血清自身抗体检测对慢性HBV感染者的应用价值

黄程勇，黄毅，陈雯

(福建省立医院检验科,福建福州350001)

·检验与临床·

血清自身抗体检测对慢性HBV感染者的应用价值

黄程勇，黄毅，陈雯

(福建省立医院检验科,福建福州350001)

目的分析慢性HBV感染者自身抗体的体内变化情况，探讨其临床应用价值。方法选取137例HBV感染者，其中慢性乙型病毒性肝炎（CHB）72例、肝硬化（LC）35例、原发性肝癌（HCC）30例，分别检测抗核抗体（ANA）、类风湿因子（RF）、抗原抗体谱（ENA）和HBV DNA，同时对比ANA阳性组与ANA阴性组的丙氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（DBIL）、谷氨酰氨基转移酶（GGT）四项肝功能指标。结果137例慢性HBV感染者ANA检出率为37.2%，荧光模式以“颗粒型”和“均质型”为主，其中“颗粒型”29例（56.9%）、“均质型”15例（24.4%），滴度以1：100为主。HBV感染者中ANA阳性组4项肝功能指标均明显高于ANA阴性组（P=0.000），HBV感染者中HBV DNA阳性组和阴性组自身抗体检出率相比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论慢性HBV感染者体内存在不同程度的自身免疫反应，对自身抗体的监测有助于了解机体的免疫状况，对疾病的临床诊疗和转归具有一定的指导作用。

自身抗体；乙型病毒性肝炎；肝功能；类风湿因子

慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的慢性全身性传染性疾病，以肝脏损害为主，进一步可转化为肝硬化，肝癌，危害十分严重。近年来，国内外学者研究发现HBV感染者在体内存在大量的自身免疫性抗体[1，2]，为探索这些抗体与肝脏损害的关系，本文对72例慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者、35例乙肝后肝硬化（LC）患者、30例肝癌（HCC）患者血清中的抗核抗体（ANA）、类风湿因子（RF）及抗核抗体谱（ENA）进行检测，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2013年3月-2016年3月福建省立医本院收治的137例HBV感染者，其中慢性乙型病毒性肝炎（CHB）72例，男42例，女30例，年龄24～58岁，平均42.5岁；伴HBV感染的肝硬化（LC）35例，男26例，女9例，年龄31～75岁，平均46.4岁；伴HBV感染的原发性肝癌（HCC）30例，男24例，女6例，年龄34～71岁，平均47.6岁。所有HBVC感染者的诊断均符合《慢性乙型肝炎防治指南》2010版诊断标准[3]。对照组为50例来自于本院体检中心的健康体检者，均排除其他的自身免疫性疾病，其中男性28例，女性22例，年龄35～55岁，平均39.5岁。

1.2 检测方法

1.2.1 抗核抗体（ANA）和类风湿因子（RF）的检测ANA检测采用间接免疫荧光法，试剂购自德国欧蒙公司，操作及结果判断严格按照说明书执行，结果以组织或细胞内出现特征性绿色荧光，血清稀释度≥1：100为阳性。RF检测采用速率散射比浊法，检测仪器为西门子BNⅡ特定蛋白仪，并使用配套试剂。

1.2.2 抗核抗体谱（ENA）的检测采用免疫印迹法，试剂购自欧蒙公司，检测以下9种抗原的抗体：nRNP，Sm，SS-A，SS-B，Ro-52，Scl-70，核小体，组蛋白，核糖体P蛋白。

1.2.3 肝功能指标及HBV DNA定量检测采用罗氏全自动生化分析仪和配套试剂检测丙氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（DBIL）、谷氨酰氨基转移酶（GGT），ALT、AST、GGT采用速率法检测，DBIL采用重氮盐法检测。HBV DNA定量采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测，检测仪器为美国ABI公司ViiA 7实时荧光PCR仪，试剂购自中山大学达安基因股份有限公司。

1．3统计学方法采用SPSS 18.0统计软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间采用t检验。计数资料用百分数形式表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 137例HBV感染者自身抗体检测结果137例慢性HBV感染者中，至少有一项自身抗体阳性55例，总检出率为40.1%(55/137)，明显高于对照组，比较差异有统计学意义（P＜0.05）。CHB组、LC组、HCC组自身抗体检出率分别为33.3%(24/72)、48.6%(17/35)、46.7%(14/30)，均显著明显高于对照组4%（2/50），比较差异均有统计学意义，（P＜0.05），但三个分组间自身抗体检出率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 慢性HBV感染者各组自身抗体的检出率比较[n（%）]

2.2 HBV感染者中检出的ANA阳性免疫荧光模式构成137例HBV感染者中共检出51例，荧光模式以“颗粒型”和“均质型”为主，其中“均质型”15例（24.4%），“颗粒型”29例（56.9%），其它核型较少见。见表2。

表2 51例ANA阳性慢性HBV感染者荧光模式构成[n（%）]

2.3 HBV感染者中检出的ANA滴度分布ANA的滴度以1：100为主，并在CHB组中出现1例滴度为1：3200的标本。见表3。

表3 51例ANA阳性慢性HBV感染者血清ANA滴度分布情况[n（%）]

2.4 HBV感染者ANA阳性组与ANA阴性组的肝功能指标HBV感染者中ANA阳性组4项功能指标明显高于ANA阴性组，两组结果经t检验，P值均小于0.05（P=0.000），结果差异显著，有统计学意义。见表4。

表4 慢性HBV感染者ANA阳性组与ANA阴性组的肝功能指标比较

2.5 HBV感染者自身抗体与HBV DNA的关系137例慢性HBV感染者中HBV DNA阳性者106例，自身抗体检出率39.6%（42/106），而HBV DNA阴性者31例，自身抗体检出率41.9%（13/31），两组检出率比较差异无统计学意义（χ2=0.995，P＞0.05）。见表5。

表5 慢性HBV感染者自身抗体与HBV DNA的关系[n（%）]

3 讨论

HBV感染的致病机制目前尚不十分清楚，有研究显示HBV引起肝组织的损伤并非HBV在肝细胞内复制繁殖直接作用引起的[4，5]，在HBV与肝细胞相互作用的不同进程中，引起机体一系列免疫反应造成的病理性免疫损害[6，7]。这种免疫损伤主要包括细胞介导的免疫损伤、免疫复合物引起的免疫损伤及自身免疫反应引起的免疫损伤[8，9]。

慢性HBV感染患者自身抗体检出率国内外文献报道结果不尽相同[10，11]，本研究在137例HBV感染者中ANA检出率为37.2%，ENA检出率为9.4%，RF检出率为16.7%，总检出率为40.1%，HBV感染者总检出率与正常对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。CHB组、LC组和HCC组三组分别与正常对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。在CHB组LC组HCC组三组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。自身抗体检出率与文献报道结果偏高，可能原因：⑴可能与检测实验室检测人员对镜下荧光强弱的判读有关。⑵与收集的病例数和患者的病程及年龄有关。在HBV感染者体内检出多种自身抗体，表明在HBV感染后，引发机体免疫系统紊乱，体内出现非特异性自身免疫性抗体。有研究指出，ANA具有早期诊断HCC的价值，ANA会在HCC早期出现血清学转换，这种过程要显著高于血清AFP浓度的升高[12]。且在慢性肝炎发展成肝硬化，再到肝癌的过程中，会伴随着自身抗体的产生，出现多种自身抗体荧光核型及较宽的自身抗体谱[13-16]。本研究中自身抗体ANA的荧光核型以“颗粒型”和“均质型”为主，与文献报道相同[17]。滴度多为低滴度1：100和1：320。RF是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体，HBV感染出现RF升高可能是由于感染后形成的抗原抗体复合物在体内的长期沉积，刺激机体产生变性的IgG因子而使RF升高。

本研究显示ANA阳性组的HBV感染患者的ALT、AST、TBIL、GGT明显高于ANA阴性组，比较差异有统计学意义（P＜0.05），提示ANA阳性组肝功能损伤程度较ANA阴性组重，可能是自身抗体与肝细胞相互相互作用引起肝组织损伤，导致转氨酶的释放。本研究还显示HBV DNA阳性组和HBV DNA阴性组自身抗体的总检出率比较，结果未见明显差异（P＞0.05）。提示自身抗体的出现与HBV在体内复制水平的高低无关。

综上所述，HBV可通过多种途径损害免疫系统，诱发自身免疫反应，对慢性HBV感染患者检测自身抗体，有助于了解机体的免疫状况，对疾病的临床诊疗和转归具有一定的指导作用。

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R512.6+2，R446.62

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2016-12-06；

2017-06-01)