冻融胚胎移植周期临床结局的影响因素*

刘艳丽，李君芳，张玉超，申春艳，杨 悦，王兴玲#

1)郑州大学第三附属医院生殖中心 郑州 450052 2)郑州大学第三附属医院检验科 郑州 450052

冻融胚胎移植周期临床结局的影响因素*

刘艳丽1)，李君芳2)，张玉超1)，申春艳1)，杨 悦1)，王兴玲1)#

1)郑州大学第三附属医院生殖中心 郑州 450052 2)郑州大学第三附属医院检验科 郑州 450052

#通信作者，女，1962年2月生，博士，主任医师，教授，研究方向：生殖内分泌与辅助生殖，E-mail:wangxl208@126.com

玻璃化冷冻；冻融胚胎移植；妊娠率；着床率；影响因素

目的：探讨玻璃化冷冻胚胎复苏移植临床结局的影响因素。方法：回顾性分析2 430个冻融胚胎移植周期，研究患者年龄、授精方式、内膜厚度、胚胎冷冻保存时间、胚胎在平衡液中的平衡时间和胚胎质量对冻融周期胚胎移植结局的影响。结果与结论：年龄(β=-1.029,P<0.001)、胚胎冷冻保存时间(β=-0.101，P<0.05)和胚胎质量(D3胚胎和D5/D6囊胚质量的β分别为-2.824和-2.878，P<0.001)是冻融胚胎移植临床妊娠率的主要影响因素。

自1985年Cohen等[1]报道了世界上首例冻融胚胎移植获得健康婴儿出生以来，胚胎冷冻技术在辅助生殖技术领域被广泛应用。胚胎冷冻后择期移植不仅有助于预防卵巢过度刺激的发生，提高治疗的安全性，同时也能够提供多次移植机会，提高临床妊娠率，但目前影响冻融胚胎移植的因素很多。该研究探讨了患者年龄、内膜厚度、受精方式、胚胎冷冻保存时间、胚胎在平衡液中的平衡时间、移植胚胎质量对冻融胚胎移植临床结局的影响，以期为冻融胚胎的临床工作提供参考。

1 对象与方法

1.1 研究对象 回顾分析2014年1月至2015年6月在郑州大学第三附属医院生殖中心行常规体外受精(IVF)/卵胞浆内单精子注射(ICSI-ET)后行冻融胚胎移植的2 430个冻融胚胎移植周期的临床结局。

1.2 移植方法

1.2.1 胚胎来源 所有助孕患者经促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)联合FSH/HMG长方案或短方案促排卵、常规取卵、IVF/ICSI，培养至第3、5、6天(D3、D5、D6)，选择在新鲜周期没有移植或者移植后没有妊娠的患者，将其可利用胚胎或新鲜周期移植后剩余的胚胎进行玻璃化冷冻保存。

1.2.2 胚胎的选择 D3胚胎评分标准参照Peter[2]方法,D3可利用胚胎在征得患者知情同意后冷冻保存。D5/D6囊胚的评分采用Gardner[3]评分系统。首先根据囊腔扩张程度分为1～6期，然后对4～6期的囊胚进一步根据内细胞团和滋养外胚层细胞表现评为A～C级。

1.2.3 胚胎冷冻 采用丹麦Medicult 公司的Cooling盒。冷冻前冷冻液须室温平衡30 min。将D3胚胎/囊胚(激光皱缩后)移入基础液中1 min，然后转入平衡液中5或7 min左右。D3胚胎会出现收缩再恢复，再转入玻璃化冷冻液中平衡30 s左右。将胚胎移至冷冻载杆上迅速投入液氮中保存。

1.2.4 胚胎复苏及移植 采用丹麦Medicult 公司Warming试剂。将复苏液WS1 在37 ℃培养箱中平衡30 min，复苏液WS2、WS3、WS4 在室温下平衡30 min。解冻时，从液氮中取出有胚胎的载杆，迅速将其尖端浸入WS1中约1 min，然后将胚胎依次转入WS2、WS3、WS4中分别停留3 min，卵裂球崩解比例<50认为该胚胎存活。最后，将胚胎移入G-2培养液中培养2 h后进行移植。移植后使用达芙通、补佳乐等进行黄体支持直至化验人绒毛膜促性腺激素(HCG)日。

1.2.5 临床妊娠的判定 移植后第35天B超见孕囊确定为临床妊娠。

1.3 统计学处理 用SPSS 17.0分析，冻融胚胎移植结局的比较采用χ2检验，采用logistic回归分析筛选冻融胚胎临床妊娠率的影响因素，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 冻融胚胎移植结局 见表1。由表1可知，D5/D6囊胚移植组临床妊娠率、着床率和活产率高于D3胚胎移植组；≤35岁组移植结局优于>35岁组；胚胎冷冻保存时间为13～24个月组临床妊娠率、着床率均低于0～6个月组；含优质D3胚胎或优质D5/D6囊胚组的临床妊娠率、着床率和活产率明显高于无优质胚胎。

表1 冻融胚胎移植结局 %

*:与0～6个月组比较，P<0.05；#：与D3组胚胎同年龄组比较，P<0.05。

2.2 冻融胚胎移植结局影响因素分析 以冻融胚胎移植的临床结局为因变量，年龄、子宫内膜厚度、受精方式、胚胎冷冻保存时间、胚胎在平衡液中平衡时间和移植的D3胚胎或D5/D6囊胚质量为自变量进行逐步logistic回归分析(α入=0.05，α出=0.10)，变量赋值见表2,结果见表3。结果表明冻融胚胎的临床妊娠率与年龄、胚胎冷冻保存时间、移植胚胎/囊胚质量有关。

表2 变量名称及赋值说明

表3 logistic回归分析结果

3 讨论

该研究结果表明，年龄、胚胎冷冻保存时间及胚胎质量是影响冻融胚胎临床结局的主要因素。目前，年龄对冻融胚胎临床结局的影响尚有争议。Ashrafi等[4]表示在冻融周期中年龄不是影响移植结局的重要因素，年龄与移植胚胎着床率、临床妊娠率无明显相关性，认为高龄者虽然生育能力下降和卵泡发育欠佳，但患者若有可利用胚胎进行冻融移植，在一定程度上表明其卵巢储备及卵子质量尚可。该研究中≤35岁组临床妊娠率、着床率和活产率均高于>35岁组，考虑与卵子质量下降、子宫内膜容受性降低有关，这与郐艳荣等[5]结论一致。

胚胎移植成功与否与胚胎质量关系密切。该研究结果显示，高质量胚胎/囊胚移植的临床妊娠率、着床率及活产率均明显高于非优质胚胎移植，这除了与优质胚胎/囊胚的发育潜能强有关外，还可能与优质胚胎耐受降温和复温损伤能力强有关，碎片较多的胚胎在冷存过程中更容易发生冷冻损伤。提示应尽量选择优质胚胎进行冷冻，非优质胚胎可进行囊胚培养。此外，因卵裂期胚胎发育至囊胚期可能存在发育阻滞，囊胚发育潜力明显高于卵裂期胚胎，且囊胚移植能与子宫内膜种植窗的开放趋于同步[6]，减少胚胎在宫腔内的游走，有利于胚胎植入。该研究数据也显示D5/D6囊胚移植较D3胚胎移植有更好的临床结局，与Wang等[7]和陈小燕等[8]的研究结果一致。因此，D3胚胎并非最佳选择。对于有两次及以上移植失败史且有冷冻胚胎的患者，签署知情同意书后选择复苏胚胎培养至囊胚后移植，可避免反复移植给患者带来的心理和经济上的负担。

胚胎在液氮中存放时间是否会影响冻融胚胎的临床结局，不同学者有不同的观点。赵庆红等[9]的研究结果显示，胚胎冷冻保存时间<6个月、6～12个月、12～19个月组间临床结局差异并无统计学意义，但<6个月组胚胎的复苏率和临床妊娠率最高。Aflatoonian等[10-11]研究显示胚胎冷冻保存时间不影响妊娠率、着床率和活产率，只有年龄和移植胚胎数目影响临床妊娠率。张军等[12]认为胚胎冷冻保存90 d内行冻融胚胎移植临床妊娠率降低。郑州大学第三附属医院生殖中心将冻融胚胎的冷冻时间分为0～6个月、7～12个月、13～24个月和≥25个月，结果显示冷冻时间0～6个月组较7～12个月和13～24个月组有较高的临床妊娠率和着床率，但≥25个月组和0～6个月组有相似的临床结局。该组最长的冷冻保存时间为67个月。该研究发现胚胎在平衡液中平衡5 min或者7 min，临床妊娠率及着床率差异并无统计学意义，可以选择在平衡液中平衡5 min，这样既能成功冻存胚胎，又能减少冷冻保护剂的毒性作用。

子宫内膜的容受性指子宫内膜对胚胎的接受能力，即着床窗口期，是冻融胚胎移植获得成功临床妊娠的关键因素之一。子宫内膜厚度是评价子宫内膜容受性的重要指标。秘祖霞等[13]发现FET日子宫内膜厚度>12.0 mm组着床率和临床妊娠率高于≤12.0 mm组；而李娜等[14]认为胚胎着床需要适宜的子宫内膜厚度，子宫内膜太薄或者太厚均不利于胚胎着床，子宫内膜厚度在8.0～11.0 mm内临床妊娠率最高。但该研究未发现子宫内膜厚度对冻融胚胎移植的临床结局有影响。该研究亦未发现不同受精方式(IVF/ICSI)对冻融胚胎临床结局有影响，与薛侠等[15]观点一致。

总之，年龄、冷冻保存时间和胚胎质量是影响冻融胚胎移植临床结局的重要因素。尽量选择在取卵后半年内进行移植，使胚胎在机体于接近自然的内分泌环境下植入，可获得较高的临床妊娠率。

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[13]秘祖霞，徐雯，卢伟英，等.玻璃化冻融人卵裂期胚胎移植结局的影响因素分析[J].现代妇产科进展,2012,21(2):128

[14]李娜，苗聪秀，关素萍，等.冷冻胚胎移植失败高危因素的logistic回归分析[J].郑州大学学报(医学版),2013,48(3):403

[15]薛侠，张四林，施文浩，等.不同授精方式的选择性单囊胚移植的妊娠结局分析[J].生殖医学杂志，2014,23(9):760

(2016-12-01收稿 责任编辑王 曼)

Influence factors of clinical outcomes of frozen-thawed embryo transfer

LIUYanli1),LIJunfang2),ZHANGYuchao1),SHENChunyan1),YANGYue1),WANGXingling1)

1)ReproductiveMedicineCenter，theThirdAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052 2)DepartmentofClinicalLaboratory,theThirdAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052

vitrification freezing；frozen thawed embryo transfer；clinical pregnancy rate；implantation rate；influence factor

Aim: To explore the influence factors of the frozen thawed embryo transfer(FET) outcomes of human vitrified embryos.Methods: A total of 2 430 FET cycles were collected, and the effects of the age of the patients,insemination ways,endometrium thickness,embryo cryopreservation time, the balance time of embryos in equilibrium liquid and the quality of embryo on the clinical outcomes were analyzed.Results and conclusion: The results showed that age(β=-0.101，P<0.001),embryo cryopreservation time(β=-0.101，P<0.05) and embryo quality(D3β=-2.824,D5YD6β=-2.878，P<0.001) were the influence factors of clinical pregnancy rate.

10.13705/j.issn.1671-6825.2017.04.015

* 河南省医学科技攻关项目 201602126;郑州大学横向科研项目 20160170A

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