一氧化氮合酶抑制剂对七叶莲花镇痛作用的影响

孙爱静，庞素秋，陈滟湄

·论 著·

一氧化氮合酶抑制剂对七叶莲花镇痛作用的影响

孙爱静，庞素秋，陈滟湄

目的 探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂与七叶莲花镇痛作用的关系。 方法 采用小鼠热板法，将小鼠随机分为等渗盐水组(阴性对照组)、曲马多组(阳性对照组)及各实验组，观察L-精氨酸(L-Arg)和NOS抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)对七叶莲花醇提物(SAHF)镇痛作用的影响。 结果 与等渗盐水组比较，L-NAME可显著增强七叶莲花的镇痛作用(P<0.01)；与SAHF组比较，脑组织中NO水平显著降低(P<0.05)。 结论 七叶莲花的镇痛作用和NOS抑制剂之间存在一定的相互作用，L-NAME可显著增强七叶莲花的镇痛作用，提示SAHF的镇痛作用机制与降低体内过量的NO有关。

七叶莲花；一氧化氮合酶；L-硝基精氨酸甲酯；镇痛作用

七叶莲为五加科植物鹅掌柴(ScheffleraarboricolaHayata)的根或茎叶，具有祛风止痛、活血消肿作用，是我国南方民间治疗三叉神经痛、坐骨神经痛、跌打肿痛的中草药[1]。该植物花为伞形花序，花期7-10月，花产量高，花期长，福建地区有以七叶莲花蜜治疗风湿性疾病的应用。前期研究证明七叶莲花具有显著抗炎镇痛活性[2-3]。本研究采用小鼠热板模型，探讨七叶莲花醇提物(SAHF)的镇痛作用及一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)与七叶莲花镇痛作用间的关系，为进一步探讨其镇痛作用机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 七叶莲花采自泉州清源山，经鉴定为五加科植物鹅掌柴的花序，由本实验室制成乙醇粗提物(SAHF)。盐酸曲马多片，石药集团欧意药业有限公司，批号：012110101；L-精氨酸(L-Arg)，国药集团化学试剂有限公司，批号：F20110325；L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)，阿拉丁试剂，批号：23864；NO试剂盒(化学法)，南京建成生物工程研究所；七叶莲片，泉州中侨(集团)股份有限公司药业公司，批号：110201。其余所需化学试剂为分析纯。

1.2 仪器 DK-S24电热恒温水浴锅，上海森信实验仪器有限公司；JA2003A电子天平，上海精天电子仪器有限公司；SP-752PC紫外可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司；瑞士Tecan Infinite F200/M200型多功能酶标仪。

1.3 实验动物 昆明种小鼠体重18～22 g，供应单位：上海斯莱克实验动物有限责任公司，实验动物合格证编号：2007000521085。小鼠饲养于鼠笼中，每笼10只，每天更换垫料1次，自由摄食和饮水，保持室内温度18～22 ℃，相对湿度40%～60%，自然光照。

1.4 方法

1.4.1 小鼠热板法实验 参照文献[4]方法进行。取体重(20±2)g的雌性小鼠，将其放在预热之后(55±0.5)℃的金属板上，以小鼠舔后足所需时间为痛阈值。实验前筛选痛阈指标5～30 s的合格小鼠，给药前测小鼠的基础痛阈值2次，间隔5 min，取平均值为基础痛阈值。为了防止小鼠足烫伤，设定60 s为截止时间，超过60 s视痛阈值为60 s。室温维持在15 ℃左右。将60只受试小鼠随机分成6组，每组10只：等渗盐水组(10 mL/kg)、曲马多组(盐酸曲马多片40 mg/kg)、七叶莲片组(292.9 mg/kg),以及SAHF高剂量组(24.48 g/kg)、中剂量组(12.38 g/kg)、低剂量组(6.19 g/kg)。实验开始前30 min灌胃给药，1次/d，连续3 d。于末次给药后30、60、90、120 min分别测定舔足潜伏期。取实验中脑组织，按NO试剂盒(化学法)说明书测定热板实验中脑组织中NO的含量。

1.4.2 热板法测定L-NAME对SAHF镇痛作用的影响 采用1.4.1中小鼠热板法实验中的方法，将50只受试小鼠随机分为5组：等渗盐水组(10 mL/kg)、曲马多组(40 mg/kg)、SAHF组(48.96 g/kg)、SAHF+L-Arg组(48.96 g/kg+200 mg/kg)、SAHF+L-NAME组(48.96 g/kg+37.5 mg/kg)。各组灌胃给予等渗盐水、曲马多、SAHF，SAHF+L-Arg组、SAHF+L-NAME组另分别腹腔注射L-Arg、L-NAME。给药后30、60 min分别测定痛阈值[5]。取实验中脑组织，按NO试剂盒(化学法)说明书测定实验中脑组织中NO的含量。

2 结 果

2.1 小鼠热板法实验结果 热板实验结果表明，与用药前比较，SAHF高剂量组可明显延长小鼠热板反应舔足潜伏期，随着时间进展，给药后90 min时痛阈值最大，随后下降。SAHF镇痛作用效果介于盐酸曲马多组和七叶莲片组之间，作用效果与较叶莲片组更好(P<0.05)。见图1。

图1 七叶莲花醇提物对小鼠热板实验的影响

2.2 SAHF对小鼠热板实验脑组织中NO的影响 与等渗盐水组比较，SAHF高剂量能显著抑制小鼠脑组织中NO的含量(P<0.05)，中、低剂量也有一定的抑制作用趋势，但与等渗盐水组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

组别nNO含量等渗盐水组106 50±0 67曲马多组105 23±0 38七叶莲片组106 14±0 59SAHF低剂量组106 41±0 59∗SAHF中剂量组105 77±0 52SAHF高剂量组105 13±0 72#△与曲马多组比较，∗P<0 01；与等渗盐水组比较，#P<0 05；与七叶莲片组比较，△P<0 05

2.3 热板法测定L-NAME对SAHF镇痛作用的影响 实验结果显示：L-Arg可减弱SAHF的镇痛作用(P<0.01)，L-NAME可增强SAHF的镇痛作用(P<0.01)。见表2。

组别n痛阈基础痛阈给药后30min给药后60min等渗盐水组1018 00±3 6118 17±4 1717 5±2 74曲马多组1016 00±3 2230 83±6 1517 67±2 73SAHF组1017 50±2 4314 33±1 6323 17±3 31SAHF+L⁃Arg组1018 00±2 5319 20±3 5621 33±1 65∗SAHF+L⁃NAME组1018 50±2 5127 83±10 2329 50±5 17#△与曲马多组30min比较，∗P<0 01；与等渗盐水组比较，#P<0 01；与SAHF组比较，△P<0 05

2.4 L-NAME对小鼠热板实验脑组织中NO的影响 与SAHF组比较，SAHF+L-NAME组小鼠脑组织中NO的含量显著降低(P<0.05)。见表3。

组别nNO含量等渗盐水组105 92±0 37曲马多组105 18±0 78SAHF组104 95±0 43SAHF+L⁃Arg组105 32±0 65SAHF+L⁃NAME组104 25±0 81∗与SAHF组比较，∗P<0 05

3 讨 论

NO是一种重要的信号分子，参与机体认知、痛觉感受和神经分泌等过程[6]。L-Arg是体内合成NO的前体物质[7]，正常状态下，L-Arg在NOS的作用下生成L-瓜氨酸和NO，而D-精氨酸(D-Arg)则无此作用。L-NAME是精氨酸类似物，可以竞争性地抑制NOS的活性，从而减少内源性NO的生成[8-9]。目前已有大量的研究表明NO在中枢及外周的不同痛觉调制中起重要作用[10]。研究显示，脊髓内合成的NO参与吗啡介导的镇痛效应，而抑制NO的合成则可明显增强吗啡的镇痛作用，提示了NO参与外周和脊髓水平的痛觉调制，具有明显的痛敏效应[11]。而向大脑侧脑室内微量注射L-NAME后，大鼠痛阈升高明显，提示中枢神经内源性NO水平的降低表现一定的镇痛效应[12]。前期实验表明，SAHF对多种抗炎镇痛模型均能起明显抑制作用，并提示部分通过中枢系统起作用，呈量效关系；热板实验表明：SAHF可抑制PGE2及MDA的含量，同时能够抑制小鼠血清中NO的生成[2-3]。在本实验中，探索SAHF对小鼠热板实验中脑组织NO的影响，发现与等渗盐水组比较，SAHF高剂量能显著抑制小鼠脑组织中NO的含量(P<0.05)，提示SAHF的镇痛作用可能与减少NO的生成有关。在本实验中，采用热板法测定L-NAME对SAHF的镇痛作用的影响，显示L-NAME可显著增强SAHF的镇痛作用(P<0.01)，提示SAHF的镇痛作用机制与降低体内过量的NO有关，为进一步探讨其镇痛作用机制奠定基础。

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(本文编辑：叶华珍； 英文编辑：王建东)

Effects of nitric oxide synthase inhibitor on the analgesic effects induced byScheffleraarboricolaHayata flower

SUN Ai-jing, PANG Su-qiu, CHEN Yan-mei

(DepartmentofClinicalPharmacy,the180thHospitalofPLA,Quanzhou362000,Fujian,China)

Objective To explore the relationship ofScheffleraarboricolaHayata flower (SAHF) and nitric oxide synthase(NOS) inhibitor on the analgesia. Methods Mice were randomly separated into the normal saline group(negative control group), tramadol group(positive control group) and experimental groups. The analgesic effects of SAHF were observed by hot-plate test, and L-Arg and nitric oxide synthase inhibitor (L-NAME) were administered in combination with SAHF to study the influence on the anti-analgesia effect. Results Contrasted with the normal saline group, L-NAME can enhance the analgesic action of SAHF(P<0.01), and contrasted with SAHF group, L-NAME can reduce the level of nitric oxide in the brain(P<0.05). Conclusion SAHF has significant analgesic effects, which may be related with excessive nitric oxide, and the analgesia of SAHF could be augmented by L-NAME.

ScheffleraarboricolaHayata flower; Nitric oxide synthase; L-NAME; Analgesic

南京军区医药卫生科研基金(15MS114)

362000泉州，解放军第180医院临床药学科

孙爱静，庞素秋，陈滟湄.一氧化氮合酶抑制剂对七叶莲花镇痛作用的影响[J].东南国防医药，2017,19(3):231-233.

R285.5

A

1672-271X(2017)03-0231-03

10.3969/j.issn.1672-271X.2017.03.002

2017-02-22;

2017-04-19)