CTLA-4基因多态性与宫颈癌易感性的关系

陈雪莲 钱沁佳

(海南省农垦三亚医院妇产科，海南 三亚 572000)

CTLA-4基因多态性与宫颈癌易感性的关系

陈雪莲 钱沁佳

(海南省农垦三亚医院妇产科，海南 三亚 572000)

目的探讨细胞毒T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4基因单核苷酸多态性(SNPs)与宫颈癌发生的关系。方法350例宫颈癌患者为病例组，350例健康女性为对照组，抽取全血基因组DNA，直接测序法检测CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A单核苷酸多态性，采用MTT 法检测不同基因型的外周血单核细胞增殖能力，酶联免疫吸附(ELISA)法检测不同基因型患者血清转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-2、IL-4表达水平。结果宫颈癌病例组CTLA-4-318 位点等位基因C的概率低于对照组，等位基因T概率高于对照组，CC基因型比例低于对照组，TT基因型比例高于对照组(均P<0.05)。病例组CTLA-4 CT60 位点等位基因A的概率低于对照组，等位基因G的概率高于对照组，AA基因型比例低于对照组，GG基因型比例高于对照组(均P<0.05)。CTLA-4-318 CC基因型T细胞增殖率高于TT基因型，TGF-β水平低于TT基因型，IL-2、IL-4水平高于TT基因型(均P<0.05)。CTLA-4 CT60 AA基因型TGF-β水平低于GG基因型，IL-2、IL-4水平高于GG基因型(P<0.05)。结论CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A基因多态性在宫颈癌的发生发展过程中起到重要作用，CTLA-4-318 TT基因型及CT60 GG基因型可增加宫颈癌的发病风险，其机制可能与调节T细胞的增殖及调节细胞因子的分泌有关。

宫颈癌；细胞毒T淋巴细胞相关抗原 4；基因多态性；细胞因子

90%以上的宫颈癌患者伴有高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染〔1〕，然而并非所有的HPV感染者都会进展成为宫颈癌患者，多种环境因素、遗传因素及免疫学因素在宫颈癌的发生发展过程中起到重要作用。细胞毒T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4是调节T细胞增殖、分化的重要分子之一，CTLA-4基因在调节细胞及体液免疫反应中起到重要作用〔2〕。CTLA-4作为CD28的分子拮抗剂具有多种生物学功能。CTLA-4基因多态性与胃癌、结直肠癌、肾癌等恶性肿瘤的发生有一定关系〔3〕。本研究旨在探讨CTLA-4基因的单核苷酸多态性(SNPs)与宫颈癌发生的关系及其可能的机制。

1 对象与方法

1.1对象 收集2013年1月至2015年12月海南省农垦三亚医院就诊的350例宫颈癌患者的临床资料，入选标准：(1)新发病例首次就诊，未做过手术及放化疗；(2)术前病理诊断为宫颈鳞癌。选取体检中心350例健康女性为对照组，入选标准：(1)宫颈细胞学检查呈阴性；(2)高危型HPV检测呈阴性。所有入选对象均需排除自身免疫系统疾病、严重感染、恶性肿瘤及血缘关系。病例组年龄32～67〔平均(48.6±14.2)〕岁，中位年龄47岁；对照组年龄35～63〔平均(47.1±16.9)〕岁，中位年龄46岁，两组年龄差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法 抽取两组治疗前空腹外周静脉血10 ml，其中5 ml于1 500 r/min离心5 min收集血清，酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒进行血清转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-2、IL-4水平检测。另外5 ml血液分为2份，一份进行全血DNA的提取进行基因多态性 的检测，一份采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞。根据目的基因CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A的序列号，用Primer Premier 5.0 设计引物，并委托上海生工公司合成引物，PCR扩增后采用直接测序法检测CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A的基因多态性表达。收集单核细胞进行细胞培养，在植物血凝素(PHA)刺激下采用噻唑蓝(MTT)法进行细胞增殖率的测定。

1.3统计学方法 应用SPSS21.0软件进行χ2检验、单因素方差分析、LSD-t检验。

2 结 果

2.1两组CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A基因型比较 CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A基因型的分布均符合Hardy-Weinberg 遗传平衡定律。病例组CTLA-4-318 位点携带等位基因C的概率低于对照组，等位基因T的概率高于对照组，病例组携带CTLA-4 CT60 位点等位基因A的概率低于对照组，携带等位基因G的概率高于对照组(P<0.05)。病例组CTLA-4-318 位点CC基因型比例低于对照组，TT基因型比例高于对照组，病例组CTLA-4 CT60 AA基因型比例低于对照组，GG基因型比例高于对照组(P<0.05)。见表1，表2。

表1 两组CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A携带等位基因频率比较〔n(%),n=50〕

表2 两组CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A基因型频率比较〔n(%)，n=350〕

2.2CTLA-4基因多态性与T细胞增殖率及细胞因子的关系 不同CTLA-4-318基因型T细胞增殖率不同，CC基因型T细胞增殖率高于TT基因型(P<0.05)。不同CTLA-4 CT60基因型T细胞增殖率差异没有统计学意义(P>0.05)。不同CTLA-4-318基因型TGF-β、IL-2、IL-4水平不同，CC基因型TGF-β水平低于TT基因型，IL-2、IL-4水平高于TT基因型(P<0.05)。不同CTLA-4 CT60基因型TGF-β、IL-2、IL-4水平不同，AA基因型TGF-β水平低于GG基因型，IL-2、IL-4水平高于GG基因型(P<0.05)。见表3。

表3 CTLA-4基因多态性与T细胞增殖率及细胞因子的关系

与CC组比较：1)P<0.05；与AA组比较：2)P<0.05

3 讨 论

宫颈癌发病机制复杂，基因多态性与宫颈癌易感性之间关系密切。研究发现，人类白细胞抗原(HLA)的多态性与宫颈癌易感性及HPV感染密切相关，HLA多态性与高危型HPV16型病毒的变异有关〔4〕。研究发现，肿瘤坏死因子(TNF)-α基因多态性与宫颈癌的发生密切相关，TNF-α基因启动子区-238携带A等位基因的人群宫颈癌发病风险低于等位基因G人群，而TNF-α-308位点G等位基因人群宫颈癌发病风险低于等位基因A人群〔5〕。

人类CTLA-4基因位于染色体2q33，该基因区域分布多种与肿瘤免疫关系密切的基因。CTLA-4是CD28的拮抗剂，能够与CD28竞争性结合B7受体，负性调节T细胞的增殖、分化。本研究结果说明CTLA-4-318 TT基因型可增加宫颈癌发病风险，CC基因型可降低宫颈癌发病风险，CTLA-4 CT60 GG基因型可增加宫颈癌发病风险，AA基因型可降低宫颈癌发病风险。

恶性肿瘤的发生与癌基因的激活剂抑癌基因的失活密切相关，抗肿瘤免疫在此过程起到重要作用，CD4+及CD8+在抗肿瘤免疫过程中起到重要作用，CTLA-4能抑制CD4+T细胞及CD8+细胞毒T细胞的作用，降低机体抗肿瘤免疫反应〔6〕。本研究结果提示CTLA-4-318及CTLA-4 CT60与宫颈癌发病密切相关，其机制可能与调节T细胞的增殖及调节细胞因子的分泌。有研究发现，CTLA-4基因型的多态性与年龄、是否绝经及HPV感染等因素无关，而与宫颈癌分期有关，说明CTLA-4基因型多态性在宫颈癌进展过程中起到重要作用〔7〕。

本研究认为，CTLA-4-318 T/C、CT60 G/A基因多态性在宫颈癌的发生发展过程中起到重要作用，CTLA-4-318 TT基因型及CT60 GG基因型可增加宫颈癌的发病风险，其机制可能与调节T细胞的增殖及调节细胞因子的分泌有关。宫颈癌的发生发展是多基因多因素协同累积作用的结果，深入探讨基因多态性与宫颈癌发病的关系，为宫颈癌的早期诊断、早期治疗提供依据。

1杨剑虹，徐凤娟，王金湖，等.基因扩增及导流杂交技术检测人乳头瘤病毒〔J〕.临床检验杂志，2012;30(12):981-2.

2Zhao HY，Duan HX，Gu Y.Meta-analysis of the cytotoxic T-lymphocyte antigen 4 gene+6230G/A polymorphism and cancer risk〔J〕.Clin Transl Oncol，2014;16(10):879-85.

3李 华，周翊峰，郭红燕，等.细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原4 编码区 49 位点的基因多态性与宫颈癌遗传易感性的关系〔J〕.中华肿瘤杂志，2011;33(9):681-4.

4Yan Q，Chen P，Lu A，etal.Association between CTLA-460G/A and-1661A/ G polymorphisms and the risk of cancers:a meta-analysis〔J〕.PLoS One，2013;8(12):e83710.

5Mocellin S,Nitti D.CTLA-4 blockade and the renaissance of cancer immunotherapy〔J〕.Biochim Biophys Acta,2013;1836(2):187-96.

6王甲甲，钟佳伶，张 娟，等.细胞毒 T 淋巴细胞相关抗原 4 基因多态性与宫颈癌易感性的相关分析〔J〕.临床检验杂症，2015;33(2)：119-23.

7Lee YH，Song GG.A meta-analysis of the association between CTLA4+49 A/G，-318C/T，and IL-1 polymorphisms and susceptibility to cervical cancer〔J〕.Neoplasma,2014;61(4):481-90.

〔2016-09-15修回〕

(编辑 袁左鸣/滕欣航)

陈雪莲(1983-)，女，主治医师，主要从事妇科肿瘤研究。

R73

A

1005-9202(2017)17-4207-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.17.017