306031，C1306005，C1306052);乙腈(色谱纯，国药集团化学试剂有限公司)，磷酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，二次重蒸水(自制)。

2.实验方法以及相应结果

2.1 实验条件

使用Gemini类型色谱柱，并使用乙腈物质，百分之一的磷酸溶液来作为梯度洗脱物质，同时在整个实验的过程之中保持整体流速为一摩尔每分钟，设定相应的检测波长度为三百一十八纳米，在实验过程之中维持实验柱的温度为三十五摄氏度。

2.2 对照作用溶液标准

量取葛根素相应的对照物质其质量二十一毫克左右，在经过精确称量之后再使用一百毫升的容量瓶进行定容操作，方便后续的实验使用。取Ⅻ对照品约13.0mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取 20mL置上述溶液，用甲醇稀释至刻度，即得混合对照品储备液(1)，葛根素和Ⅻ的浓度分别为 210.0mg·L－1和26.0mg·L－1;取葛根素对照品约70.0mg，精密称定，置50mL量瓶中用甲醇溶解，取; 阿魏酸对照品约7.0mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再从中精密吸取25mL，置上溶液，用甲醇稀释至刻度，即得混合对照品储备液(2)，葛根素和; 阿魏酸的浓度分别为1.4g·L－1和0.14g·L－1。2.3供试品溶液的制备取胶囊内容物约 0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液 100mL，密塞，称定重量，加热回流 30min，冷却至室温，称定重量，用70%甲醇溶液补足减失重量，摇匀，静置，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液的制备按处方比例分别称取除川芎以外的其余药味和除葛根以外的其余药味，按照制备工艺制成相应的阴性样品，并按“供试品溶液的制备”项下方法操作，作为阴性对照溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察

精密称取葛根素对照品，加30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取0.5、1、2、3、4、5ml至10ml量瓶中，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，按以上方法测定峰面积，并以峰面积的积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标建立标准曲线，计算回归方程，葛根素回归方程为:y=4×106X－1.34×105(r=0.9999)，葛根素在 0.1696μg～1.6960 μg范围内呈良好的线性关系。

2.5.2 精密度试验

取“线性关系考察”项下的对照品储备液(1)6.0mL置10mL量瓶的对照品溶液20μL，在上述色谱条件下重复测定6次，记录峰面积。Ⅺ和Ⅻ峰面积的RSD分别为1.7%与1.9%

2.5.3 专属性试验

精密吸取供试品溶液、“精密度试验”项下的对照品溶液和阴性对照溶液各 20μL，注入液相色谱仪，结果阴性对照液在与对照品峰相应的保留时间处无色谱峰出现，表明阴性对照无干扰。

2.5.4 稳定性试验

取批号:C1306031供试品，按“供试品溶液的制备”项下方法得到供试品溶液，分别于0、2、4、8、12和24h进样，按照上述色谱条件进样分析。Ⅺ和Ⅻ峰面积的RSD分别为1.7%和1.8%。

2.5.5 重复性试验称取同一批号的样品6份，按“供试品溶液制备”项下方法操作，平行制备供试品溶液。依次进样，以色谱峰面积按外标法计算。Ⅺ平均含量为81.46mg·g－1，RSD为1.4%;Ⅻ平均含量为7.217mg·g－1，RSD为1.2%。

2.5.6 加样回收率试验称取 0.1g已知含量的供试品(批号:C1306031)9份，精密称定，按低、中、高浓度分别精密加入混合对照品储备液(2)，每一浓度3份，照“供试品溶液的制备”项下方法操作，所得供试品溶液并进样分析，

3 讨论

3.1 流动相的选择实验首先采用等度洗脱比较了甲醇—水、甲醇—磷酸水溶液、乙腈—水、乙腈—磷酸水溶液等不同系统和比例的流动相，结果表明，Ⅺ和Ⅻ与相邻杂质峰分离效果不理想，经过不断地探索，最终采用乙腈和0.1%磷酸水溶液梯度洗脱，两组份与相邻杂质峰分离效果理想。

3.2 提取条件的选择实验中曾选用甲醇、70%甲醇、30%甲醇和30%乙醇超声提取。结果表明甲醇和70%甲醇的提取效率相当且最高。又比较了超声和加热回流两种提取方法的提取效果，结果表明加热回流比超声提取效果好，于是最终选择70%甲醇加热回流，提取完全。通过建立丹灯通脑片的含量测定指标，对丹灯通脑的质量进行控制，使产品的质量均一性生产各批次之间的差异性有了有效控制，对临床用药和产品治疗法作用的一致性，有了可靠的保证。

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1672-5018（2017）05-214-01