胶体金免疫层析法在ELISA检出HBsAg阳性标本复检中的应用研究

李景兰

(商丘市中心医院 输血科 河南 商丘 476000)

胶体金免疫层析法在ELISA检出HBsAg阳性标本复检中的应用研究

李景兰

(商丘市中心医院 输血科 河南 商丘 476000)

目的 探讨胶体金免疫层析法(CICA)在酶联免疫吸附试验(ELISA)检出乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性标本复检中的应用效果。方法 所有HBsAg阳标本均取自2015年3月至2016年3月商丘市中心医院输血科，根据初检A值/cutoff值分为5组，另外选择同期检测结果为阴性的标本作为F组。每组标本均进行CICA、ELISA及GLIA法复检，将GLIA法检测结果作为金标准，统计GICA与ELISA复检的假阳性率与假阴性率。结果 A组复检时ELISA法检出假阳性率为21.43%、假阴性率为6.25%，GICA法检出假阳性率为0、假阴性率为95.75%。两种方法复检A组标本的假阴性率与假阳性率相比，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 随着标本A值/cutoff值的升高，GICA法复检HBsAg的漏诊率也会随之降低，但当A值/cutoff值<10时，为确保准确性，可进行两种方法联合复检。

胶体金免疫层析法；酶联免疫吸附试验；乙型肝炎表面抗原；复检

我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的多发地区，约有10%为乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带者，已成为我国严重的公共卫生问题之一[1]。HBsAg是HBV感染诊断的重要标志物，为减少HBV的感染率，实验室已广泛开展HBsAg的检测。目前临床检测HBsAg常用的方法为ELISA，灵敏性、特异性较高，价格低廉，适用于各基层医院。随着其大规范的推广应用发现，该方法在进行操作时易受多方面因素影响，会存在一定的漏诊及误诊，且操作繁琐、花费时间长，因此临床仍需对HBsAg阳性标本进行复查，以确保检测的可靠性[2]。鉴于此，本研究进一步探讨胶体金免疫层析法在ELISA检出HBsAg阳性标本复检中的应用效果。

1 资料与方法

1.1 标本来源及分组 所有HBsAg阳性标本均取自2015年3月至2016年3月商丘市中心医院输血科，标本与零下20 ℃保存，未出现脂血、溶血、黄疸等现象。所有标本均按初检A值/cutoff值分组[3]：1≤A值/cutoff值<5(A组)；5≤A值/cutoff值<10(B组)；10≤A值/cutoff值<15(C组)；15≤A值/cutoff值<20(D组)；A值/cutoff值≥20(E组)；另外选择同期检测结果为阴性的标本作为F组。每组随机抽取30个标本用于实验。

1.2 方法 仪器。FANE全自动酶免分析系统及AT plus均由瑞士 HAMILTON公司生产，另外选择美国强生公司生产的VITROS 3600全自动免疫分析仪与美国BIO-RAD公司生产的IMark 酶标仪。试剂。CICA、ELISA试剂盒均由英科新创科技有限公司提供；其余所需试剂为配套试剂，所有试剂均经批检合格，在有效期内使用，所有操作需严格按照产品说明进行。操作方法：①CICA法复检。根据操作说明，将胶体金试纸条加样区浸入血清30 s，反应10 min后记录结果。阳性判断标准：需同时出现检测线与质控线；阴性判断标准：出现控制线；若两种线均未出现即为无效需重新检测。②ELISA、化学发光免疫分析法(GLIA)复检：使用ELISA法进行初检、复检两次检测，再采用GLIA法进行复检，并将GICA法检测结果作为金标准，按照产品说明书进行检测，两种方法检测均用质控血清做质控。

1.3 评价指标 将GLIA法检测结果作为金标准，统计GICA与ELISA漏检率与误诊率。假阴性率(%)=(假阴性人数/金标准阳性人数)×100%；假阳性率(%)=(假阳性人数/金标准阴性人数)×100%。

2 结果

2.1 3种复检方法结果 A组GLIA法检出16份(53.33%)阳性标本，ELISA法检出15份(50.00%)阳性标本，漏诊1份，GICA法仅检出ELISA法漏诊的1份阳性标本，阳性率为3.33%；B组GLIA法与ELISA法检出的阳性标本数量相同，均为93.33%，而GICA法检出22份(73.33%)阳性标本，漏检8份。另外3组3种检查方法所检出的结果一致，无一漏诊或误检。见表1。

表1 3种复检方法结果(n，%)

2.2 GICA与ELISA复检方法的检测结果 ELISA法复检A组标本时假阳性率为21.43%、假阴性率为6.25%，其余4组假阳性率、假阴性率均为0； GICA复检A组假阴性率为95.75%、B组为21.43%，其余3组均为0，另外A-E组假阳性率也均为0。两种方法复检A组标本的假阴性率与假阳性率相比，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 GICA与ELISA复检方法的检测结果对比(n，%)

注：复检A组标本时，与ELISA法比较，aP<0.05。

3 讨论

HBsAg是检测HBV的重要指标之一，对乙肝诊断及治疗均具有重要意义。实验室常采用ELISA法检测HBsAg感染情况，但该方法操作复杂、步骤较多，其检测结果易受多方面因素影响，如加样枪头污染、吸样时吸入红细胞、孵育时间长、试剂失效、反应孔冲洗不彻底等原因均会造成假阳性结果的发生[4]。本次研究所抽取的样本中经ELISA法初检为阳性，但经GLIA复检后发现14例误检，误检原因与上述一致，因此为提高检验结果的准确性，有必要对ELISA法检测后HBsAg阳性标本再次进行复查。

GLIA是一种高效的全自动化免疫分析技术，特异度、灵敏性均较高，能够准确地提供检测结果，但该方法成本较高，在基层医院广泛实行存在一定难度[5]。GICA是以胶体金作为指示标记，可与待测血清中的HBsAg形成双抗体夹心复合物沉淀在包被线上，会形成一条红色的沉淀线，具有操作简单易行、成本低、不需要特殊仪器等优势，检测快速，患者无需长时间等待，但不足的是敏感性较低[6]。本研究结果显示，GICA法用于A值/cutoff值>10的标本复检时，敏感性、准确性均较高，不会出现漏诊、误诊现象，也能够检测出ELISA法漏检的阳性标本；但对于A值/cutoff值<10的标本漏检率较高，此时应结合其他检测方法进行再次复检，以确保诊断的准确性。

综上所述，随着标本A值/cutoff值的升高，GICA法复检HBsAg的漏诊率也会随之降低，但当A值/cutoff值<10时，为确保准确性，可进行两种方法联合复检。

[1] 侯娟,陈伟金,黄宏黎.乙型肝炎表面抗原不同检测方法的优势比较分析[J].当代医学,2014,20(12):23-24.

[2] 贺新春,胡小宣,刘猛,等.原发性肝癌患者血清 HBV 标记物、HBV-DNA 与 AFP 的相关性研究[J].医学临床研究,2015,32(10): 2059-2060.

[3] 梁马可,李仁锋,夏晓博,等.CDC25C蛋白和CLDN6蛋白在肝细胞癌中的表达及临床意义[J].河南医学研究,2013,22(6):807-811.

[4] 白洁,李桂霞,罗传霞,等.3种方法检测乙型肝炎病毒血清标志物的结果分析[J].国际检验医学杂志,2016,37(5):666-668.

[5] 张晓飞.门诊及住院患者入院前血清感染性标志物检测结果分析[J].中国实用医刊,2013,40(17):74-75.

[6] 姜宏兵,蒋菲,董清清,等.胶体金免疫层析法急诊检测 HBsAg漏检风险评价[J].检验医学与临床,2016,13(13):1750-1751,1754.

R 446.6

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.13.076

2017-02-17)