江西地区455例地中海贫血的筛查结果分析

聂益军，吕小林，林慧，肖婕，崔琪，万腊根

(南昌大学第一附属医院检验科，江西南昌330006)

·论著·

江西地区455例地中海贫血的筛查结果分析

聂益军，吕小林，林慧，肖婕，崔琪，万腊根

(南昌大学第一附属医院检验科，江西南昌330006)

目的了解和探讨江西地区α、β地中海贫血基因突变类型的分布情况，为江西地区的基因诊断、遗传咨询提供参考依据。方法回顾性分析南昌大学第一附属医院2015年6月-2016年5月455例人群（包括191例疑诊地中海贫血患者及264例孕妇），进行α、β地中海贫血基因筛查，对α、β地中海贫血基因的分布概况及基因型频率进行统计分析。结果455例检测人群中，检测出α地中海贫血基因缺陷患者50例（10.99%），β-地中海贫血基因缺陷患者68例（14.95%）。50例α-地中海贫血主要是-SEA基因缺失、-α3.7基因缺失及-SEA/-α3．7基因缺失3种类型，其频率分别为-SEA基因缺失杂合子33例（66.00%），-α3.7基因缺失杂合子7例（14.00%），-SEA/-α3．7基因缺失杂合子4例（8.00%）；68例β-地中海贫血中，包括7种基因突变类型，其中前3位基因型分别为IVS-Ⅱ-654(C→T)（42.64%），CD41-42(-TCTT)（26.47%）、CD17(A→T)（19. 12%）。结论虽然江西省地区不是地中海贫血的高发区，但仍应加强地中海贫血分子流行病学的调查、产前诊断和遗传咨询，这对促进优生优育，提高人口素质有重要的意义。

江西地区；地中海贫血；基因类型分析；回顾性研究

地中海贫血（Thalassemia）是一种常见的单基因遗传性溶血性血液疾病，最早发现于意大利等地中海区域，亦称海洋性贫血[1]。中国常见于东南沿海、西南地区以及台湾地区，其中广西人群中地中海贫血基因携带率为12.22%～23.02%[2-4]。现有研究表明，江西地区α地中海贫血也存在一定的检出率[5]，但目前为止，未见江西地区α、β检出率的整体报道，因此，本研究对南昌大学第一附属医院血液科191例疑诊地中海贫血患者及妇产科264例孕妇进行α、β地中海贫血基因筛查，现报道如下。

1 材料与方法

1．1一般资料2015年6月至2016年5月在南昌大学第一附属医院455例人群进行α、β地中海贫血基因筛查，其中191例疑诊地中海贫血的血液科患者、264例地中海贫血基因筛查的孕妇；男性89例，女性366例；年龄从出生1d～82岁。

1．2仪器与试剂Sysmex XN2000全自动血细胞分析仪(Sysmex公司)，DYY8B电泳仪(北京六一公司)，ABI2700基因扩增仪(ABI公司)，YN-H16恒温杂交仪（深圳亚能生物技术公司），α、β地中海贫血基因检测试剂盒购自深圳亚能生物科技有限公司。

1.3 检测方法

1.3.1 标本采集及DNA提取扩增采用真空无菌EDTA抗凝管，抽取受检者外周静脉血标本3ml。其中血液科患者以平均红细胞体积(MCV)＜80fL或平均红细胞血红蛋白含量(MCH)＜27pg为地贫表型阳性的筛查指标[6，7]；妇产科孕妇以自愿筛查原则参与调查。外周血基因组DNA的提取采用厂家提供的全血基因组DNA提取试剂盒，并用定量分析仪检测其浓度和纯度合格后进行PCR扩增。

1.3.2 α地中海贫血缺失型基因的检测基因采用跨越断点PCR方法(Gap-PCR)对中国人常见的3种缺失型α地中海贫血基因(--SEA、-α3.7、-α4.2)进行检测，取待检DNA样品4.0μl加入总反应体系，按以下条件扩增：96℃预变性5min；然后98℃变性45s，64℃退火90s，72℃延伸3min，35个循环；72℃延伸5min。扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下观察结果。

1.3.3 α地中海贫血非缺失型及β地中海贫血点突变基因的检测应用PCR和DNA反向点杂交检测α-地中海贫血αQS、αCS、αWS三种点突变类型，并检测中国人常见的17种β地中海贫血基因突变位点，包括9种β0起始密码子：(ATG→AGG)、CD41-42(-TCTT)、CD31(-C)、CD14-15(+G)、CD17 (A→T)、CD71-72(+A)、IVS-Ⅰ-1(G→T)、CD43(G→T)、CD27-28(+C)；及8种β+：IVS-Ⅱ-654(C→T)、-28(A→G)、-29(A→G)、-30(T→C)、-32(C→A)、CAP+ 40-43(-AAAC)、IVS-Ⅰ-5(G→C)、βE。

PCR扩增参数：94℃预变性5min；然后94℃变性60s，55℃退火30s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸5min。电泳分析PCR扩增产物，将扩增产物与特异性标记探针的RDB膜条进行反向杂交，经洗膜、显色、漂洗后观察结果。

1.4 统计学分析用SPSS 15.0统计，计数资料用百分率(%)表示。

2 结果

2.1 筛查概况455例检测人群中，检测出α地中海贫血基因患者50例（10.99%），β-地中海贫血基因患者68例（14.95%）。264例孕妇检出地中海贫血表型48例（18.18%），其中α地中海贫血基因23例（8.71%），β-地中海贫血基因25例（9.47%）。血液科191例疑诊地中海贫血患者中，检出地中海贫血表型70例（36.65%），其中α地中海贫血基因27例（14.14%），β地中海贫血基因43例（22.51%），具体结果见表1。

2.2 50例α地中海贫血基因检测结果50例α-地中海贫血中，-SEA/α基因缺失杂合子33例，-α3.7/α基因缺失杂合子7例，-SEA/-α3.7基因缺失杂合子4例，-α4.2/α基因缺失杂合子1例。比例占前三的分别为为-SEA/α（66.00%）、-α3.7/α（14.00%）、-SEA/-α3.7（8.00%）。50例α地中海贫血基因检测结果见表2。

2.3 68例β-地中海贫血基因检测结果68例β-地中海贫血中，包括7种基因突变类型，基因型包括CD41-42(-TCTT)18例，CD14-15(+G)1例，CD17 (A→T)13例，CD71-72(+A)3例，IVS-Ⅱ-654(C→T) 29例，-28(A→G)1例，βE/CD41-42 1例。前3位基因型分别为IVS-Ⅱ-654(C→T)（29/68），CD41-42 (-TCTT)（18/68）、CD17(A→T)（13/68），具体结果见表3。

表1 地中海贫血筛查概况

表2 50例α地中海贫血基因检测结果

3 讨论

地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一，是世界上最常见和发病率最高的遗传性溶血性贫血性疾病，也是危害最严重的血红蛋白病之一[8，9]。人体内的血红蛋白由四个亚基构成，分别为两个α亚基和两个β亚基。按照人α－地贫基因缺失或α－地贫基因点突变而造成α珠蛋白链合成障碍而造成的贫血，可将α－地贫分为缺失型α－地贫和非缺失型α－地贫两大类型；而按照β－珠蛋白基因点突变而造成β－珠蛋白肽链合成减少或缺失产生的溶血性贫血均称为β－地贫。地中海贫血广泛分布在全世界沿海地区。中国常见于东南沿海、西南地区以及台湾地区[2-4]。游雪云等[5]曾对江西省地区孕妇α-地中海贫血基因进行筛查，发生率为1.59%，且以缺失型α－地中海贫血为主，但未见江西地区β-地中海贫血基因型的报道。本文首次整体报道了江西地区α及β-地中海贫血基因的概况及分布频率。

目前已经发现α-地中海贫血的基因突变型至少有81种，其中46种点突变，35种缺失突变[10]。研究发现中国地区常见的3种α-地贫主要由--SEA(东南亚缺失)、-α3.7缺失(右缺失)、-α4.2缺失(左缺失)和αCS、αQS、αWS三种突变引起，本次研究发现，α－地中海贫血基因检出率为10.99%，是由于其中包括血液科疑诊地中海贫血患者，而使检出率显著高于筛查人群。同时本次研究也发现，α－地中海贫血以-SEA/α基因缺失杂合子为主，其次为-α3.7/ α，与成明[11]、钟田雨[12]等报道相似。另发现-SEA/α合并-28/β一例，同时检测出αCS/α、αWS/α各一例。

β-地中海贫血基因突变类型至少有186种，主要为点突变。每个民族或群体有特定的突变类型[13]，本试剂盒针对中国人常见的17种β-地中海贫血基因突变位点进行检测，调查发现的基因型包括CD41-42(-TCTT)18例，CD14-15(+G)1例，CD17(A→T)13例，CD71-72(+A)3例，IVS-Ⅱ-654 (C→T)29例，-28(A→G)1例，βE/CD41-42 1例。前3位基因型分别为IVS-Ⅱ-654(C→T)（42.64%），CD41-42(-TCTT)（26.47%）、CD17(A→T)（19.12%），与罗娟莉等[14]报道的福建闽北地区β-地中海贫血基因类型前3位一致。而与李敏清等报道的广西各民族[15]、杜伟等报道的重庆地区[16]地中海贫血基因型分布不同，说明β-地中海贫血基因点突变在中国各地区或各民族之间有明显的遗传特性。

虽然江西省地区不是地中海贫血的高发区，但本次调查发现孕妇的地中海贫血基因携带率占18.18%，因此应加强地中海贫血分子流行病学的调查、产前诊断和遗传咨询，对促进优生优育，提高人口素质有重要的意义。

表3 68例β-地中海贫血基因检测结果

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Analysis of the Screening 455 Thalassemia Patients in Jiangxi Region

NIE Yijun，LV Xiaolin，LIN Hui，XIAO Jie，CUI Qi，WAN Lagen.Department of Clinical Laboratory，First Affiliated Hospital of Nanchang University，Nanchang 330006，China.

Objective To investigate the distribution of α，β-thalassemia gene mutation in Jiangxi region provides references for gene diagnosis and genetic counseling.Methods A retrospective analysis had been made in 455 cases，including 191 suspected thalassemia patients and 264 pregnant women，were recruited in the First Affiliated Hospital of Nanchang University from June 2015 to May 2016.The distribution and genotype frequencies of α，β-thalassemia gene mutation were analyzed.Results 50 cases (10.99%)and 68 cases(14.95%)were diagnosed as α-thalassemia and β-thalassemia from the total 455 cases，respectively.The main types of the 50 cases of α-thalassemia were deletion-SEA，-α3.7 genes and-SEA/-α3.7，the distribution frequencies of which were 33 cases(66.00%)，7 cases(14.00%)and 4 cases(8.00%)，respectively；seven kinds of gene mutations were found in 68 cases β-thalassemia patient，the top three number of which were IVS-Ⅱ-654(C→T)(42.64%)，CD41-42(-TCTT)(26.47%)，CD17(A→T)(19.12%).Conclusion Although the incidence of thalassemia is not high in Jiangxi area，molecular epidemiology，genetic counseling and prenatal diagnosis should still enhance application research of thalassemia diagnosis，to promote pre-potency and improve population quality.

∶Jiangxi region；Thalassemia；Gene mutation distribution；Retrospective analysis

R556.6+2，Q523

A

1674-1129(2017)04-0458-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.002

2017-02-21；

2017-04-29)

国家自然科学基金，编号Nos：81660144

聂益军，男，1973年生，学士，医学检验，副主任技师，主要从事分子诊断及临床检验诊断等方面研究。

万腊根，男，1964年生，主要从事血液分子学及实验室管理，主任医师，教授，硕士研究生导师，E-mail：564604485@qq.com。