顶空气相色谱法检测血塞通分散片中有机溶剂残留量

李培，董青

(山东省聊城市食品药品检验检测中心，山东聊城252000)

·检验检测·

顶空气相色谱法检测血塞通分散片中有机溶剂残留量

李培，董青

(山东省聊城市食品药品检验检测中心，山东聊城252000)

目的建立测定血塞通分散片中6种有机溶剂残留量的顶空气相色谱法。方法色谱柱采用以聚乙二醇为固定相的HP－INNOWAX毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm，0.25 m）；氢火焰离子化检测器（FID）；柱温采用程序升温，初始温度为60℃，保持1 min，再以5℃/min升温至100℃，保持13min，再以20℃/min的速度升温至200℃，保持2min；进样口温度为240℃；检测器温度为300℃；载气为氮气；流速为2.5mL/min。顶空进样，顶空瓶平衡温度为70℃，平衡时间为30min。结果正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯、1，2－二乙基苯的检测质量浓度线性范围分别为1.014～16.224，1.060～16.960，1.610～18.576，1.169～18.704，0.985～15.760，1.129～18.064 g/mL，相关系数r分别为0.999 6，0.999 9，0.999 9，0.999 6，0.999 4，0.999 2（n＝5）；回收率均在97.14%～98.73%（n＝9）；理论板数均大于10 000，相邻峰的分离度均在2.0以上。结论该方法样品处理简单，检测准确，灵敏度高，重复性好，排除了辅料的干扰，可作为血塞通分散片中有机溶剂残留量的考察方法。

顶空；气相色谱法；血塞通分散片；有机溶剂残留

血塞通分散片是由原料药三七总皂苷添加各种辅料压制而成，有效成分为三七总皂苷，主要用于活血祛瘀、通脉活络、抑制血小板聚集和增加脑血流量。三七总皂苷是由三七药材中提取并使用大孔吸附树脂分离纯化而得，根据2015年版《中国药典(一部)》[1]和人用药品注册技术规范国际协调会（ICH）药品中有机溶剂残留量测定的指导原则，以及国际食品药品监督管理局药品注册管理对大孔树脂的最新要求，对于在生产工艺中使用过大孔树脂的制剂或原料，要对可能残留正己烷、苯、甲苯、邻二甲苯、对二甲苯、苯乙烯、1，2－二乙基苯进行检测，并对残留量加以控制[2]。故必须对血塞通分散片中有机溶剂的残留量进行检测，以控制产品质量，确保药品的安全性。本研究中采用顶空气相色谱法对血塞通分散片中有机溶剂进行了检测，经方法学验证，排除辅料的干扰，分析结果良好。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 7890型气相色谱仪，Agilent G1888型顶空自动进样器，氢火焰离子化检测器（FID）（美国安捷伦公司）；BT 125D型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

1.2 试药

正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯(色谱纯，Dr.Ehrenstorfer.GmbH，批号分别为31016，30914，50319，00416，31107，纯度均大于99.0%)；1，2－二乙基苯（Switzerland，批号为BCBQ7518V，纯度≥99.0%）；N，N－二甲基乙酰胺（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂）；水为超纯水(自制)；血塞通分散片（湖南方盛制药股份有限公司，批号为150606；浙江维康药业有限公司，批号为B150909；海南海力制药有限公司，批号为151102）。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

对照品溶液：取正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯和1，2－二乙基苯对照品适量，精密称取，加N，N－二甲基乙酰胺，分别制成每1mL含0.101 4，0.106 0，0.116 1，0.116 9，0.985 0，0.112 9 mg的溶液，作为对照品贮备液。精密量取上述对照品贮备液各1 mL，置50 mL容量瓶中，加25%N，N－二甲基乙酰胺水溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，精密量取对照品溶液2.0 m L置20 m L顶空进样瓶中，密封瓶口，即得。

供试品溶液：取供试品0.3 g，精密称定，置20 mL顶空进样瓶中，加入25%N，N－二甲基乙酰胺水溶液2.0m L，密封瓶口，摇匀，即得。

空白溶液：精密量取25%N，N－二甲基乙酰胺水溶液2.0 m L，置20m L顶空进样瓶中，密封瓶口，即得。

2.2 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：聚乙二醇为固定相的HP－INNOWAX毛细管色谱柱（30m×0.32mm，0.25μm）；检测器氢火焰离子化检测器（FID）；柱温：采用程序升温，初始温度为60℃，保持1min，再以5℃/min的速度升温至100℃，保持13 min，再以20℃/min的速度升温至200℃，保持2min；进样口温度：240℃；检测器温度：300℃；载气：氮气；流速：2.5 mL/min。顶空进样，顶空瓶平衡温度为70℃，平衡时间为30min。理论板数以甲苯峰计算应不低于10 000，各待测峰之间的分离度均应符合规定。

分别吸取混合对照品溶液、供试品溶液、空白溶液，按拟订色谱条件进样。结果，供试品溶液在与对照品溶液相应位置上未出现色谱峰，且对照品色谱图中基线平稳，分离度良好，空白溶液在该位置上无色谱峰出现，供试品溶液中有机溶剂残留不受辅料及溶剂的干扰。色谱图见图1。

2.3 方法学考察

线性关系考察：取对照品贮备液，分别制得5个不同质量浓度的对照溶液，各精密量取2.0mL置顶空瓶中，按拟订色谱条件进样分析。记录色谱峰面积，以各成分的进样质量浓度为横坐标（X，mg/L），以峰面积（Y）为纵坐标，进行回归分析。结果见表1。

1.正己烷2.甲苯3.对二甲苯4.邻二甲苯5.苯乙烯6.1，2－二乙基苯7.N，N－二甲基乙酰胺A.混合对照品溶液B.供试品溶液C.空白溶液图1高效液相色谱图

表1 6种有机溶剂线性回归方程

精密度试验：精密量取2.1项下对照品溶液5份，每份2.0 mL，置20m L顶空进样瓶中，重复进样5次，分别计算正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯和1，2－二乙基苯对照品溶液的峰面积。结果的RSD分别为2.61%，1.97%，2.48%，3.00%，2.24%，3.08% (n＝5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验：精密量取2.1项下对照品溶液5份，每份2.0 mL，置20m L顶空进样瓶中，重复进样5次，分别计算正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯和1，2－二乙基苯对照品溶液的峰面积。结果的RSD分别为1.98%，1.66%，2.37%，2.86%，1.82%，2.44%（n＝5），表明方法重复性良好。

稳定性试验：精密量取2.1项下对照品溶液7份，每份2.0mL，置20mL顶空进样瓶中，分别于0，2，4，6，8，12，24 h时进样测定。结果表明，在6 h内对照品溶液稳定性较好。详见表2。

表2 稳定性试验结果及最低检测限

加样回收试验：称取同一批供试品9份，每份0.3 g，精密称定，置20 m L顶空进样瓶中，分别精密加入高、中、低质量浓度的对照品溶液各2.0mL，平行3份，采用外标法测定含量，计算回收率。结果见表3。

最低检测限试验：将6种对照品贮备液分别逐步稀释，直到检测峰高与基线噪声比值在2.0倍时。结果见表2。

2.4 样品中有机溶剂残留量检测

取不同批号样品各3份，依法制备供试品溶液并检测。结果3批样品均未检出正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯和1，2－二乙基苯。

3 讨论

3.1 溶剂选择

正己烷、甲苯、对二甲苯、邻二甲苯、苯乙烯和1，2－二乙基苯在水中的溶解度不高，而水是FID检测器最理想的溶剂[3－16]。分散片中的辅料成分大部分不溶于水，三七总皂苷含量也比较少，所以溶剂选择有机溶剂与水的混合液。二甲基乙酰胺与二甲基甲酰胺都是良好的溶剂，但二甲基乙酰胺的热稳定性更好，由图1可见，其在1，2－二乙基苯峰处无干扰，故选择25%二甲基乙酰胺。

3.2 顶空加热温度选择

样品中辅料比较复杂，有低沸点成分，会对检测产生干扰，故考察了不同的顶空加热温度。结果发现在70℃时对照品溶液峰面积达到最大，样品中辅料成分无干扰。3.3限度测定

根据2015年版《中国药典（一部）》三七总皂苷中树脂溶剂的限度规定及GMP与ICH对第二类残留溶剂的限度规定，6种残留溶剂的限度为0.02%。

综上所述，采用顶空气相色谱法测定血塞通分散片中6种有机溶剂的残留量，色谱条件好，样品处理简单，排除了辅料的干扰，简单准确，灵敏度高，重复性好，可用于血塞通分散片中有机溶剂残留量的测定。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015:392－393.

[2]来国防，程宾，周兰，等.顶空气相色谱法检测三七总皂苷中的大孔树脂残留物[J].商丘师范学院学报，2009，25（6）：71－73.

[3]王翰华，倪珍珍，姚彤炜.顶空毛细管气相法测定三七提取物中有机溶剂残留量[J].浙江大学学报：医学版，2007，36（6）：598－603.

表3 加样回收试验结果（n＝9）

[4]胡丽霞，王晓仙，张红.五种常用大孔吸附树脂残留物的比较[J].中国药师，2015，18（3）：515－517.

[5]贾存勤，屠鹏飞，李阳春，等.中药产品中大孔吸附树脂有机残留物检测方法研究[J].药物分析杂志，2006，26（4）：438－441.

[6]王巧晗，杨小林，萧伟.木通皂苷D原料中有机溶剂残留量及大孔吸附树脂有机残留物的测定[J].中国中药杂志，2015，40（10）：1960－1964.

[7]杨培民，曹广尚.基于顶空气相气相色谱法测定的重楼总皂苷中有机溶剂残留质量控制研究[J].中华中医药学刊，2014，32（12）：2823－2825.

[8]王金钱，王焱，章军.固体树脂顶空进样GC法检测D－101系列大孔吸附树脂中3种低沸点有机溶剂残留量[J].中国试验方剂学杂志，2013，19（4）：71－74.

[9]石云峰，金樟照.顶空气相色谱法测定中药提取物的有机溶剂残留量[J].中国药业，2007，16（19）：12－13.

[10]郝彧，刘虹，吴帅.顶空气相色谱法测定糖脂清片中大孔吸附树脂有机残留物[J].中成药，2009，31（9）：1405－ 1408.

[11]王野，杨蕾，袁军，等.顶空气相色谱法测定三七三醇皂苷中因大孔吸附树脂带入的有机残留物[J].药物分析杂志，2009，26（3）：396－398.

[12]蔡振华，金松子，蒋庆峰.顶空气相色谱法测定黄芪提取物中大孔吸附树脂有机溶剂残留[J].现代仪器与医疗，2016，22（1）：81－84.

[13]周福军，刘振国，单淇.顶空气相色谱法测定阿可拉定（IC162）中大孔树脂有机溶剂残留物[J].药物评价研究，2010，33（6）：424－427.

[14]许勇，郏征伟，钱大公.顶空气相色谱法测定灯盏花素提取物中大孔树脂有机溶剂残留物[J].中成药，2011，33（8）：1351－1355.

[15]李杰滨，谭秀敏，梁云霞.大孔吸附树脂在药物分离提取方面的应用[J].中国药业，2002，11（12）：41－42.

[16]张在娟，逯荻，崔丽霞.顶空进样气相色谱法测定脑脉通胶囊中有机溶剂残留量[J].天津中医药，2011，28（6）：506－509.

Determ ination of Residual Organic Solvents in Xuesaitong Dispersible Tablets by Headspace Gas Chrom atography

Li Pei,Dong Qing
(Liaocheng Food and Drug Inspection and Testing Center,Liaocheng,Shandong,China 252000)

Objective To establish the headspace gas chromatography method for determination of six residual organic solvent in Xuesaitong Dispersible Tablets.M ethods The chromatographic column adopted HP－INNOWAX capillary column with polyethylene glycol as stationary phase(30 m×0.32 mm,0.25μm),and the FID was used.The column temperature was programmed by heating:the initial temperature was 60℃,keep for 1 min,then the temperature was increased to 100℃at 5℃/min,keep for 13 min,and then increase to 200℃at 20℃/min,keep for 2 min.The inlet temperature was 240℃,the detector temperature was 300℃,the carrier gas was nitrogen,the flow rate was 2.5 m L/min.Headspace sampling was adopted,headspace equilibrium temperature was 70℃,and equilibrium time was 30 min.Resu lts The concentration linear range of hexane,toluene,p－xylene,o－xylene,styrene,1,2－diethylbenzene were 1.014－16.224,1.060－16.960,1.610－18.576,1.169－18.704,0.985－15.760,1.129－18.064 g/mL,respectively,and the relative conditions of r were 0.999 6,0.999 9,0.999 9,0.999 6,0.999 4,0.999 2,respectively.The recovery rates were 97.14%－98.73% (n＝9).The theoretical plates were larger than 10 000,and the separation degree of adjacent peaks was above 2.0.Conclusion The method has simple sample processing,accurate detection,high sensitivity and good reproducibility,and excludes the interference of excipients,which can be used as an investigation method for the determination of residual organic solvents in Xuesaitong Dispersible Tablets.

headspace;gas chromatography;Xuesaitong Dispersible Tablets;residue organic solvent

R965.3

A

1006－4931(2017)09－0029－04

2017－01－01)

10.3969/j.issn.1006－4931.2017.09.009

李培，女，大学本科，主管药师，主要从事药品检验工作，（电话）0635－8535528（电子信箱）lipei.5924277＠163.com。