硫乙醇酸盐流体培养基的选择

夏洁敏+朱澄

摘 要 为选择适合的硫乙醇酸盐流体培养基，延长培养基的有效期，通过初筛（性价比、溶解性和澄清度）和培养基适应性的持续稳定性考察，筛选出符合要求的培养基品牌。

关键词 硫乙醇酸盐流体培养基 有效期 筛选

中图分类号：R927.1 文献标识码：B 文章编号：1006-1533（2017）15-0088-03

Screening of the fluid thioglycollate medium

XIA Jiemin*， ZHU Cheng

（Shanghai Haohai Biological Technology Co.， Ltd.， Shanghai 201613， China）

ABSTRACT To select a suitable fluid thioglycollate medium with a longer period of validity. A medium brand meeting our requirement was finally selected by comparing their price， solubility， clarity and stability.

KEY WORDS fluid thioglycollate medium； period of validity； screening

硫乙醇酸盐流体培养基可以在普通有氧环境下提供厌氧条件，使需氧菌和厌氧菌都能够生长良好，并易于观察结果[1]，是《中国药典》（2015版）中指定用于无菌检查用的两种培养基之一[2]。

硫乙醇酸盐流体培养基的氧化层（粉红色）是由培养基中作为氧化还原的指示剂的刃天青引起的，在氧化时呈红色[3]。《中国药典》（2015版）中对其氧化层的要求，是为了确保培养基的厌氧层能够满足厌氧菌的生长条件需要。

我公司QC实验室原先使用的某品牌硫乙醇酸盐流体培养基由于存在使用时间上的局限（储存条件均为2～8 ℃），保存超过1周，其培养基氧化层高度即超过培养基深度的1/5，需要加热后使氧化层消失才能够符合要求；而保存超过1个月再用于无菌检查，培养后其氧化层即超过培养基深度的1/2，不能满足要求。基于以上两点限制，其有效期被局限在1个月内。

由于硫乙醇酸盐流体培养基的适用性检查涉及3种试验菌株[4]，为了在确保培养基质量的同时，减少培养基适用性检查的频次、减小资源负担，提出了延长培养基有效期的需求。本研究通过考察不同品牌脱水培养基在实用性方面的差异，筛选合适的品牌，将硫乙醇酸盐流体培养基制备后的有效期延长到3个月。

1 材料与方法

1.1 试剂与设备

硫乙醇酸盐流体培养基A、B、C、D分别购自上海博微生物科技有限公司、上海盛思生化科技有限公司、Oxoid公司和BD公司；HTY-602集菌仪（浙江泰林生物技术股份有限公司）；XG1.U脉动真空灭菌锅（山东新华医疗器械股份有限公司）；SHP-250生化培养箱（上海森信实验仪器有限公司）；BHC-1300I2A2生物安全柜（苏州市金净净化设备科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 不同品牌硫乙醇酸盐流体培养基的选择与获取

市售的成品培养基在容器内充氮，可以很好地解决培养基氧化层的问题。但是市售成品培养基的价格是脱水培养基的5～10倍，性价比不具备竞争力。因此确定本次研究考察对象为脱水培养基，由QC实验室自行配制分装灭菌。本研究硫乙醇酸盐流体培养基的分装规格以及保存条件为：用250 ml规格的盐水瓶分装220 ml硫乙醇酸盐流体培养基，压盖灭菌后冷却至室温，储存于2～8 ℃。以上这种储存条件是为了尽量通过密闭条件降低由于空气流通所带来的培养基中水分的流失，减少对培养基性状的影响[ 5]

1.2.2 不同品牌硫乙醇酸盐流体培养基的初筛

1）考察脱水培养基的溶解性 不同品牌的脱水培养基配制过程中其溶解度存在差异。QC实验室单次配制培养基的数量为200瓶，体积较大，故应尽量选择不需要加热或加热时间短就能溶解的脱水培养基，以减少培养基配制过程中的加热工序，提高工作效率。

2）考察脱水培养基灭菌后的澄清度 不同品牌的脱水培养基灭菌后的澄清度存在差异。澄清度较好的培养基有利于在进行无菌检查试验的逐日观察中尽早发现微生物的生长情况。

1.2.3 培养基品牌的确定

对按照统一分装规格和保藏条件保存的各品牌培养基进行每周观察一次其氧化层高度占培养基的比例（药典要求不超过1/5），确认不同时间段培养基氧化层的情况，以便确定下一步进行培养基适用性检查的培养基品牌。

1.2.4 培养基制备后有效期的确认

依据标准的硫乙醇酸盐流体培养基制备分装灭菌程序，用同一套灭菌设备连续进行3次灭菌程序的验证（装载方式、温度分布均一性等）。培养基适用性的稳定性试验按文獻方法操作[6]，培养基分装钠钙输液瓶后加卤化丁基胶塞压盖密封、灭菌，避光储存于2～8 ℃。

2 结果

2.1 培养基初筛

脱水培养基溶解性和灭菌后的澄清度结果见表1。

通过各品牌脱水培养基性状比较可以看出，品牌C和D的脱水培养基溶解性和澄清度较好。

2.2 氧化层考察

氧化层考察结果见图1和图2。

每月进行一次无菌试验，观察14 d培养后氧化层高度占培养基的比例（药典要求不超过1/2）（图2）。

2.3 培养基适用性考察

1）储存时间考察 各品牌培养基储存时间见表2。

比较以上四个品牌培养基的价格（折算成相同规格），A∶B∶C∶D=2∶2∶3∶4.5。

综合考虑以上情况，初步确定选择品牌C的脱水培养基作为今后的QC实验室用硫乙醇酸盐流体培养基，并进行下一步的培养基适应性检查的持续稳定性考察，以确定配制后的培养基有效期能否达到3个月的目标。

2）稳定性考察 以Oxoid培养基进行的持续稳定性考察结果见表3。

结果表明，在2～8 ℃避光保存4个月后，无菌试验均符合药典无菌检查用培养基的各项要求。综合考虑，确定培养基配制灭菌后的有效期为3个月。

3 讨论

通过对硫乙醇酸盐流体培养基的研究考察，选择到一个能将有效期从1个月延长到3个月且符合法规要求的培养基，成功降低了硫乙醇酸盐流体培养基的适用性检查频次，提高了培养基管理的工作效率，减少了用于培养基适用性检查的资源消耗，降低了培养基适用性检查过程对环境的污染。同时提高了培养基配制工作的简便性和实验结果观察的便捷程度。

在文献中提到[4]，可以通过比较不同厂商培养基在相同条件下促菌生长试验的速度来进行筛选，但从实验数据看，不同厂商培养基可以观察到阳性现象的时间差距仅为4 h，差别不大（分别为16 h和20 h），而培养基适用性试验的要求是在3 d内观察到阳性现象。因此，简单地通过比较不同厂商培养基在相同条件下促菌生长试验的速度来对培养基进行考察是有局限性的，引入统计分析对培养基促微生物生长能力进行对比研究、并综合考虑多方面因素对培养基进行考察和筛选，获得的结果对实践更具有指导意义[7]。

各个实验室都有各自特色的培养基储存方式和储存条件[5-6]，如用硅胶塞及牛皮纸捆绑包裹瓶口，在2～8℃避光储藏；旋紧密封旋盖，在2～25 ℃储存。不同存储方式和储存条件对培养基的有效期的影响不同[8-10]。我公司QC实验室采用钠钙输液瓶加卤化丁基胶塞压盖密封，在2～8 ℃避光储藏的方式，将硫乙醇酸盐流体培养基的有效期延长到了3个月。从培养基持续稳定性考察的結果来看，如果有必要，还可以在4个月的期限内满足培养基适用性检查的要求。但是培养基有效期的确定还应当与实验室的培养基消耗量、储存空间相匹配，并不是越长越好。

同时，实验室的培养基管理并不能将某一品种的培养基孤立起来看待，而是应当将实验室使用的各个种类培养基当做一个整体，进行综合考虑。以上这种培养基的选择方法还可以应用到微生物实验室其他常用培养基上（如TSB、TSA、R2A等），并且进一步加深考察的内容，从多方面综合考虑实验室培养基的选择（如统一培养基的灭菌温度、提高培养基配制效率、减少培养基适用性检查频次等），减少由于培养基灭菌温度不一致造成差错的风险，进一步提高培养基管理的工作效率，减少资源消耗、降低对环境的污染。

参考文献

[1] 王似锦， 高春. 硫乙醇酸盐流体培养基成分、历史起源及应用研究进展[J]. 中国药业， 2014， 23（1）： 92-94.

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（2015年版）四部[M]. 北京： 中国医药科技出版社， 2015： 136.

[3] 吴九玲. 硫乙醇酸盐流体培养基的特点及问题分析[J]. 广东化工， 2009， 36（6）： 109， 259.

[4] 李天翥， 龚翠. 按照《中国药典》2015版对不同厂商检验用培养基筛选的考察与研究[J]. 系统医学， 2016， 1（9）： 131-137.

[5] 陈晓燕. 药品微生物限度检查用培养基储存期限的探讨[J]. 中国医药指南， 2014， 12（19）： 111-112.

[6] 刘茜， 姜俊慧， 张慧慧， 等. 药品检验用培养基配制及灭菌后贮存有效期的研究[J]. 药学研究， 2015， 34（2）： 80-83.

[7] 杨晓莉， 李辉， 杨静， 等. 中、美、英、欧药典无菌检查用培养基促微生物生长能力对比研究[J]. 西北药学杂志， 2013， 28（6）： 619-622.

[8] 李玉香. 浅谈微生物实验室培养基质量控制存在的问题及改进方法[J]. 中国科技博览， 2009（29）： 248.

[9] 姜海燕. 浅谈微生物检测中培养基的质量控制[J]. 中国现代药物应用， 2011， 5（1）： 247-248.

[10 王丽娟. 有关药品微生物限度检查用培养基储存时限问题的探讨[J]. 科技与企业， 2013（24）： 501.