口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac的表达及与患者临床病理参数的关系

潘福勤，刘建辉，蔡春意，王静，周静，刘孟媛

(1沧州医学高等专科学校，河北沧州061001；2沧州市人民医院)

口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac的表达及与患者临床病理参数的关系

潘福勤1，刘建辉1，蔡春意2，王静1，周静1，刘孟媛1

(1沧州医学高等专科学校，河北沧州061001；2沧州市人民医院)

目的 观察口腔鳞癌组织中程序性细胞死亡蛋白5(PDCD5)、第二线粒体源性激活半胱天冬酶(Smac)的表达变化，并探讨其与患者临床病理参数的关系。方法 口腔鳞癌患者55例，取其癌组织及癌旁组织(距癌组织2 cm)55例份。应用免疫组化SP法检测患者口腔鳞癌组织、癌旁组织 PDCD5、Smac蛋白表达，分析PDCD5、Smac蛋白表达与口腔鳞癌患者临床病理参数的关系。结果 口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白表达阳性率低于癌旁组织(P均<0.05)。口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白表达阳性率与肿瘤的TNM分期以及淋巴结转移有关(P均<0.05)，与肿瘤的分化程度无关(P均>0.05);PDCD5与Smac蛋白表达呈正相关(rs=0.542，P<0.05)。结论 口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白表达降低，其二者低表达协同参与口腔鳞癌的发生发展。

口腔鳞癌；程序性细胞死亡蛋白5；第二线粒体源性激活半胱天冬酶；病理参数

鳞癌是我国口腔部常见恶性肿瘤，约占全部口腔部恶性肿瘤的80%以上[1，2]。研究表明，口腔鳞癌的发生是一个从正常黏膜上皮到黏膜白斑再到恶变的复杂过程，期间涉及到多种基因、蛋白和信号通路的异常改变[3]。程序性细胞死亡蛋白5(PDCD5)是我国北京大学人类疾病研究所发现的新型凋亡基因[4]。目前已有研究显示,PDCD5与多种疾病的发生有关，尤其与恶性肿瘤的发生和发展有密切关系[5]。第二线粒体源性激活半胱天冬酶(Smac)是近年新发现的一种促凋亡基因，主要参与细胞凋亡的相关反应。研究[6，7]发现，在食管癌、鼻咽癌中存在Smac的高表达。为探讨口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac的表达变化及其与临床病理参数的关系，笔者进行了相关探讨。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择沧州市人民医院2013年10月～2016年10月收治的口腔鳞癌患者55例，其中男35例、女20例，年龄20～68(41.2±3.4)岁。纳入标准：原发于口腔，排除其他部位的转移或者是复发型肿瘤；入院前未进行相关治疗，无其他重要脏器受损现象；临床资料完善。分化程度：高分化11例、中分化19例、低分化25例；根据国际抗癌联盟口腔鳞癌TNM分期标准：Ⅰ期8例、Ⅱ期17例、Ⅲ期19例、Ⅳ期11例；存在淋巴结转移20例、无淋巴结转移35例。患者均于手术时留取癌组织及距癌组织2 cm的癌旁组织标本，进行石蜡包埋处理，并进行0.5 mm连续切片。

1.2 组织PDCD5、Smac蛋白的检测 采用免疫组化SP法。将组织进行梯度乙醇脱水，蒸馏水冲洗，高温高压抗原修复，PBS缓冲液冲洗，加入生物素一抗，恒温孵育过夜，加入山羊血清和生物素二抗，PBS缓冲液冲洗，DAB显色，苏木精复染，中性树胶封片。具体的操作严格依照说明书实施。设置相应的阴性对照、阳性对照，前者使用 PBS代替一抗，阳性对照使用已知的阳性切片。鼠抗人 PDCD5 单克隆抗体以及鼠抗人Sam单克隆抗体均购自北京博奥森生物技术有限公司。氢体二氨基联苯胺显色的相关系统以及SP法的相关试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 结果评价 口腔鳞癌组织中PDCD5蛋白表达于细胞质以及细胞核中，Smac定位于细胞核中，表现出棕黄色颗粒状。癌细胞染色强度计分：细胞不显色为0分；淡黄色为1 分；棕黄色为2 分；棕褐色为3 分。根据阳性癌细胞数量所占百分比进行计分：癌细胞阴性为0 分，阳性癌细胞≤10%为1 分，11%～50%为2 分，51%～75%为3 分，﹥75%为4分。相应的染色强度和阳性细胞所占百分比乘积大于3 则是免疫反应阳性。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0统计软件。计数资料以频次或百分比表示，比较行χ2检验。采用Spearman相关分析两蛋白的关系。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PDCD5、Smac蛋白在口腔鳞癌组织以及癌旁组织中的表达 口腔鳞癌组织中PDCD5蛋白、Smac蛋白表达阳性率分别为29.09%(16/55)、12.73%(7/55)，低于癌旁组织的表达阳性率[78.18%(43/55)、30.91%17/55)](χ2分别为26.650、5.581，P均<0.05)。

2.2 口腔鳞癌组织PDCD5、Smac蛋白表达与患者临床病理特征之间的关系 见表1。口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白表达阳性率与肿瘤TNM分期以及淋巴结转移有关(P均<0.05)。

表1 口腔鳞癌组织PDCD5、Smac蛋白表达与患者临床病理特征之间的关系(例)

2.3 口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白之间的关系 口腔鳞癌组织组织中PDCD5与Smac蛋白表达存在正相关(rs=0.542，P<0.05)。

3 讨论

人体口腔黏膜的上皮从正常状态发展为鳞癌是一个涉及到多因素、多步骤的复杂过程。已有研究表明，在恶性肿瘤的发生、发展中，细胞凋亡扮演重要角色。细胞凋亡受到抑制将导致细胞生存期延长、细胞恶变[8]。目前研究认为，细胞凋亡主要有三条通路：死亡受体通路、内质网通路和线粒体通路，三条通路可以相互关联，共同发挥功能[9,10]。PDCD5定位于19q12～q13.1染色体上，最初在白血病细胞中发现[4]。近年研究证实，PDCD5和多种病症的发生以及发展相关联，特别是在肿瘤组织中PDCD5水平下降。然而在口腔鳞癌组织中PDCD5的表达情况并无过多文献报道[11]。Smac是近年发现的一种促凋亡基因，它主要参与凋亡过程中的下游反应，较高表达的Smac能够加速肿瘤细胞凋亡[12]。作为一种正常的线粒体型蛋白质，一旦人体的细胞发生凋亡，此蛋白就会释放到胞质中，与Caspase-9相互争夺凋亡抑制因子的BIR3区域；与此同时，联合X-连锁凋亡抑制蛋白的BIR2的相关基序[13]。有研究发现，肾细胞癌中Smac低水平表达能够加速顺铂介导的细胞凋亡现象[14]。

本研究通过对口腔鳞癌和癌旁组织PDCD5蛋白和Smac蛋白表达情况进行对比，发现口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白表达阳性率低于癌旁组织，表明口腔鳞癌组织中存在PDCD5、Smac蛋白的低表达。PDCD5、Smac蛋白可能通过促进细胞凋亡抑制细胞恶变，而当其表达水平降低时，细胞凋亡受抑，细胞发生恶变的概率增高。进一步分析发现，口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白表达阳性率与肿瘤的TNM分期以及淋巴结转移有关，与肿瘤的分化程度无关。对两种蛋白的相关性进行分析发现，PDCD5与Smac蛋白之间存在正相关。提示二者低表达共同参与口腔鳞癌的发生发展。

综上所述，口腔鳞癌组织中PDCD5、Smac蛋白表达降低，且其表达与肿瘤TNM分期以及淋巴结转移有关，二者低表达可能共同参与口腔鳞癌的发生与发展。

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河北省科技计划项目(162777266)。

刘建辉(E-mail: czliujianhui@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.29.020

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1002-266X(2017)29-0060-03

2017-05-14)