Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞的质量分析及产科应用

朱仕清+危燕芬

【摘要】 目的 分析本站冰冻解冻去甘油红细胞质量及临床应用疗效。方法 采用ACP125全自动血细胞处理仪对48袋（96 U）Rh（D）阴性冰冻红细胞进行去甘油化和复苏洗涤， 使用前检测血红蛋白含量、甘油残留量及游离血红蛋白含量等指标， 检测32例产妇输注前后血红蛋白（Hb）、红细胞比容（Hct）、总胆红素（TB）、直接胆红素（DB）和尿胆原（UBG）水平， 评估临床疗效。结果 48袋（96 U）冰冻解冻去甘油红细胞各项质控指标均达到GB18469-2012《全血及成分血的质量要求》。32例产妇输注后， 均达到满意的疗效， 无输血不良反应的发生。输注后Hb为（86±3.2）g/L、Hct为（35.0±1.8）%， 均高于输注前的（72±2.5）g/L、（27.5±1.1）%， 比较差异具有统计学意义（P<0.05）；而输注前后TB和DB比较差异无统计学意义（P>0.05）；输注前后UBG均为阴性。结论 ACP125全自动血细胞处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞质量合格， 可以用于Rh（D）阴性患者的临床输血。

【关键词】 Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞；质量控制；应用疗效

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.22.052

目前， 国际输血协会确认的血型系统有33种， 其中， Rh血型是除了ABO血型系统外最重要的血型系统， 但我国Rh（D）阴性人群比例仅约为0.4%。故此， 血站该血液库存很少。当有Rh（D）阴性患者急救大量用血时， 难以在短时间内招募Rh（D）阴性献血者， 影响了患者的救治。但同时由于采集时机与临床需求对应不上而造成血源的浪费。自1970年Meryman等将甘油保存红细胞技术应用于人体输血后， 冷冻血液在临床输血治疗中开始得到推广应用[1]， Rh（D）阴性患者用血问题逐步得到了解决。本站自2013年开展该项技术， 制备的Rh（D）阴性红细胞大部分在医院的产科中使用。现将2015年1月～2016年12月在花都区妇幼保健院产科中使用的48袋（96 U）Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞质量控制及应用疗效报告如下。

1 材料与方法

1. 1 血液来源 选取符合GB18467-2011《献血者健康检查要求》[2]， 从日常采集并经血型血清学检测确定为Rh（D）阴性的合格血液， 确认方法按《全国临床检验操作规范》[3]进行操作。在（4±2）℃的血液专用保存箱中保存6 d内的全血（CPD-A保养液）或悬浮红细胞（MAP红细胞添加剂）。

1. 2 病例来源 通过查阅2015年1月～2016年12月在花都区妇幼保健院产科中收住院的32例输注Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞产妇的病历， 对有关输血资料和数据进行统计分析。产妇平均年龄31岁， 其中输注A型9例， B型8例， O型13例， AB型2例。全部治愈出院。

1. 3 设备及材料 ACP125全自动血细胞处理仪、KR-4I大容量冷冻离心机、无菌接管机（费森尤斯）、三洋-80℃超低温血液保存箱、恒温水浴箱、Kx-21全自动血细胞分析仪、CS-600A 全自动生化分析仪、全自动细菌培养仪、SE-260热合机、225型加甘油耗材、235型去甘油耗材、PVC血液转移袋（四川南格尔）、57.1%甘油、9%氯化钠（NaCl）、0.9%NaCl。

1. 4 制备方法

1. 4. 1 冰冻红细胞制备方法 全血或懸浮红细胞经离心[温度（4±2）℃， 离心力4036 g， 时间8 min]制备成浓缩红细胞， 将浓缩红细胞通过无菌接管机转移到800 ml空袋中， 与 225型加甘油耗材连接。利用ACP125全自动血细胞处理仪自动甘油化。加甘油完毕在室温静置30 min后离心[温度（22±2）℃， 离心力2516 g， 时间8 min]， 移除上清液后热合， 将制备好的冰冻红细胞装入盒子置于-80℃超低温血液保存箱中保存。

1. 4. 2 冰冻红细胞复苏洗涤方法 将冰冻红细胞置于已预温37～42℃的振荡水浴箱中5 min内溶解完毕， 计算出红细胞的净重量。将235型去甘油耗材通过无菌接管机与冰冻红细胞连接。开启ACP125全自动血细胞处理仪， 安装去甘油耗材后自动完成红细胞的复苏及洗涤程序。洗涤完毕后热合成品袋及配血标本。在电子天平上称重， 记录复苏后红细胞的重量。

1. 4. 3 质控标本的留取方法 洗涤完成后， 从血细胞处理仪上取下成品袋， 轻轻摇匀。将血液顺着管道回流至远端分叉处， 热合分离管道末端， 再将充满血液的管道热合成两段， 远端保留一段≥20 cm的管道作为质控标本。

1. 5 冰冻解冻去甘油红细胞血液质量的检测 用全自动血细胞分析仪检测Hb含量、白细胞计数；邻联甲苯胺法检测游离Hb；过碘酸钠法检测甘油残留量；全自动细菌培养仪作细菌培养。

1. 6 观察指标 Rh（D）阴性产妇产前Hb<70 g/L， 或产前虽达不到输注的要求， 但合并有胎位不正、前置胎盘、胎盘早剥或先兆子痫等异常情况， 分娩前备血；分娩时或产后大量失血， 失血量超过自身血容量的20%～30%的急救用血。使用Kx-21全自动血细胞分析仪作Hb和Hct的测定；使用全自动生化分析仪作血清TB和DB的测定；使用尿液分析仪作UBG的测定。

1. 7 统计学方法 采用SPSS21.0统计学软件对数据进行处理。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 48袋（96 U）冰冻解冻去甘油红细胞各项质控指标均达到GB18469-2012《全血及成分血的质量要求》[4]。见表1。

2. 2 32例产妇输注后均达到满意的疗效， 无输血不良反应的发生。输注前后Hb、Hct比较差异具有统计学意义（P<0.05）；而输注前后TB和DB比较差异无统计学意义（P>0.05）；输注前后UBG均为阴性。见表2。endprint

3 讨论

随着输血技术的快速发展， 临床对Rh（D）阴性血的需求量日益增加， 如何保障Rh（D）阴性等稀有血型血液的供应， 为临床急救诊疗缩短时间是临床急需解决的问题。特别是事故抢救和产妇大出血， 短时间内需求的血量较多[5]。如不及时输血， 将严重威胁患者、产妇或胎儿的生命。开展冰冻红细胞制备技术， 使Rh（D）阴性红细胞超低温甘油化冰冻保存， 可大幅度延长红细胞在体外存活时间， 为储备稀有血型应急血液提供了条件。

本文研究可知， 使用ACP125全自动血细胞处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞， 其制品质量明显高于国家标准《全血及成分血的质量要求》。稀有血型血液在采集后甘油化深低温保存备用， 使用时冰冻血液从复苏到洗涤结束， 仅需约1 h。主要是冰冻红细胞洗涤的程序简化， 也能使红细胞体积缩小而缩短冻成和解冻时间。解冻后红细胞的2， 3-二磷酸甘油酸（2， 3-DPG）水平与冰冻前区别不大， 红细胞虽有轻微变形， 但不影响携氧功能。同时， 同种异体冰冻红细胞在制备时白细胞、血小板、抗凝剂、细胞外钾离子、游离Hb等物质因多次洗涤几乎被洗去， 减少了因输注异体血引起的输血免疫反应及白细胞相关病毒传播的发生率， 也减少了输血免疫抑制[6]， 即使大量输注也不易产生酸中毒和高钾血症， 也可防止免疫球蛋白A（IgA）缺乏的患者因输入含有IgA抗体的血液而发生过敏反应， 提高了输血的安全性。

本文研究显示， 32例产妇输注Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞后， Hb及Hct能达到理论值：60 kg体重的成人每输入1单位全血约可提高血红蛋白5 g/L[7]， 而 TB、DB 及UBG与输注前没明显变化， 证明冰冻解冻去甘油红细胞复苏洗涤后红细胞质量保证， 输注后未发生溶血等输血不良反应。

目前， 红细胞的冰冻保存是现代输血中唯一能长期保存红细胞的方法， 可以使红细胞有效保存10年[8]。开展冰冻解冻去甘油红细胞制备技术， 不仅避免宝贵血液资源的浪费， 更重要的是为稀有血型患者的输血提供了方便， 为抢救赢得了时间， 也为臨床提供了更符合国家质量标准的血液产品， 更有效地保障了临床用血的安全。

参考文献

[1] 马庆. 深低温长期保存红细胞的效果评价. 中国输血杂志， 2012， 25（9）：837-840.

[2] 王宇骁， 王涛， 王宇航. 《献血者健康检查要求》（GB18467-2011）在日常工作中的心得体会. 中国输血杂志， 2012， 25（s1）：31.

[3] 叶应妩， 王毓三， 申子瑜， 等. 全国临床检验操作规程. 第3版. 南京：东南大学出版社， 2006：249-250.

[4] 周静宇. 全血及成分血质量要求和临床输血技术规范的差异. 临床血液学杂志：输血与检验， 2013（2）：265-266.

[5] 唐秋民， 莫秋红， 申卫东， 等. 稀有血型血液冷冻血库的建立及临床意义. 广西医学， 2008， 30（9）：1400-1401.

[6] 沈武， 陆瑶， 徐雪瑾， 等. 温度对冰冻红细胞保存的影响. 临床输血与检验， 2005， 7（2）：105-106.

[7] 胡丽华， 王学锋， 阎石， 等. 临床输血学检验技术（临床输血部分）. 北京：人民卫生出版社， 2015：113.

[8] 魏亚明， 刘景汉， 兰炯采， 等. 基础输血学. 北京：人民卫生出版社， 2011：458-463.

[收稿日期：2017-03-27]endprint