BC-6800血细胞分析仪精密度和正确度性能验证

吴志成，董晶，李进，肖建萍，石孝勇

(1、北京大学深圳医院检验科，广东深圳518036；2、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，广东深圳518057)

BC-6800血细胞分析仪精密度和正确度性能验证

吴志成1，董晶1，李进2，肖建萍2，石孝勇2

(1、北京大学深圳医院检验科，广东深圳518036；2、深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，广东深圳518057)

目的对深圳迈瑞BC-6800全自动血细胞分析仪精密度和正确度性能进行验证。方法参照新发布WS/T 492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》行业标准，使用3个水平的BC-6D质控品在BC-6800上进行5d 5个分析批的精密度测试，验证厂家声明的精密度；挑选20例健康体检患者标本分别在BC-6800上测试后再送至迈瑞标准化实验室进行参考方法的盲测，对BC-6800的正确度进行验证。结果BC-6800上三个水平质控品室内精密度均低于厂家宣称值，且均低于CLIA’88指标的1/4；BC-6800与参考方法配对t检验显示各参数结果均无显著性差异（P>0.05），且室内偏倚值均在预期偏差零值的99%置信区间内。结论BC-6800全自动血细胞分析仪的精密度和正确度性能均通过厂家声明的验证，符合实验室高效检验对精密度和正确度的要求，可用于临床血液标本的检测。

血细胞分析仪；精密度；正确度

为保证定量检测项目的有效性和完整性，确保检测结果的质量水平，由国家卫生计生委临床检验中心及多家大型医院联合起草、由国家卫生和计划生育委员会于2016-07-07发布了卫生行业标准WS/T 492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》，并计划于2016-12-15正式实施[1]。现本实验室基于此行业标准，率先对深圳迈瑞公司生产的BC-6800全自动血液细胞分析仪进行精密度和正确度的性能验证，检验其是否符合厂家的性能宣称以及实验室高效检验[2]的要求。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器与试剂深圳迈瑞BC-6800全自动血细胞分析仪、其配套试剂及质控品及校准品。

1.1.2 实验样本精密度性能验证使用高中低三个水平BC-6D质控品；正确度性能验证所用20例标本来源于本院健康体检者，其中男女各10例，年龄21～45岁。采集静脉血2ml，置于含乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）的BD真空采血管中。所有样本在采血后2h内用BC-6800全自动血细胞分析仪完成血常规检测，6h内完成WBC，RBC，HGB，HCT，PLT参数参考方法的检测。

1.2 方法根据卫生行业标准WS/T 492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》进行操作。评价参数包括：白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）、红细胞压积（HCT）、红细胞平均体积（MCV）、血小板计数（PLT）。

1.2.1 精密度评价连续测定5d质控品，每天一个分析批，每批三个浓度水平，每一个浓度水平质控从冰箱取出后放置15～20min使其恢复至室温，然后在BC-6800上重复测定3次；如果因为质量控制程序或操作问题判断一批为失控，应剔除数据，并增加执行一个分析批。

1.2.2 正确度评价挑选20例健康体检者的EDTA-K2抗凝静脉全血标本，在4d时间内，每天检测5份样品，分别使用以下方法进行检测，试验设计遵从盲法原则。

1.2.2.1 迈瑞BC-6800全自动血细胞分析仪检测取标本混匀后，严格按照分析仪标准操作手册和实验室SOP文件在仪器上进行分析，所有标本均采用手动模式进行测试；测试完毕后将样品送至深圳迈瑞公司溯源实验室，使用参考方法对样品进行盲测。

1.2.2.2 迈瑞标准化实验室参考方法检测WBC/ RBC计数参考方法：参照ICSH 1994推荐的参考方法[3]，使用单通道、阻抗原理的半自动电子计数仪（Coulter Z2粒子计数仪）分别对WBC/RBC进行计数，通过重叠校准对结果进行了校正；PLT计数参考方法：参照ICSH2001推荐的参考方法[4]，使用CD41-FITC和CD61-FITC标记血小板，使用Bricyte E6流式细胞仪检测PLT/RBC比值，再乘以RBC数值得到PLT计数值；HGB检测参考方法：参照CLSI H15-A3标准[5]，使用氢化高铁血红蛋白法对血红蛋白进行测量；HCT检测参考方法：参照CLSI H7-A3标准[6]，使用微量压积离心法测量PCV，没有修正残留血浆。

1.3 统计分析数据统计参照行标的要求，使用Excel 2013进行精密度和正确度数据整理和计算；使用analyse-it(v4.20)统计软件进行正确度评价中配对t-检验的统计分析，并绘制Bland-Altman偏差散点图。计量数据以均值±标准差（x±s）表示；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 精密度结果通过三个水平质控均值，计算其不同浓度水平处的标准差Sclaim值用于验证值V的计算。精密度检测结果显示各参数实验室内不精密度结果（Sl）小于其计算的验证值（V），说明实验室内BC-6800仪器通过厂家精密度声明的验证。见表1。

2.2 正确度结果将20例新鲜血样品分别使用BC-6800及参考方法各检测2次，计算检测结果的平均偏差，并使用analyse-it（v4.20）统计软件对两组数据进行配对t检验分析，计算检验统计量t以及P值，统计结果表明BC-6800与参考方法在检测外周血WBC，RBC，HGB，HCT，PLT参数时均表现为P＞0.05，故差异无统计学意义。厂家预期BC-6800与参考方法之间无明显偏差，即按零值计算各参数厂家声明验证限（CI99%），结果表明各参数实验室内偏倚值均在厂家声明的验证限之内，说明BC-6800检测结果与参考方法结果一致。具体结果详见表2。各参数Bland-Altman偏差散点图如图1所示。

图1 正确度性能验证Bland-Altman偏差散点图

表1 精密度检测结果

表2 正确度检测结果

3 讨论

迈瑞BC-6800全自动血液细胞分析仪是深圳迈瑞公司2011年推出的一款中高端五分类血液细胞分析仪，可单机使用也可以连接到轨道上形成流水线，极大地提升检验效率。该分析仪以含二次鞘流的半导体激光流式细胞术、鞘流电阻抗检测法和核酸荧光染色等先进技术并完美融合了SF-Cube三维算法分析技术[7]，可对血液中的多种组分进行定量分析，而且同系列仪器还可对体液进行定量检测[8]，可满足客户的多种需求。作为新的血细胞分析仪，在投入临床使用前对其进行性能验证十分必要，我们也注意到有部分医院对BC-6800有做过较为全面的验证或研究[9-11]，但较少有比较深入的对精密度及正确度进行验证。

临床检验定量测定项目有两项重要的性能特征，一项是精密度，以标准差或变异系数表示；另一项是正确度，代表的是系统误差，以偏倚表示。卫计委新发布的行业标准是制定重复性试验和方法比对试验或测量标准物质的试验方案，为临床实验室的精密度和正确度性能验证提供了参考依据。新的检测系统在正式用来检测病人样品、发出检验报告前，实验室要对系统的操作分析性能作实验予以证实，因此当已确认的系统进入临床实验室时，临床实验室首次要做的最基础的工作就是进行精密度和正确度的性能验证。通过重复性试验方案来评价随机误差是否满足厂商声明的精密度要求；通过方法比对或测量标准物质试验方案来评价检测系统的系统误差，即正确度验证[12]。

国际血液学标准化委员会（ICSH）和美国临床和实验室标准协会（CLSI）近年来发布了很多标准或指南用于定量程序的验证和确认[13]。关于精密度和正确度的验证方法，分别在ICSH1994、ICSH2014中有详细的介绍，在CLSI H26、CLSI EP15、EP05、EP09等标准/指南中也提供了可供参照的方法。本次发布的行业标准主要依据CLSI EP15-A2中精密度和正确度的评价方法[14]进行制定[15]，用于指导实验室用户对选定测量程序的验证和认定。

该行业标准提供了一种精密度验证方案，基于5d 2个以上水平样品5个分析批的定量检测数据，计算实验室内精密度结果（标准差SD和/或变异系数CV%），并将其与厂家声明的精密度进行对比验证。本试验数据表明BC-6800全自动血细胞分析仪上不同水平的质控品各检测参数的室内不精密度均小于各参数厂家精密度声明及其计算的验证值，并且三个水平质控品的WBC，RBC，HGB，HCT，PLT参数的室内不精密度CV%均低于美国临床实验室管理法规（CLIA’88）指标的1/4，说明本实验室的BC-6800具备良好的精密度性能。

该行业标准同时提供了两种正确度验证方案，第一种方法为分析具有指定值的参考物质，推荐的参考物质包括：⑴具有互换性的有证参考物质；⑵具有溯源性及互换性的正确度验证物质，并且推荐至少选择2个浓度水平参考物质，在3~5d时间内每批进行2次重复测定，然后计算均值和标准差。由于本实验室缺乏定值的血细胞分析参考物质，因此参考了第二种使用患者样品的正确度验证方案进行正确度的性能验证。行标中提到“使用患者样品的正确度验证方案中比较方法首选是参考方法”，因此本实验室联合深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司的标准化实验室，该实验室于2009年6月获得中国合格评定国家认可委员会CNAS认可（CNAS L4090），符合ISO/IEC 17025：2005检测和校准实验室能力通用要求（CNAS-CL01《检测和校准实验室能力的认可准则》）的要求，具备承担认可证书所列的校准服务能力。由其对选定的新鲜血样品中的WBC，RBC，HGB，HCT，PLT参数进行参考方法定值。WBC/ RBC分别由Z2粒子计数仪法进行定值；HGB由氰化高铁血红蛋白法进行定值；HCT由微量压积离心法进行定值；PLT则由流式细胞仪法进行定值[10]。此方法得到的是真正的“偏倚”，代表了深圳迈瑞BC-6800全自动血细胞分析仪真正的系统误差，本试验数据说明BC-6800与参考方法之间具有良好的一致性。

综上所述，BC-6800全自动血细胞分析仪精密度和正确度均通过厂家声明的验证，可以用来检测临床血液标本并发报告。此外，行标中要求在进行患者样品的正确度验证时，其浓度水平应覆盖检测方法的可报告范围，但是考虑到实际操作的可行性以及参考方法检测的限制，如高值WBC或高值PLT会干扰HGB检测等问题，本次试验主要以健康体检患者标本进行正确度性能验证，而对于异常计数值样本的检测还有待进一步的探讨。

[1]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.中华人民共和国卫生行业标准WS/T 492-2016临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证[S].（2016-7-7）[2016.12.15].

[2]冯仁丰.高效检验对精密度的要求[J].上海医学检验杂志，2000，15(5)：270-272.

[3]Peng L，Wang W，Bai L.Performance evaluation of the Z2 coulter counter for WBC and RBC counting[J].Int J Lab Hematol，2007，29，361-368.

[4]International Council for Standardization in Haematology Expert Panel on Cytometry，International Society of Laboratory Hematology Task Force on Platelet Counting.Platelet counting by the RBC/ platelet ratio method：a reference method[J].Am J Clin Pathol 2001，115(3)：460-464.

[5]CLSI H15-A3：Reference and selected procedures for the quantitative determination of hemoglobin in blood.Approved standardthird edition[S].2000.

[6]CLSI H07-A3：Procedure for determining packed cell volume by the microhematocrit method.Approved standard-third edition[S]. 2000.

[7]李朝阳.荧光标识检测精准立现：BC6800试剂平台暨SF Cube解析[J].世界医疗器械，2011，17(10)：52-60.

[8]寿爽，谭焕腾，金晓娟，等.迈瑞BC-6900全自动血细胞分析仪在临床体液细胞检测中的应用[J].实验与检验医学，2015，33（6）：751-753.

[9]吴卫，解宏杰，王庚，等.BC-6800全自动血细胞分析仪临床性能评价[J].中国卫生检验杂志，2014，24（11）：1596-1599，1603.

[10]孙克.BC-6800血细胞分析仪性能评价[J].国际检验医学杂志，2013，34（12）：1579-1581.

[11]刘红伟，林金端，钟国权，等.清远市区12396例体检职工红细胞参数水平研究[J].实验与检验医学，2015，33（6）：789-791.

[12]冯仁丰主编.临床检验质量管理技术基础[M].第2版.上海：上海科学技术文献出版社，2003：104-105.

[13]Verbrugge SE，Huisman A.Verification and standardization of blood cell counters for routine clinical laboratory tests[J].Clin Lab Med，2015，35(1)：183-196.

[14]CLSI EP15-A2：User Verification of Performance for Precision and Trueness；Approved Guideline-Second Edition[S].2005.

[15]王薇，王治国，李少男.临床实验室对厂家声明的精密度和正确度的性能验证要求[J].检验医学，2010，25（12）：1001-1005.

R446.11+1

A

1674-1129(2017)04-0504-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.04.016

2016-12-27；

2017-06-01)