干扰Mi 6基因表达对非小细胞肺癌EGFR信号通路的影响

郑亮，刘爽，亓倩，周玉法

(莱芜市人民医院 呼吸内科，山东 莱芜 271100)

·论 著·

郑亮，刘爽，亓倩，周玉法

(莱芜市人民医院 呼吸内科，山东 莱芜 271100)

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.2 实验仪器

7900HT实时定量PCR仪购自Applied Biosystems公司，PVDF膜购自武汉博士德生物工程有限公司，ECL化学发光底物购自上海伟进生物科技有限公司，凝胶成像分析仪购自美国UVP公司，Transwell细胞培养小室购自美国康宁公司。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养 A549、H1650细胞株在含有10%胎牛血清、100 IU·ml-1青霉素、100 μg·ml-1链霉素的RPMI 1640培养基中在37 ℃、5%CO2条件下培养，每隔2 d更换1次培养液，0.25%胰蛋白酶进行传代。

1.3.4 细胞侵袭能力检测 选择24孔Transwell小室，在上室中均匀铺满20 μl Matrigel。将转染的细胞用不含血清的培养基重悬，调整密度为5×106个·ml-1。上室加入100 μl细胞悬液，下室加入500 μl含有10%胎牛血清的培养基，于37 ℃、5%CO2条件下孵育24 h；将上室内培养基完全吸净，PBS冲洗3次，再用医用棉签将表面的细胞轻轻擦去。4%多聚甲醛固定20 min，苏木素复染，室温下干燥过夜，再将微孔膜置于载玻片上，镜下观察。随机选择10个高倍视野，取平均值，每组实验重复3次。

表1 基因引物序列

基因引物序列(5′～3′)Mig⁃6上游：TAGGAAGAGGAGTGGCGTGAA下游：TGCTTCTAAACACAACATTTAAGEGFR上游：AATTCAGGGTGACGAAGTGGT下游：GGAAGAGCAGAGCCAGAATTGERK上游：TGTGGGTCATCCTTTACTCTCCT下游：GAATGAATTGGAAATGGAAAAGGTAKT上游：GTGGGTGTCTGCCTACCTGAT下游：CTCCCAAACCTTCCACTGAGAβ⁃肌动蛋白上游：TGAGTGCCTAGCAGCAGTGAC下游：TGCATGGTGTCACAAAATTCAT

1.4 统计学处理

2 结 果

2.2 细胞增殖能力检测结果

图2 siRNA干扰后A549、H1650细胞增殖情况

2.3 细胞侵袭能力检测结果

3 讨 论

图3 siRNA干扰后A549、H1650细胞增殖情况

(RespiratoryDepartment,LaiwuCityPeople’sHospital，Laiwu271100，China)

R734.2； Q786

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