用于无偿献血初筛的最佳HBsAg/TP联合检测金标试纸条的筛选及意义

宋丽娟，侯志敏，张巧云

·实验研究·

用于无偿献血初筛的最佳HBsAg/TP联合检测金标试纸条的筛选及意义

宋丽娟，侯志敏，张巧云

目的 筛选最佳的乙肝表面抗原(HBsAg)和梅毒螺旋体(TP)金标试纸条对无偿献血者HBsAg和TP进行初筛，预算如果使用HBsAg/TP联合金标试纸条作为街头初筛检测项目可能有效降低血液资源浪费和血液成本。方法 用三种金标试纸条(双试剂HBsAg/TP联合检测试纸条、单试剂HBsAg检测金标试纸条和TP检测金标试纸条)分别检测临床科研血清盘，从中选择最佳金标试纸条，对330例HBV和140例TP酶联免疫法阳性样本检测，通过检测的阳性率，预算可有效节约成本的百分率。结果 通过比对验证和分析灵敏度验证选择HBsAg/TP联合检测金标试纸条为最佳试纸条，对330例HBsAg酶联免疫法阳性样本检测的阳性率为3.03%～8.2%，对140例TP酶联免疫法阳性样本检测的阳性率为58.6%～68.6%，预算出可有效节约成本0.29%～0.36%。结论 HBsAg/TP联合检测金标试纸条同时可得到HBsAg和抗TP 2个结果，操作简便，耗时短，且特异度100%、灵敏度尚可，可避免无效采集带来的血液资源和成本浪费，适合于血站街头初筛检测。

HBsAg/TP联合检测金标试纸条；初筛检测；基础成本

近年来，全国法定传染病疫情概况报告发病数居前5位的病种一直有病毒性肝炎、梅毒[1]，为此，卫计委一直很重视经血传播疾病的检测方法。迄今为止，酶联免疫法(ELISA)因操作简便、成本低廉而被我国广泛应用[2]。目前，宁夏无偿献血街头初筛只做快速金标试纸检测HBsAg，而对TP不做快筛。为此，我们对宁夏无偿献血血液采集后HBsAg和TP的ELISA检测阳性样本用筛选的最佳金标试纸条重新检测，诠释合理的初筛方案可以有效减少血液采集后所发生的检测、制备、保存、将来用血返还等一系列成本浪费。

1 材料与方法

1.1 标本来源：收集宁夏血液中心2014年7月-2016年8月采集的银川市无偿献血者用ELISA法检测HBsAg阳性报废的血辫330份和TP阳性报废的血辫140份，共计470份。

1.2 试剂：TP ELISA诊断试剂盒两种，上海科华和北京万泰；HBsAg ELISA诊断试剂盒两种，法国伯乐和北京万泰。酶免检测质控品来源北京金豪，HBsAg/TP联合检测试剂(胶体金法)、HBsAg检测试剂盒(胶体金法)、TP检测试剂(胶体金法)，均为英科新创(厦门)科技有限公司生产。

1.3 临床科研血清盘

1.3.1 HBsAg临床科研血清盘(01504007批)：包括46份样本，其中阴性20份，阳性20份，梯度稀释样本5份(其中L5为基质液，其他4份为阳性梯度稀释样本，浓度水平依次为2 IU/mL、1 IU/mL、0.5 IU/mL、0.2 IU/mL)，1份精密性样本(浓度约为1 IU/mL)，北京康彻斯坦生物技术有限公司生产。

1.3.2 梅毒抗体临床科研血清盘(201410005批)：包括46份样本，其中阴性20份，阳性20份，梯度稀释样本5份(其中L5为基质液，其他4份为阳性梯度稀释样本，浓度水平依次为21 mIU/mL、12 mIU/mL、6 mIU/mL、3 mIU/mL)，1份精密性样本(浓度约为6 mIU/mL)，北京康彻斯坦生物技术有限公司生产。

1.4 仪器：STAR全自动加样仪，FAME全自动酶免检测仪(瑞士HAMILTON公司)。

1.5 方法：本中心对无偿献血者在采血之前只做HBsAg(胶体金法)初筛检测，检测和体检合格者可成为初筛合格的无偿献血者，采集血液，所有采集后的样本送到检验科做ELISA双试剂检测。

1.5.1 用临床标准血清盘验证ELISA试剂的准确性：用伯乐、万泰两种HBsAg ELISA试剂和科华、万泰两种TP ELISA试剂，分别对HBsAg和TP临床标准血清盘检测，检测结果与血清盘使用说明书中的已知结果比较。目的是确认此次收集的无偿献血者470份ELISA阳性样本，其阳性检测结果来源可靠。

1.5.2 最佳金标检测试剂条的选择：通过比对验证和分析灵敏度验证选择，比对验证是用HBsAg/TP联合检测金标试纸条、单联HBsAg检测金标试纸条、单联TP检测金标试纸条，分别对临床标准血清盘样本进行检测，评估检测结果的一致性；分析灵敏度验证，采用血清盘梯度浓度分析试纸条检测的灵敏度[3]。

1.5.3 用HBsAg/TP联合检测金标试纸条检测标本：用HBsAg/TP联合检测试纸条对收集的330份HBsAg ELISA阳性和140份TP ELISA阳性样做检测，根据其不同反应时间的阳性结果(计算方法见2.6和2.7)。如果推广使用HBsAg/TP联合检测试纸条作为街头初筛检测，预测可能节约血资源的成本[4]。

1.6 统计学方法：采用SPSS 18.0统计软件，计数资料采用配对χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ELISA检测：对双试剂ELISA检测阳性的报告结论为阳性，对单试剂ELISA检测阳性的做双孔复查，复查结果为双孔阳性或一阴一阳均报告结论为阳性。实验得出HBsAg和抗TP临床科研血清盘的ELISA检测与血清盘已知结果符合率100%。结果显示，该ELISA检测试剂灵敏度和特异性为100%。

2.2 筛选最佳金标试纸条

2.2.1 筛选最佳HBsAg检测金标试纸条：HBsAg/TP联合检测试纸条和单联HBsAg检测试纸条检测HBsAg血清盘样本46个(其中阳性25个，阴性21个)，两种试纸条检测结果一致。现以街头检测实际发生的快速判读5 min为最小判读时间，以金标试纸条SOP规定的15 min为最大判读时间，5 min内立刻出现阳性8份，计算得出最小阳性检出率=8÷25=32%；15 min内出现总阳性数13个，计算得出最大阳性检出率=13÷25=52%，即：两种试纸条阳性检出率32%～52%；血清盘阴性样本用两种试纸条检测均显示阴性结果，无假阳性，计算得出：两种试纸条的特异度为100%，灵敏度为59.5%～67.6%。

2.2.2 筛选最佳TP检测金标试纸条：HBsAg/TP联合检测试纸条和TP单联检测试纸条检测TP血清盘样本46个(其中阳性25个，阴性21个)，两种试纸条检测结果一致(判读方法同2.2.1)，5 min内出现阳性7份，计算得出最小阳性检出率=7÷25=28%；15 min内出现总阳性数25个，计算得出最大阳性检出率=25÷25=100%，即：两种试纸条阳性检出率28%～100%；血清盘阴性样本用两种试纸条检测均显示阴性结果，无假阳性，计算得出：两种试纸条的特异度为100%，灵敏度为58.1%-100%。

2.2.3 确定最佳金标试纸条：2.2.1和2.2.2结果证明，2组试纸条的特异性高，灵敏度受HBsAg和抗TP浓度含量的影响而不同，经统计学分析差异无统计学意义(P>0.05)。因HBsAg/TP联合检测金标试纸条同时可得到HBsAg和抗TP 2个结果，提高检测速度和降低检测成本[5]，最终确定HBsAg/TP联合检测金标试纸条为最佳选择，同时证明金标试纸条比ELISA法的敏感度低。

2.3 HBsAg/TP联合检测试纸条检测样本：见表1。

表1 HBsAg/TP联合检测试纸条检测结果

2.3.1 对已做过街头快速金标试纸条HBsAg初筛的330份ELISA阳性样本重新检测：5 min内出现阳性10份，15 min内出现阳性27份，参照2.2.1项计算方法得出阳性率为3.03%～8.2%。此次因重复检测可以认为该阳性率为街头初筛漏检率，导致这些乙肝携带者在初筛漏检后参与了无偿献血。

2.3.2 对未做过街头快筛TP 的140份ELISA阳性样本检测：5 min内出现阳性82份，15 min内出现阳性96份，参照2.2.2项计算方法得出阳性率为58.6%～68.6%。

2.4 如果对无偿献血者全部采用HBsAg/TP联合检测试纸条做初筛检测则可节约成本

2.4.1 基础成本核算=血液采集血袋+病毒灭活袋+检验科检测试剂(包含：采样管+两遍ELISA+血型+ALT+质控品=65元；罗氏核酸检测+采样管=74元)，其中核酸检测是从2015年开始。其他耗材及血液运输、冷冻、保存、仪器、人力、耗电等所发生费用均忽略不计。

2.4.2 HBV经济损失=HBsAg阳性血制品基础成本×HBsAg漏检率(即3.03%或8.2%)；TP经济损失=TP阳性血制品基础成本×TP阳性率(即58.6%或68.6%)，见表2。

表2 宁夏血液中心2013-2015年因HBsAg和TP阳性报废血制品成本核算

2.4.3 计算2013-2015年如果用HBsAg/TP联合检测试纸条作为街头初筛检测，可节约成本=(HBV经济损失+TP经济损失)÷关键物料及试剂采购价=0.29%～0.36%。

3 讨论

根据国家卫生部公布的法定传染病疫情概况，2009-2011年梅毒报告病例数在我国甲乙类传染病报告中连续3年居第3位，有逐年上升趋势[6]。近年来，随着我国经济发展与人们生活观念的改变，出现了两种趋势：一是人口流动频繁，造成吸毒、性乱现象增加，疾病传播呈广泛复杂性；二是疾病预防观念增强，我国从2013年开始乙肝感染比往年呈下降趋势，而梅毒有所抬头[7]。因此，分析我国近几年乙肝和梅毒感染状况以及由血源和性传播传染病情况，对无偿献血的招募和血液筛查成为医疗卫生工作中安全输血的重要研究课题。

宁夏全区2013-2015年无偿献血筛查HBsAg和抗TP阳性者存在一些特点：①阳性率逐年呈下降趋势；②TP阳性率比HBsAg阳性率高；③各地市级血站采集的无偿献血者阳性率比血液中心采集的高。在献血前加强HBsAg和TP的快速筛查工作，要从根本上认识到这是全区无偿献血工作中的重中之重，可大大降低采血后血液检测不合格率，达到从源头上防止血液传播疾病，提高输血安全性的目的。

由于多数情况下由于血液采集工作环境和工作量大的影响，工作人员没有严格依照说明书中最终判定结果时间要求，采用5 min内快速读取结果；再者工作人员的粗心，误判、漏检时有发生，以及试纸条自身灵敏度的限制等影响[8]，造成HBsAg初筛漏检率为3.03%～8.2%；又因TP不做初筛检测，导致58.6%～68.6%的阳性血没有被阻挡在献血者征询体检中而进入后期血液制备检验各环节。如果用HBsAg/TP联合检测试纸条作为街头初筛检测，2013-2015年可有效节约成本0.29%～0.36%。以上预算还仅仅是面向宁夏血液中心在银川范围所采集血液，如果面向宁夏全区，由于4个地市级血站采集血液总量比血液中心少约1倍，但其阳性率比血液中心高，估计又可造成很大的血液采集制备等成本浪费以及带来可观的血液资源的浪费。总之，不科学的献血初筛计划，不但无形中会大大增加血液成本，而且加大了输血风险,HBsAg/TP联合检测试纸条可面向全区作为无偿献血街头初筛检测的推广使用。

[1] 濮云峰，曹锁春.2011-2014年常州市无偿献血人群梅毒、HIV、HCV、HBV感染分析[J].临床输血与检验，2016，18(2)：119-121.

[2] 杨刚，马晓军，杨文勇，等.核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用[J].中国输血杂志，2016，29(11)：1249.

[3] 黄力勤，刘正敏，冷婵，等.Cobas S201 核酸检测系统使用前性能验证[J].中国输血杂志，2016，12(8)：1339-1343.

[4] 赵水长.血制品成本核算方法探讨[J].中国卫生经济，2016，7:91-93.

[5] 雷皖秋.金标试纸条联合快速检测HBsAg/TP法在无偿献血中的应用探讨[J].中国输血杂志，2006,12(19)：462-466.

[6] 国家卫生和计划生育委员.2014年度全国法定传染病疫情概况[R].中华人民共和国卫生和计划生育委员会公报，2015-02-16.

[7] 国家卫生和计划生育委员.2015年度全国法定传染病疫情概况[R].中华人民共和国卫生和计划生育委员会公报,2016-02-18.

[8] 郭建波，段荣，郭滔，等.酶免检测系统检测HBsAg的比对分析[J].中国输血杂志，2016，29(2)：151-153.

Screening and significance of the optimal HBsAg / TP Joint Test Gold Strips for Free Blood Donation

SONGLijuan,HOUZhimin,ZHANGQiaoyun.

NingxiaBloodCenter,Yinchuan750001,China

Objective To screen the best hepatitis B surface antigen (HBsAg) and Treponema pallidum (TP) gold standard test strips in order to reduce the waste and extra cost of blood resource.Methods Three gold standard test strips (HBsAg/TP combined with double reagent test strip, single HBsAg reagent test strip and TP test strip) were used to detect clinical research serum disk and chose the best gold standard test paper.The cost-effective percentage was predicted by testing the positive rate of 330 cases of HBV and 140 cases of TP-free positive samples.Results The HBsAg/TP Joint Test Gold Strips was the best test strips by matching verification and analysis sensitivity verification.The positive rate of 330 cases of HBsAg was 3.03%-8.2%.The positive rate of 140 TP Enzyme-free samples was 58.6% -68.6%.The cost-effective saving was 0.29%～0.36%.Conclusion The result of HBsAg and anti TP can be obtained simultaneously from using HBsAg/TP joint detectiong gold strips.With simple The operation is simple and the,specificity is 100% .It can effectively avoid invalid collection which can result in the waste of resource and cost.As a consequence, it is suitable for screening blood in the street.

HBsAg/TPjointdetectiongoldstrip;Screeningtest;Basiccost

10.13621/j.1001-5949.2017.06.0532

宁夏卫生厅科研项目(2013009)

宁夏血液中心，宁夏 银川 750001

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20170614.1315.036.html

R446.11

A

2016-12-08 [责任编辑]马兴忠