糖皮质激素受体基因多态性与支气管哮喘疾病的关系研究

刘蓓蕾 张少勇 陈玉华

糖皮质激素受体基因多态性与支气管哮喘疾病的关系研究

刘蓓蕾 张少勇 陈玉华

目的 探析糖皮质激素(GC)受体(GR)基因多态性与支气管哮喘疾病的关系。方法 选择30例哮喘患者作为观察组,另选30例门诊体检的健康人士作为对照组,均进行糖皮质激素受体基因bcl-I单核苷酸多态性检测,测定两组研究对象的血浆皮质醇(Cor)浓度。结果 哮喘患者bcl-I基因共有CC纯合、CG杂合与GG纯合3种基因型,观察组GG基因型频率为20.0%,明显高于对照组的3.3%,差异具有统计学意义(P<0.05)；观察组G等位基因频率为36.7%,明显高于对照组的16.7%,差异具有统计学意义(P<0.05),提示G等位基因与哮喘发生存在相关性。两组不同基因血浆皮质醇浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)；30例哮喘患者中,21例患者进行了激素抵抗测试,共有11例存在激素抵抗(不敏感组),不敏感组患者平均皮质醇浓度与敏感组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 激素抵抗与血浆皮质醇浓度不存在相关性,GR基因bcl-I单核苷酸多态性为造成患者激素抵抗的重要因素,等位基因G可能为哮喘患者激素抵抗的易感基因。

糖皮质激素受体基因多态性；支气管哮喘疾病；关系

支气管哮喘是人在儿童时期很容易诱发的一种疾病,该病主要由肥大细胞、中性粒细胞及T细胞等多种细胞、细胞组参与,属于气道慢性炎症性疾病之一,糖皮质激素是目前临床上治疗该病的一种主要药物,应用该药治疗支气管哮喘疾病,有助于改善患者咳嗽、喘息及咳痰等一系列症状,进而提高患者的生活质量。但是相关报道称［1］,一些患者长期使用激素其效果并不理想,这些患者被称之为激素抵抗型哮喘,糖皮质激素发挥效应需要受体进行介导,本次研究着重探析糖皮质激素受体基因多态性与支气管哮喘的关系,现在进行如下分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院2016年1月～2017年1月收治的30例哮喘患者作为观察组,患者均经中华医学会1997年哮喘防治指南标准诊断,其中男18例、女12例,年龄6～54岁,平均年龄(29.4±11.5)岁。另选30例门诊体检的健康人士作为对照组,对照组研究对象外周血标本采自无哮喘、过敏性疾病,其中男17例、女13例,年龄6～55岁,平均年龄(28.5±12.7)岁。两组研究对象性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法 经患者及家属同意口服强的松1 mg/kg,连续服用7 d,治疗前后进行肺功能检测,第一秒用力呼气容积(FEV1)改善未达到15%为激素抵抗哮喘患者。参照《分子克隆实验指南》方法与步骤进行全血基因组DNA提取。扩增条件：在0.5 ml灭菌离心管中混合各成分(缓冲液、聚合酶及基因组DNA等)混合后离心15 s,加入液体石蜡油覆盖。扩增过程：在聚合酶链锁反应(PCR)扩增仪中盛装反应液,按照相应条件进行扩增(预变性94℃5 min,变形94℃1 min,退火58℃1.5 min,延伸72℃1.5 min,一直到循环35个、75℃延伸10 min之后完成)。取所有PCR扩增产物与上样缓冲液混合均匀,加入1%琼脂糖凝胶,300 nm紫外灯下切下目的片段,并装入洁净1.5 ml离心管中称重,按照试剂盒说明进行回收目的片段纯化。利用放射免疫法进行血浆皮质醇浓度测定,分离之后按照人血浆皮质醇浓度试剂盒要求测定血浆的皮质醇浓度。

1.3 观察指标 观察比较两组的基因型频率与等位基因频率、多态性分布与血浆皮质醇浓度,并分析激素敏感型与皮质醇浓度的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用t检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

PCR扩增分析证实,哮喘患者bcl-I基因共有3种基因型,分别为CC纯合型、CG杂合型与GG纯合型。观察组GG基因型频率为20.0%,明显高于对照组的3.3%,差异具有统计学意义(P<0.05)；观察组G等位基因频率为36.7%,明显高于对照组的16.7%,差异具有统计学意义(P<0.05),提示G等位基因与哮喘发生存在相关性。两组不同基因血浆皮质醇浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)；30例哮喘患者中,21例患者进行了激素抵抗测试,共有11例存在激素抵抗(不敏感组),不敏感组患者平均皮质醇浓度与敏感组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1,表2,表3。

表1 两组基因型频率与等位基因频率比较［n(%)］

表2 两组多态性分布与血浆皮质醇浓度比较(±s,ng/ml)

表2 两组多态性分布与血浆皮质醇浓度比较(±s,ng/ml)

注：与对照组比较,aP>0.05

基因分型 组别 例数 皮质醇浓度CC 观察组 14 119.59±44.7a对照组 21 103.38±47.2 GG 观察组 6 130.98±26.40a对照组 1 150.26±32.98 CG 观察组 10 124.77±42.58a对照组 8 123.90±38.20平均值 观察组 30 123.73±40.39a对照组 30 109.34±46.18

表3 激素敏感型与皮质醇浓度的关系

3 讨论

遗传、环境等因子都影响着哮喘的发生、发展,支气管哮喘的本质是一种呼吸道炎症性疾病,目前糖皮质激素是治疗该病最为有效的药物之一,这种药物通过与受体的结合达到抑制多种炎性细胞、因子活化作用,从而减少血管渗透性,使呼吸道高反应性得到降低［2-4］。近年来临床上发现部分患者对激素治疗的敏感型比较低,这部分患者被称之为激素抵抗型哮喘,激素抵抗是一个非常复杂的问题,其发病机制目前尚未明确,可能与遗传、患者体内炎症状态、GR亲和力异常等因素相关［5-7］。

Bcl-I位于GR基因内含子2下游,等位基因C的突变频率较高,相关研究报道GR基因内含子中存在限制性片段长度多态性,共由一个4.5 kb大片段与2.3 kb小片段组成,后来一些有关该变异在肥胖症中的应用陆续出现［3,8-10］,其单核苷酸多态性为CG突变,在外显子2下游646核苷酸的位置,形成了3.9 kb余2.2 kb的片段,C碱基出现的频率最高,被认为野生碱基［4,11-13］。本次研究的30例哮喘患者中,21例患者进行了激素抵抗测试,共有11例存在激素抵抗,通过GR基因bcl-I单核苷酸多态性分析发现,这些患者中共有2例为CC型,其余患者均为含G等位基因的GG基因型、CG基因型,激素抵抗患者平均皮质醇浓度增高不显著,可见G为等位基因C突变,随之GR结构与功能出现改变,糖皮质激素与其结合的药理作用降低,进而出现了激素抵抗现象。

本次研究共测定了30例哮喘患者与30例健康人士的血浆皮质醇浓度,通过对比实验发现,组间不同基因血浆皮质醇浓度比较差异无统计学意义(P>0.05),可见患者内源性皮质激素分泌与各项代谢功能均正常,并且未出现皮质激素吸收障碍、清除加快及代谢加速等表现,表明哮喘激素抵抗和血浆皮质醇不存在相关性,初步认定GR基因bcl-I单核苷酸多态性为造成患者激素抵抗的重要因素,同时等位基因G可能为哮喘患者激素抵抗的易感基因。

参考文献

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.06.033

2017-02-16］

518000 深圳市坪山新区人民医院