柿叶黄酮在实验性口腔溃疡中的抗氧化抗炎作用研究*

(泰山医学院口腔医学院，山东 泰安 271000)

柿叶黄酮在实验性口腔溃疡中的抗氧化抗炎作用研究*

张永丽王朔郝麦玲

(泰山医学院口腔医学院，山东泰安271000)

目的 探讨柿叶黄酮在口腔溃疡大鼠中的抗氧化抗炎作用。方法 建立口腔溃疡大鼠模型(醋酸法)，用桂林西瓜霜和不同剂量(20 mg·kg-1，40 mg·kg-1，80 mg·kg-1)的柿叶黄酮进行干预。观察血清和溃疡组织中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的变化； H-E染色观察组织病理形态学变化。结果 柿叶黄酮(20 mg·kg-1，40 mg·kg-1，80 mg·kg-1)可提高模型大鼠血清和溃疡组织中SOD活性、降低MDA含量(P<0.05)；桂林西瓜霜和减轻溃疡组织的炎性浸润。结论 柿叶黄酮对醋酸诱导的口腔溃疡有一定的治疗作用，其机制与抗氧化损伤和降低炎症反应有关。

柿叶黄酮；口腔溃疡；氧化应激；炎症

黄酮类化合物是柿叶的主要有效成分，主要有紫云苷、异槲皮素、山奈酚等众多黄酮类成分。据明代《滇南本草》记载“经霜叶敷臁疮”，即柿叶可用于小腿的慢性溃疡的治疗。现代药理学研究发现，柿叶黄酮具有抗氧化、止血、免疫调节等多种药理作用[1]。有报道表明，柿叶黄酮良好的抗氧化明显优于抗坏血酸[2]。复发性口腔溃疡(recurrent oral ulcer，ROU)是临床上口腔黏膜疾病中最常见的一种疾病类型，发病率可高达20%[3]。ROU有疼痛、自愈性以及反复发作等临床特点，反复发作和疼痛较为严重地影响ROU患者的工作、学习和生活。ROU病因的不明确，其发病机制较为复杂，免疫功能紊乱和氧化应激损伤在ROU的发病机制中具有重要作用[4]。本实验通过建立口腔溃疡大鼠模型，观察柿叶黄酮在口腔溃疡大鼠中的抗氧化抗炎作用。

1 材料和方法

1.1实验动物

SPF级健康SD大鼠，体重200～240 g，雌雄各半，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号为SCXK(京)2012-0001。饲养1周，以适应新环境。12 h昼夜交替，室温20～25 ℃，湿度为40%～60%，普通饲料喂养，自由饮水。

1.2试剂和药品

PLF由陕西慈缘生物技术有限公司提供；桂林西瓜霜(桂林三金药业股份有限公司，Z45021599)；SOD试剂盒(南京建成生物工程研究所，20161209)、MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所，20161214)、考马斯亮蓝试剂盒(南京建成生物工程研究所，20161217)。

1.3主要仪器

小动物麻醉机(瑞沃德生命科技有限公司)；紫外分光光度计(上海元析仪器有限公司)；低温高速离心机(德国eppendorf公司)；石蜡切片机(浙江金华市科迪仪器设备有限公司)；80i图像采集系统(日本尼康公司)。

1.4方法

1.4.1大鼠口腔溃疡模型的制备 参考文献方法[5]，具体操作如下：以戊巴比妥钠(45 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，将50%冰醋酸滤纸片(3 mm×3 mm)置于下切牙唇侧穹窿区30 s，移除滤纸片后观察受损区变化。空白对照组不做处理。24 h后造模大鼠口腔受损区出现明显溃疡表明模型成功。

1.4.2实验分组和给药 SD大鼠60只，随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、柿叶黄酮20 mg·kg-1、40 mg·kg-1、80mg·kg-1组。阳性对照组灌胃给予西瓜霜200 mg·kg-1，PLF各给药组给药，空白对照组、模型对照组给予等体积的生理盐水。于造模后第2天给药，连续给药7天。

1.4.3样品处理 末次给药1 h后，戊巴比妥钠麻醉，先腹主动脉取血，后取溃疡面组织。腹主动脉取血后，以4 ℃、3000 r/min离心10 min，取血清，-20 ℃保存。每组留取7只大鼠的正常或溃疡组织加入9倍量的冷生理盐水进行匀浆处理，4 ℃、3000 r/min离心10 min，分离上清液，-20 ℃保存。每组另留取3只大鼠的正常组织或溃疡组织用10%的中性甲醛固定。

1.4.4SOD和MDA的测定 按试剂盒说明书操作，测定血清和组织中SOD活力和MDA含量。

1.4.5病理组织学观察 常规石蜡包埋，制备5 μm切片，苏木素-伊红染色，图像采集分析系统进行图像采集。

1.5统计学处理

2 结 果

2.1对组织中SOD、MDA的影响

与正常对照组相比，模型大鼠的溃疡组织和血清中的SOD活力下降，而MDA含量增高(P<0.05)，表明造模后机体和溃疡组织中出现氧化应激；经过PLF治疗后，20 mg·kg-1，40 mg·kg-1，80 mg·kg-1均可提高SOD活力，降低MDA含量(P<0.05)。

表1 PLF对口腔溃疡大鼠血清和溃疡组织中SOD和MDA的影响

注：与正常对照组相比，#P<0.05；与模型对照组相比，*P<0.05。

2.2组织病理学观察

正常对照组口腔黏膜被覆鳞状上皮完整，黏膜下层组织及血管周围未见炎性细胞浸润(如图1A)；模型对照组口腔黏膜鳞状上皮层脱落，黏膜下层组织出现显著的炎性细胞浸润及坏死区域(如图1B)；西瓜霜治疗组和PLF治疗组口腔黏膜下层有炎性细胞浸润明显减轻，成纤维细胞增加明显(如图1C、1D)。

A.正常对照组；B.模型对照组；C.西瓜霜组；D.80mg·kg-1PLF组。

图1 大鼠口腔黏膜组织H-E染色(×100)

3 讨 论

ROU是一种口腔黏膜炎症性疾病，其发病机制与口腔黏膜内细胞免疫功能紊乱关系密切。病理组织学观察发现，模型大鼠口腔黏膜表层受损，鳞状上皮细胞层脱落，黏膜下层有大量的炎性细胞浸润，并出现坏死区域，这种病理学改变与人类复发性口腔溃疡基本相似[6]。经西瓜霜和PLF治疗后，大鼠口腔黏膜下层的炎性细胞浸润明显减轻，提示PLF对炎症反应的抑制作用。

伴随炎症而出现的是氧化应激反应。炎症反应可干扰组织器官内的自由基代谢，促使自由基过度形成；自由基过度形成导致氧化应激反应的出现和组织细胞损伤[4]。超氧化物歧化酶(SOD)是机体组织最主要的一种抗氧化酶，使超氧阴离子自由基转化为过氧化氢(H2O2)，后者则在过氧化氢酶(CAT)的作用下迅速分解为无害的水；丙二醛(MDA)是自由基作用于脂质发生过氧化反应的终产物，可引起蛋白质、核酸等大分子交联聚合，具有强的细胞毒性，SOD和MDA的变化可反映机体组织的抗氧化能力和氧化应激反应之间的平衡关系[7]。在口腔溃疡发生时，机体和口腔黏膜组织内的SOD活性降低而MDA的水平升高[8]。本实验结果表明：柿叶黄酮各剂量组可提高机体和口腔黏膜组织中SOD的活性，降低MDA的水平，展现良好的抗氧化能力。

柿叶黄酮一种良好的天然抗氧化剂，除了抗氧化作用外还有免疫调节、止血、抗菌等作用。柿叶黄酮的这些药理学作用可针对复发性口腔溃疡复杂的病因发挥多向性的治疗效果。本研究初步证实柿叶黄酮对实验性口腔溃疡大鼠血清和组织中的SOD和MDA具有良好的调节作用，同时也可明显减轻炎性细胞的浸润。

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Study on the antioxidant and anti-inflammatory effects of persimmon leaf flavonoids in experimental oral ulcer

ZHANG Yong-li WANG Shuo HAO Mai-ling

(School of Stomatology,Taishan Medical University, Taian 271000, China)

Objective:To investigate the antioxidant and anti-inflammatory effects of persimmon leaf flavonoids on oral ulcer in rats. Methods:The oral ulcer model was induced by acetic acid, and was used for intervention by Guilin watermelon frost and different doses of PLF (20 mg·kg-1,40 mg·kg-1,80 mg·kg-1). The changes of superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) in serum and ulcer tissues were observed. The changes of histopathology were observed by H-E staining. Results: PLF (20 mg·kg-1,40mg·kg-1,80 mg·kg-1) increased the activity of SOD and decreased the content of MDA in serum and ulcer tissue (P<0.05); Guilin watermelon frost and PLF could improve the inflammatory infiltration of ulcer tissue. Conclusion:PLF has certain therapeutic effects on oral ulcer induced by acetic acid, and the mechanism may be related to improving oxidative damage and reducing inflammatory reaction.

persimmon leaf flavonoids;oral ulcer;oxidative stress;inflammation

2015年国家级大学生创新项目(201510439015)。

：张永丽(1974—)，女，山东巨野人，硕士，主要从事口腔医学科研和教学工作。

R781

：A

：1004-7115(2017)09-01000-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.09.013

2017-06-26)