滑石粉炒鱼鳔胶炮制工艺优选

李 楠，谭裕君，王念明，冯玲玲，杨 明

（1.成都中医药大学药学院，四川 成都 611137；2.江西中医药大学·现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004）

·实验研究·

滑石粉炒鱼鳔胶炮制工艺优选

李 楠1，谭裕君1，王念明1，冯玲玲1，杨 明2

（1.成都中医药大学药学院，四川 成都 611137；2.江西中医药大学·现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004）

目的优选最佳滑石粉炒鱼鳔胶炮制工艺，为滑石粉炮制药材的工艺筛选及质量评价提供研究思路及方法。方法选用 L9（34）正交表设计试验，以粉碎率、蛋白质含量为指标，以膨胀率、浸出物为参考指标，结合实际选择滑石粉炒制时间、滑石粉粒度、滑石粉炒制温度、滑石粉用量4个因素进行考察，筛选滑石粉炒鱼鳔胶炮制工艺。结果选择2倍于药物的200目滑石粉，190℃，翻炒3 min为滑石粉炒鱼鳔胶最佳工艺。验证试验表明，最佳工艺切实可行，结果稳定。结论采用客观、可靠的评价指标，对传统滑石粉炒鱼鳔胶“翻炒至鼓起、酥脆”的工艺进行了研究，为进一步制订滑石粉炒鱼鳔胶饮片的质量标准提供依据。

滑石粉炒；鱼鳔胶；炮制工艺；正交试验

鱼鳔胶为石首鱼科动物大黄鱼 Pseudosciaena Crocea（Ricb）、小黄鱼 P.polyactis Bleerer或鲟科动物中华鲟Acipenses sinensis Cray、鳇鱼 Huso dauricus Georgi等的干燥的鱼鳔，具有补肾益精、滋筋养脉、散瘀、止血、消肿的作用。鱼鳔胶历来多炮制入药，现代炮制对鱼鳔胶炒制品的要求统一描述为“翻炒至鼓起、酥脆”[1－2]，是鱼鳔胶滑石粉炒后最直观的经验鉴别方式。其中，“酥”意为物质的酥松程度，“脆”是物质易折、易碎的特性。因此，本研究中提出用炒制前后样品体积的变化率也就是膨胀率表示物质的酥松程度，粉碎过筛称定重量法表示物质脆性，以此对鱼鳔胶经滑石粉炒后的“酥”“脆”进行定量评价；另外，蛋白质含量测定采用2010年版《中国药典（二部）》附录ⅦM蛋白质含量测定方法中的考马斯亮蓝法（Bradford法）。以此考察鱼鳔胶炮制品的水分及蛋白质含量，对鱼鳔胶炮制品的质量进行定量评价[1－4]。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高速打粉机（浙江省永康市溪岸五金药具厂）；远红外可控调温电炉（成都市聚 电器厂)；UV－1700型紫外分光光度计（SHIMADZU CORPORATION）。

1.2 试药

淡水鱼鳔胶（四川科伦天然药业有限公司，批号为20130703），经成都中医药大学炮制教研室黄勤挽副教授鉴定合格；考马斯亮蓝G250（纯度＞90%），牛血清白蛋白（纯度＞98%，20130725），均购自生工生物工程有限公司。

2 方法与结果

2.1 炮制品评价指标测定

2.1.1 膨胀率[3－5]

用500 mL量筒测量炮制品和生品的体积，充分振摇使体积不再增加为止。膨胀率（%）＝烫后体积（mL）／生品体积（mL）×100。

2.1.2 粉碎率

取炮制品各15 g，置粉碎机中粉碎2 min，过60目筛，均筛1.5 min，取可通过60目筛粉末。按公式计算，粉碎率(%)＝m1／m2×100。其中，m1为过60目筛粉末质量（g），m2为炮制品总质量（g）。

2.2 蛋白质含量测定[6]

2.2.1 溶液配制

标准牛血清白蛋白：取牛血清白蛋白对照品9.25mg，加水溶解制成每1 mL中含92.5 μg的溶液。

考马斯亮蓝溶液：称取考马斯亮蓝G250 1.008 g，加入95%乙醇50 mL超声（功率500 W，10 min）溶解，再加磷酸100 mL，加水定容至1 000 mL，混匀，抽滤，取续滤液保存在棕色瓶中，即得，冷藏备用。贮存中如有沉淀产生，使用前需再滤过。

供试品溶液：精密吸取配置的考马斯亮蓝溶液1.5mL，置25mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 测定方法

精密吸取供试品溶液1 mL，置具塞试管中，加入考马斯亮蓝溶液5.0 mL，立即混匀，照紫外－可见分光光度法，于400～800 nm波长范围进行全波长扫描，生鱼鳔胶与鱼鳔炮制品最大吸收波长均为592 nm。于595 nm波长处测定供试品溶液吸光度，并以考马斯亮蓝溶液校零。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察：精密量取对照品溶液 0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL，分别置具塞试管中，各加水至1 mL，分别加入酸性染色液考马斯亮蓝溶液5.0 mL，混匀，照紫外－可见分光光度法，于595 nm波长处测定吸光度，同时以0号管作为空白。以对照品溶液质量浓度（C）对吸光度（A）计算，得线性回归方程 A＝0.006 0 C＋0.114 6，r＝0.999 2（n＝6），线性范围是18.5～92.5 μg／mL。

精密度试验：取标准牛血清白蛋白溶液（质量浓度为 55.5 μg／mL）依法操作，连续测定 5次。结果的RSD为0.183%（n＝5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液依法操作，经显色后室温放置5，10，15，20，30 min，分别测定吸光度。结果的 RSD为0.726%（n＝5），表明供试品溶液在显色后30 min内，于595 nm波长处吸收值基本稳定。

重复性试验：取同一批（批号为20130703）炮制品提取液，依法制备5份供试品溶液，依法测定。结果蛋白质平均含量为0.740 4 g／L，RSD为0.505%（n＝5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：精密移取已知蛋白质含量（质量浓度为0.740 4 g／L）的供试品溶液6份，每份0.5 mL，分别置10 mL容量瓶中，精密加入牛血清白蛋白标准品溶液（质量浓度为 92.5 μg／mL）4 mL，再补充蒸馏水至刻度，摇匀，稀释10倍作为供试品溶液，按供试品溶液测定法进行测定。结果平均加样回收率为101.08%，RSD为1.899%（n＝6）。

2.3 炮制工艺研究[7－9]

2.3.1 因素水平设计

针对“滑石粉，中火，至发泡、鼓起，微黄白”，采用L9（34）正交表设计试验，以粉碎率、蛋白质含量为指标，以膨胀率、浸出物质量为参考指标。另外，在滑石粉炒制药材的过程中，滑石粉粒径过小会造成其吸附于药材表面，而粒径过大则药材受热不均匀；滑石粉用量越大，药材受热越均匀，但用量过高则造成生产成本的提高；炮制时间及温度关乎药材内有效成分的保存及药材质量（是否出现生片或夹生片等）。因此，选择滑石粉炒制时间（因素A）、滑石粉粒径（因素B）、滑石粉炒制温度（因素C）、滑石粉与鱼鳔用量比（因素D）4个因素进行工艺考察。结果见表1。

表1 L9（34）试验因素水平表

2.3.2 试验结果

膨胀率与浸出物质量测定结果见表2。

表2 膨胀率与浸出物质量测定结果（%）

2.3.3 条件优选

对表2数据分析可知，不同炮制工艺所得炮制品的膨胀率与浸出物无差异。对蛋白含量与粉碎率进行分析，结果见表3。方差分析结果见表4。可知，A，B，D 3个因素对粉碎率具有极显著性差异，根据直观分析结果选择 A2B1C2D3，即滑石粉炮制时间为180 s、滑石粉粒度选择200目、温度为190℃、滑石粉与鱼鳔用量比例为2∶1时鱼鳔胶粉碎率较大。A，C，D 3个因素对蛋白含量具有极显著性差异，影响蛋白质含量的因素中，C因素与D因素为主要影响因素（P＜0.05），A因素为次要因素（P＞0.05），直观分析结果得出最佳炮制工艺为 C2D3。选择炮制温度为190℃、滑石粉与鱼鳔用量比例为2∶1时，鱼鳔鼓起完全，无夹生片生成，药物有效成分煎出较完全。预测最佳炮制工艺为A2B1C2D3，即选择2倍于药物的200目滑石粉于190℃条件下，炒制3 min为宜。

表3 L9（34）正交设计试验方案及结果

表4 方差分析结果

2.3.4 验证试验

以最佳炮制工艺制备3批样品，验证试验评价工艺的可靠性。结果见表5。可见，该工艺稳定，合理可行。

表5 验证试验结果（%）

3 讨论

3.1 正交试验结果分析

在滑石粉炒鱼鳔胶的过程中，滑石粉粒径过小（大于200目），其对鱼鳔胶的吸附性变强，且在锅中加热至灵活状态时滑石粉出现聚集抱团现象，使鱼鳔胶受热不均匀形成夹生片，且酥脆性变差；另外，滑石粉用量对炮制品的粉碎率与蛋白质含量有显著性影响，滑石粉用量大（滑石粉与鱼鳔用量比≥1∶2），鱼鳔胶鼓起越充分，粉碎率越高，其中蛋白质得以保存，但用量过高则造成生产成本的提高；炮制时间及温度对粉碎率有显著性影响，温度过低（＜190℃）或炮制时间过短（＜180 s），鱼鳔胶同样有夹生片，温度过高或炮制时间过长，炮制品出现焦品，蛋白质成分受到破坏。故最终选择2倍于鱼鳔胶的200目滑石粉，190℃，翻炒3 min，作为滑石粉炒鱼鳔胶的炮制工艺。

3.2 鱼鳔胶的炮制方法[1－2，10]

历代对鱼鳔胶的炮制方法有炒制、制炭、炮、焙等，明清时出现了蛤粉炒、麸炒、牡蛎粉炒等方法，现行主要为滑石粉炒。现代学界普遍认为，滑石粉炒鱼鳔胶[1－2]，滑石粉充当中间传热体，其流动性强、粉末细腻，适宜于炮制韧性较强的动物药材。另外，滑石粉作为固体辅料，难以渗入到药材内部，因此对鱼鳔胶本身的功效影响不大，滑石粉炒鱼鳔胶的主要作用，体现在鱼鳔胶经滑石粉炒后更有利于炮制制剂。另外，临床认为可采用蒲黄炒鱼鳔胶的炮制方法[10]，以扩大鱼鳔胶的临床适用范围。

3.3 滑石粉炒鱼鳔胶指标的选择[1－2，3，5，8－9，11]

鱼鳔胶历来多炮制入药，现代滑石粉炒鱼鳔胶的炮制工艺的要求统一描述为“翻炒至鼓起、酥脆”。其中，酥脆中的“酥”意为物质的酥松程度，脆是物质易折易碎的一种性质，酥脆、松脆表示物质既酥脆又易折易碎的性质。查阅文献 [3－5]，采用炒制前后样品体积的变化率也就是膨胀率表示物质的酥松程度，粉碎过筛称定质量法表示物质脆性；另外，考察鱼鳔胶炮制品的水分及蛋白质含量，对鱼鳔胶炮制品的质量进行定量评价，以上使鱼鳔胶炮制品的质量评价更加客观、可靠。本研究为进一步制订滑石粉炒鱼鳔胶饮片的质量标准提供了参考。

3.4 滑石粉辅料标准的建立[12－15]

为了实现中药饮片炮制规范化，首先需从炮制辅料的规范化入手，中药炮制辅料的物理或化学性质，可能直接或间接影响炮制品或炮制工艺，对炮制辅料物理性质的控制是很重要的。粒径小的滑石粉细腻，与粒径大的滑石粉比较传热慢，容易吸附在炮制品表面，造成炮制品受热不均匀。滑石粉作为一种非常重要的中药炮制辅料，迄今尚无统一的质量标准，其质量好坏将直接影响中药炮制品的质量与品质。滑石粉的表面性质是滑石粉实际应用的重要参数，是衡量滑石粉应用效果的最重要指标。其表面性质如滑石粉的化学稳定性、润滑性、吸附性、传热性以及其他的表面行为，均与滑石粉粒径大小有关。滑石粉粒径不同导致其表面性质不同，作为辅料应用的滑石粉，粒度是其重要的质量标准。2010年版《中国药典》并未对其细度进行相关规定，建议应对滑石粉细度与对炮制品品质间的相关性进行研究与规范。建立炮制辅料的标准，应围绕炮制辅料对药物的影响进行。辅料用量的多少也是影响中药炮制质量的重要因素，针对不同种类药材、不同炮制目的，加入的炮制辅料用量也不同。本研究中选择了代表性的动物药鱼鳔胶，重点考察了滑石粉的粒径及用量对炮制品品质的影响，可为中药炮制辅料滑石粉质量标准的建立提供依据。

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Optimization of Processing Technology of Stir－Frying Swim Bladders with Talcum Powder

Li Nan1,Tan Yujun1,Wang Nianming1,Feng Lingling1,Yang Ming2
(1.School of Pharmacy,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu,Sichuan,China 611137; 2.Key Laboratory of Modern Preparation of TCM of Ministry of Education,Jiangxi University of TCM,Nanchang,Jiangxi,China 330004)

Objective To optimize the best processing paramerter for stir－frying Swim Bladders with talcum powder,and provide the study ideas and methods for the processing and quality evaluation.M ethods L9(34)orthogonal test was carried out by multi－index comprehensive analysis in the study,the crushing rate and protein content were taken as indexes,the expansion rate and extract were taken as reference indexes,according to the actual conditions,4 factors(stir－frying time,particle size,temperature and the dosage of talcum powder)were investigated,in order to optimize the processing paramerter for stir－frying Swim Bladders with talcum powder.Results The best technological paramerteres proportion of talcum powder(200 mesh)to Swim Bladders was 2∶1,the temperature was 190℃,and stir－frying time was 3 min.The verification test indicated that the technology was feasible and result was stable.Conclusion The objective and reliable index is used to evaluate the traditional processing of stir－frying Swim Bladders until swell and crisp with talcum powder,it can provide the reference for formulating the new quality standard of processed Swim Bladders.

stir－frying with talcum powder;Swim Bladders;prepared technology;orthogonal test

TQ460.6

A

1006－4931(2017)13－0005－04

2017－04－10)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.13.002

国家中医药管理局科技项目[20100711－09]。

李楠，博士研究生，副教授，研究方向为炮制制剂，（电子信箱）55743198＠qq.com。

杨明，博士研究生，教授，研究方向为炮制制剂，（电话）0791－7119118（电子信箱）yangming16＠126.com。