三种固定液使用情况的比较

易颂佳，黄猛，刘妙，向淑云，罗娜，谢明

(湘南学院，1、2013级预防医学1班；2、病理研究所，湖南郴州423000)

·质量控制·

三种固定液使用情况的比较

易颂佳1，黄猛1，刘妙1，向淑云1，罗娜1，谢明2

(湘南学院，1、2013级预防医学1班；2、病理研究所，湖南郴州423000)

目的将环保型标本保存液、无醛GS固定液和10%的甲醛液，保存新鲜病理组织、比较三种液体对病理标本防腐固定作用有何不同，探索无醛GS固定液取代10%甲醛液的可能性。方法分别用环保型标本保存液、无醛GS固定液和10%甲醛液固定同类活检标本48h，进行常规石蜡切片染色，观察三种不同固定方法对组织常规石蜡切片效果影响。另外将新鲜组织标本放入以上三种固定液中固定1年，观察病理标本在三种固定液中的差别。结果10%甲醛液与无醛GS固定液对新鲜标本固定效果相同，常规石蜡切片组织细胞结构同样清晰；用10%甲醛液和无醛GS固定液固定2个月后的标本放入保环保型标本保存液保存效果良好，未经处理的新鲜组织单用放入环保型标本保存液做固定效果差，标本组织腐烂发霉、液体浑浊及标本上浮水平面等现象。结论无醛GS固定液对病理标本的固定、组织制片的效果与10%甲醛液有同样效果，无醛GS固定液完全可替代致癌剂甲醛液在标本固定、组织切片制作中的运用；环保型标本保存液用于经过无醛GS固定液固定2个月以上的病理标本保存效果好。

环保型标本保存液；无醛GS固定液；10%甲醛液；标本固定

甲醛是一种结构简单、用途广泛、易溶于水、挥发性很强的醛类物质，且其挥发性随着环境温度的升高而加快。甲醛在目前我国有毒化学品控制名单中位列第二，已经被确定为是致癌和致畸物。甲醛的毒性作用分为一般毒性和特殊毒性两种，对免疫、神经、内分泌等系统的影响属于一般毒性，特殊毒性主要指遗传、致癌和生殖毒性[1]，甲醛侵入人体的途径主要包括呼吸道吸入、皮肤黏膜接触及经消化道食入等三种途径。甲醛的化学性质很活泼，在常温下挥发性强，且在此种状态下甲醛聚合物能释放出微量气态甲醛，因此呼吸道吸入是职业接触甲醛者的主要暴露途径[2，3]。对于病理实验室人员，特别是工作在一线的医生及技术人员长期暴露于甲醛严重超标的环境中，对身体健康造成严重的危害[4，5]。为了降低甲醛对人类的危害，找到与它具有相同固定作用效果的固定液且毒性相对较低、危害较小的新型环保液来替代传统的甲醛液是迫在眉睫的事[6，7]。

1 材料与方法

1.1 材料手术离体甲状腺组织9例、购买新鲜鸡肝标本27例、标本缸、注射器等。

1.2 试剂无醛GS固定液，由哈尔滨格林标本技术开发有限公司生产，生物组织标本制备液专利号：201110023746.0；甲醛试剂由张家港华亿科教设备有限公司生产。环保型标本保存液，张家港华亿科教设备有限公司生产，CJM-Y001温州医学院防霉研究所研制，专利号：ZL200710005074。

1.3 方法收集医院病理科手术离体甲状腺组织9例，待快速冰冻切片诊断结果出来后，余下新鲜组织分成三组，分别放入10%甲醛液、环保型标本保存液、无醛GS固定液固定，每组3例24h后，取材脱水进行H-E制片，观察三种液体固定标本后，进行H-E染色的效果有何不同。另取新鲜鸡肝标本27例，首先将其中9例分成三组，分别直接放入10%甲醛液3例、环保型标本保存液3例、无醛GS固定液3例；另外9例鸡肝标本放入10%甲醛液中处理两个月后，再分别放入10%甲醛液3例、环保型标本保存液3例、无醛GS固定液3例；剩下9例鸡肝标本放入无醛GS固定液中处理两个月后，再分别放入10%甲醛液3例、环保型标本保存液3例、无醛GS固定液3例。每个标本陈列缸的液平面高于标本4cm，时间一年，过程中不加液体。

2 结果

2.1 H-E染色环保型标本保存液处理组织后染色效果差一些，其染色细胞膜分界不太清楚，胞浆和胞核着色欠鲜艳、组织显得松散。使用无醛GS固定液制备的组织蜡块，在切片中感觉组织软硬适中，没有过硬现象，常规H-E染色速度快，组织结构清楚，细胞形态完整，核浆比清晰，无醛GS固定液在保持组织形态学与10%甲醛液相比无明显差异，色比度适宜。见图1～3。

图1 H-E10×40(甲状腺瘤，环保型标本保存液制作)

图2 H-E10×40(甲状腺瘤，10%甲醛液制作)

图3 H-E10×40 (甲状腺瘤，无醛GS固定液制作)

2．2环保型标本保存液、无醛GS固定液与10%甲醛液固定大体标本对比1年后开盖检查，三种液体的量及色质情况：标本陈列缸内液体量均下降，10%甲醛液、环保型标本保存液及无醛GS固定液液面分别下降了1.0cm、2.0cm及1.0cm。新鲜鸡肝标本的环保型标本保存液组，液体浑浊并开始变黄，标本柔软度较明显；无醛GS固定液组液体清晰透亮；而10%甲醛液组色质纯清无变化，标本的手感、色质、固定效果见表1。经过10%甲醛液固定2个月的标本，分别放入盛有三种试剂的标本陈列缸，1年后开盖检查，环保型标本保存液组液体淡褐色透明，标本自然正常，未见霉变，质地中等；无醛GS固定液组液体淡黄清晰透亮；10%甲醛液组液色质纯清无变化，标本的质地、手感、色质、固定效果见表2。实验结果显示标本经过10%甲醛液固定处理2个月后，环保型标本保存液、无醛GS固定液与10%甲醛对标本保存效果无明显的差异。

表1 一年后各组新鲜组织标本的保存效果情况

表2 一年后各组10%甲醛液固定2月的组织标本的保存效果情况

3 讨论

2004年WHO宣布甲醛为致癌物质，同时提醒人们要重视甲醛的致癌性，并采取预防措施。有关研究表明甲醛具有以下缺点：⑴具有较强烈的刺激性和腐蚀性[8]，对环境造成严重污染，而防护又极为困难；⑵甲醛存放过久易产生白色沉淀(即三聚甲醛)，而影响组织标本固定效果；⑶甲醛容易氧化变成甲酸，使溶液变为酸性，导致标本酸化，严重时影响细胞核的染色效果；⑷组织长时间固定影响染色效果[9]；⑸废液需特殊处理，不能直接排入下水管道，且处理费用较高。而目前在我国绝大部分病理科仍然应用甲醛作为日常工作中的固定液[10-13]。因甲醛存在上述诸多缺点，并且随着人们对实验室环境安全的更高要求，近年来许多学者都在寻找能够取代甲醛的新型固定剂[14]。

本实验结果表明，无醛固定液能够良好地保存组织细胞的形态结构，对组织无明显收缩和膨胀作用，甲醛固定的组织细胞结构尚完好[15]，组织切片HE染色效果良好，制成的切片完全符合病理诊断的需求，无醛GS固定液可以替代传统甲醛作为病理科的常规组织固定液使用。另外我们实验研究发现，把标本放入环保型标本保存液之前，先要用10%甲醛固定好标本，这样，环保型标本保存液也完全可以替换10%甲醛保存标本，用于医学院校病理学大体标本的制作上。环保型标本保存液具有安全无毒优点，从根本上解决了甲醛对人体的危害及对环境污染等问题，也能够满足教学和科研的需要。环保型标本保存液和无醛格林固定液替代甲醛液，从根源上减少了致癌剂甲醛废弃液体向下水道排放量(一所医学院校和一所二甲医院甲醛液用量约130000ml/年)，环保标本保存液取代甲醛液还可以推广到组织胚胎学实验室和解剖学实验实验室，减少甲醛教学人员的伤害。如果在全市、全省和全国推广使用环保液取代甲醛液的使用，对保护大家赖以生存的环境，有着长远的社会效益。

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R446.8

A

1674-1129(2017)04-0502-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.015

2017-03-06；

2017-04-30)

湖南省科学技术厅科技社会发展支撑计划(2014SK4070）、郴州市科技计划项目（郴财教指【2014】44号）、湘南学院重点建设学科免疫学研究方向(2012年12号)、湖南省协同创新性实验中心药理学方向（2014年35号)

谢明，女，湘南学院病理研究所学士，教授，副主任医师。E-mail：1521184669@qq.com