临床分离鲍曼不动杆菌对消毒剂抗药性的研究

梁玉金?张莉

[摘要] 目的 研究临床分离的鲍曼不动杆菌对常用临床消毒剂抗药性研究。 方法 收集自本院2014年1月～2015年12月临床患者分离获得的病原菌株鲍曼不动杆菌菌株60株。根据本医院抗菌药谱：氨曲南、妥布霉素、复方新诺明、氨苄西林-舒巴坦、亚胺培南、左旋氧氟沙星、头孢他定、头孢吡肟、庆大霉素、环丙沙星、呋喃妥因、哌拉西林-他巴唑坦等抗生素耐药敏感程度，分为三组分，鲍曼不动杆菌敏感株、多重耐药不含碳青霉烯类耐药、多重耐药含碳青霉烯类耐药。采用营养肉汤稀释法（试管法）分别测定含氯消毒片、复合碘皮肤消毒液、醋酸氯已定的最低抑菌浓度（MIC）值。 结果 含氯消毒片对鲍曼不动杆菌敏感株、多重耐药不含碳青霉烯类耐药和多重耐药含碳青霉烯类耐药的MIC值分别为（940±258）、（958±247）、（957±292）mg/L，MIC范围均为500～1500mg/L；复合碘皮肤消毒液为（45±23）、（54±30）、（49±30）mg/L，MIC范围均为34～63mg/L；醋酸氯已定為（26±20）、（23±10）、（29±35）mg/L，MIC范围敏感株和多重耐药不含碳青霉烯类耐药均为8～63mg/L，多重耐药含碳青霉烯类耐药为8～125mg/L。结论 本院分离的鲍曼不动杆菌在抗菌药物敏感程度不同情况下，对常用的三种消毒剂抗药性不存在差异。但是，含氯消毒片对分离的鲍曼不动杆菌实际使用浓度和推荐使用浓度存在较大差异。

[关键词] 鲍曼不动杆菌；消毒剂；含氯消毒片；复合碘皮肤消毒液；醋酸氯已定；抗药性

[中图分类号] R378 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）10-232-04

Study on drug resistance of clinical isolates of acinetobacter baumannii to Bauman

LIANG Yujin ZHANG Li

Clinical Laboratory， Shunde District Hospital of traditional Chinese Medicine， Guangdong， Foshan 528300， China

[Abstract] Objective To study the drug resistance of clinical isolates of Acinetobacter baumannii to Bauman. Methods Clinical isolates of 60 strains of Acinetobacter strains isolated from Bauman in our hospital from January 2014 to December 2015 were selected. According to the antimicrobial spectrum sensitivity to antibiotic resistance， such as aztreonam， tobramycin， compound sulfamethoxazole， ampicillin sulbactam， imipenem， levofloxacin， ceftazidime， cefepime， gentamicin， ciprofloxacin， piperacillin， piperacillin and methimazole， they were divided into three groups. Bauman sensitive Acinetobacter baumannii， multi drug resistant carbapenem resistant， multi drug resistant carbapenem resistant. The minimum inhibitory concentration （MIC） values were determined by nutrient broth dilution method （tube method）. Results The MIC values of the resistance to antibiotics and the multi drug resistance of carbapenem resistant Acinetobacter baumannii were （940±258）， （958±247）， （957±292）mg/L， and MIC range was 500 - 1500mg/L. Compound iodine skin disinfectant solution was （45±23）， （54±30）， （mg/L±30） mg/L， MIC range was 34-63 mg/L. Chlorhexidine acetate has been determined to be （26±20）， （23±10）， （29±35）， MIC range sensitive strains and multi drug resistant carbapenem resistance were 8 - 63 mg/L， and Multi drug resistant carbapenem resistance was 8 - 125 mg/L. Conclusion There are no differences in the resistance of the three commonly used disinfectants to Bauman in our hospital. However， there is a great difference between the actual concentration and the recommended concentration of the isolated Acinetobacter baumannii by using the chlorine disinfection tablet in the separation of Bauman.

[Key words] Acinetobacter Bauman； Disinfectant； Chlorine disinfection tablet； Compound iodine skin disinfectant； Chlorhexidine acetate； Drug resistance

鲍曼不动杆菌普遍存在自然界中，由于该菌具有极强的环境适应能力和获得外源耐药基因的能力，因而在医院内极易造成播散流行。近年来，随

着抗菌药物的广泛使用，鲍曼不动杆菌多重耐药现象日益严重，已成为医院感染的重要病原菌之一[1-3]。该菌不仅其对抗菌药物耐药性逐年增强，而且其携带耐消毒剂已有相关报道。本研究旨在通过临床分离的鲍曼不动杆菌根据本医院抗菌药谱：氨曲南、妥布霉素、复方新诺明、氨苄西林-舒巴坦、亚胺培南、左旋氧氟沙星、头孢他定、头孢吡肟、庆大霉素、环丙沙星、呋喃妥因、哌拉西林-他巴唑坦等抗生素耐药性，分为三组分，鲍曼不动杆菌敏感株、多重耐药不含碳青霉烯类耐药、多重耐药含碳青霉烯类耐药。采用营养肉汤稀释法[5-7]。分别测定含氯消毒片、复合碘皮肤消毒液、醋酸氯已定消毒剂抗药性，了解该细菌在抗菌药物敏感程度不同情况下，是否对消毒剂抗药性存在差异。现将研究报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

菌株选取拟选取本实验室自2014年1月～2015年12月从感染病例送检的标本中，分离获得的病原菌：鲍曼不动杆菌菌株。药敏试验结果参照美国临床实验室标准化委员（NCCLS）2013年规定的临界值判定耐药（R）、中介（I）和敏感（S）。对病原菌分为敏感菌株：大鲍曼不动杆菌；耐药菌株：鲍曼不动杆菌（多重耐药不含碳青霉烯类耐药）、鲍曼不动杆菌（含碳青霉烯类耐药）[8]。

1.2 试剂

消毒剂含氯消毒片（商品名：海格速利），规格：500mg/L，批号14054082，深圳市安多福消毒高科技股份有限公司生产。复合碘皮肤消毒液（商品名：点而康），规格：2170mg/L，批号20130917，上海利康消毒高科技有限公司生产。醋酸氯已定，规格：500mg/L，批号140620、141128，本院制剂中心生产。

1.3 方法

1.3.1 菌株鉴定根据全国临床检验操作规程（第3版）。中华人民共和国卫生部医政司出版，对送检标本进行细菌分离、培养和鉴定。药敏试验结果参照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）2013年规定的临界值判定耐药（R）、中介（I）和敏感（S）执行。标准菌株：大肠埃希菌（ATCC25922）、大肠埃希菌（ATCC35218）、铜绿假单胞菌（ATCC27853），由广东省临床检验中心提供。

1.3.2 菌株对消毒剂抗药性MIC测定 （1）预处理：①复合碘皮肤消毒液、醋酸氯已定原液即为临床推荐使用浓度，用等体积蒸馏水稀释成原液浓度的1/2，1/4，1/8，1/16，1/32，1/64浓度梯度。每片含氯消毒片，溶解在蒸馏水1000mL（浓度500mg/L）。②菌液制备将各菌株接种营养肉汤培养，36℃培养18h[9]。再接种普通琼脂平板36℃培养24h，从平板挑选单个菌落，接种普通琼脂斜面，36℃培养24h。将斜面上的菌苔用PBC洗下，稀释成105～108cfu/mL的菌悬液（相当于0.5麦氏单位）。（2）营养肉汤稀释法（试管法）：取各浓度梯度消毒剂供试液2.5mL，加至含已灭菌的双倍浓度营养肉汤试管中，混匀。取含菌量为105～108cfu/mL菌悬液0.1mL，接种于上述试管中，作为试验组样本；同法，接种于不含消毒剂的营养肉汤的试管中，作为阳性对照；取2支含营养肉汤的试管，不加消毒剂和菌液，作为阴性对照。所有菌液于15min内接种完毕，试管放置于37℃培养箱中，培养48h，观察结果。（3）评判标准阳性对照管有细菌生长（混浊），阴性对照管无菌生长（透明），试验组以在试管内完全抑制细菌生长的最高稀释度所对应的消毒剂浓度，为该样品对受试菌的MIC值（mg/L） [10]。

1.4 统计学处理

采用统计学软件SPSS19.0建立数据库，计量资料以（）的形式表示，进行数据处理，分析处理以抗菌药物敏感程度不同分为三组的鲍曼不动杆菌对三种消毒剂的MIC值，通过t检验比较分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三种消毒剂对60株临床分离的鲍曼不动杆菌的MIC值（试管法）情况

最低抑菌浓度（MIC）值三种消毒剂中含氯消毒片对鲍曼不动杆菌敏感株、多重耐药不含碳青霉烯类耐药和多重耐药含碳青霉烯类耐药的MIC值（940±258）、（958±247）、（957±292）mg/L分别均高于复合碘皮肤消毒液为（45±23）、（54±30）、（49±30）mg/L，F=17.323、18.534、15.646，醋酸氯已定為（26±20）、（23±10）、（29±35）mg/L，F=17.187、18.521、15.646，P<0.05，差异均有统计学意义。复合碘皮肤消毒液和醋酸氯已定对鲍曼不动杆菌敏感株、多重耐药不含碳青霉烯类耐药和多重耐药含碳青霉烯类耐药的MIC值无明显差异，P>0.05。见表1。

2.2 三种消毒剂对60株临床分离的鲍曼不动杆菌的MIC值（试管法）情况

最低抑菌浓度（MIC）值浓度分布三种消毒剂中含氯消毒片对鲍曼不动杆菌敏感株、多重耐药不含碳青霉烯类耐药和多重耐药含碳青霉烯类耐药的MIC值范围均为500～1500mg/L；复合碘皮肤消毒液MIC值范围均为34～63mg/L；醋酸氯已定MIC值范围敏感株和多重耐药不含碳青霉烯类耐药均为8～63mg/L，多重耐药含碳青霉烯类耐药为

8～125mg/L，本院分离的鲍曼不动杆菌在抗菌药物敏感程度不同情况下，对常用的三种消毒剂抗药性基本差异无统计学意义（χ2=2.183、1.648、1.785，P>0.05）。见表2。

3 讨论

细菌的耐药问题己不再局限于抗生素耐药，消毒剂耐药性已普遍存在，给临床细菌病的防治带来了新的困难，值得我们重视。消毒剂对不同微生物的作用机制存在差异性，因此，对消毒剂作用机制的研究已迫在眉睫。消毒剂的耐药机制与抗菌药物有相似之处，很容易导致交叉耐药性[11-12]。由于细菌是容易变异，且容易受外界环境尤其是抗菌药物因素影响的特殊生物，加之每个地区每个国家所使用的抗菌药物不同，抗菌药物的使用原则也不同，造就了在不同国家、不同地区、甚至不同医院和不同病区间对同类微生物的耐药率也存在较大差异。如果这种“抗生素-消毒剂耐药”菌株没有被重视并及时杀灭，成为医院感染的流行菌株，就会加大感染控制的难度，造成社会、经济的损失[13]。

本研究通过收集自本院2014年1月～2015年12月临床患者分离获得的病原菌株鲍曼不动杆菌菌株60株。根据本医院抗菌药谱：氨曲南、妥布霉素、复方新诺明、氨苄西林-舒巴坦、亚胺培南、左旋氧氟沙星、头孢他定、头孢吡肟、庆大霉素、环丙沙星、呋喃妥因、哌拉西林-他巴唑坦等抗生素耐药敏感程度，分为三组分，鲍曼不动杆菌敏感株、多重耐药不含碳青霉烯类耐药、多重耐药含碳青霉烯类耐药。采用营养肉汤稀释法（试管法）分别测定含氯消毒片、复合碘皮肤消毒液、醋酸氯已定的最低抑菌浓度（MIC）值。结果表明，最低抑菌浓度（MIC）值三种消毒剂中含氯消毒片对鲍曼不动杆菌敏感株、多重耐药不含碳青霉烯类耐药和多重耐药含碳青霉烯类耐药的MIC值分别均高于复合碘皮肤消毒液、醋酸氯已定，提示，通过临床分离的鲍曼不动杆菌对本院常用的3种消毒剂抗药性研究，细菌没有随抗菌药物敏感度不同情况下，对消毒剂抗药性存在差异，复合碘皮肤消毒液、醋酸氯已定消毒灭菌的效果优于含氯消毒片，复合碘皮肤消毒液中的碘与表面活性剂聚维酮相结合而成的松散络合物，从而发挥灭菌的效果。吸附在细菌胞浆膜的渗透屏障，使细胞内容物漏出，低浓度抑制细菌，高浓度杀灭细菌。醋酸氯已定可以吸附在细菌胞浆膜的渗透屏障，使细菌细胞内容物形成渗出，低浓度抑制细菌，高浓度杀灭细菌。本实验还发现，本院分离的鲍曼不动杆菌对消毒剂推荐使用浓度和实际浓度存在较大差异。如含氯消毒片对鲍曼不动杆菌的实际浓度MIC值均大于推荐浓度。已有研究报道[14]。建议临床能有效地选择、调整消毒剂浓度及类别，加强监测，有利于控制抗消毒剂菌株的出现，可能会导致医院消毒不彻底，引起医院感染的发生和传播[15]。本研究条件局限等因素，未能开展细菌对消毒剂的耐药基因检测，今后希望在这方面进行研究，为本院建立更完善的耐药性规范管理，为有效减少消毒剂的滥用、用量不足或处理方法不当等问题提供参考依据。

综上所述，复合碘皮肤消毒液、醋酸氯已定消毒剂抗菌消毒效果更加理想，值得临床推广应用。

[参考文献]

[1] 姜如金，朱健铭，吴康乐.含氯消毒剂对多重耐药鲍曼不动杆菌杀灭效果的研究[J].中华临床感染病杂志，2012，5（1）：5-8.

[2] 王震宇.细菌对消毒剂抗药性研究进展[J].中国消毒学杂志，2007，24（2）：169-173.

[3] 陆亚华，黄支密.糜祖煌.部分医院MRSA菌耐消毒剂qacA、qacA/B基因检测[J].中华微生物学和免疫学杂志，2005，25（10）：854.

[4] 刘红丹，徐文思，张慧宇，等. 消化科住院患者医院感染鲍曼不动杆菌外排泵系统机制研究及耐消毒劑基因检测分析[J].中国病原生物学杂志，2016，11（10）：943-946.

[5] 黄瑞玉，穆小萍，张德纯.广东地区新生儿败血症血培养结果分析[J].中国热带医学，2010，10（2）：194-197.

[6] 马明，林莉莉，诸绪娴，等.两种常见病原菌对多种消毒剂的抗药性[J].中国临床药理学杂志，2013，29（1）：22-24.

[7] 王政，刘丁，黄冬梅，等.鲍曼不动杆菌临床分离株生物被膜形成能力与耐药性的研究[J].中国病原生物学杂志，2010（6）：405-407

[8] 王敏，王妹妹，姚迪，等.鲍曼不动杆菌临床分离株表型、基因型和耐药基因的对比研究[J].中华微生物学和免疫学杂志，2010，30（9）：821-828.

[9] 袁星，沈继录，徐元宏.120株临床分离鲍曼不动杆菌感染的分布和耐药性分析[J].现代预防医学，2011，38（10）：1901-1903.

[10] 董方，徐樨巍，宋文琪，等.儿科临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌耐药性和产OXA酶的研究[J].中国感染与化疗杂志，2011，11（6）：463-466.

[11] 李朝惠，伍素华，孙凤军，等.临床分离鲍曼不动杆菌产β-内酰胺酶的研究[J].中国药房，2006，17（7）：492-495.

[12] 袁星，沈继录，徐元宏，等.鲍曼不动杆菌临床分离株对喹诺酮类耐药表型和质粒耐药基因研究[J].临床检验 杂志，2011，29（3）：228-230.

[13] 黄卫春，项盈，傅启华.2007～2009年临床分离鲍曼不动杆菌的分布及耐药性监测[J].现代检验医学杂志，2011，26（1）：156-158.

[14] 孙学雄，李光照.鲍曼不动杆菌的临床分离及其耐药性分析[J].中国医药，2010，05（11）：1071-1072.

[15] 马冬梅，齐宏伟.2010～2012年临床分离鲍曼不动杆菌的耐药监测[J].检验医学与临床，2013（20）：2715-2716.

（收稿日期：2017-03-31）