液相色谱—串联质谱法测定玛咖压片糖果中西地那非含量

鲁 刚， 宗万里

(威海市食品药品检验检测中心， 山东 威海 264209)



液相色谱—串联质谱法测定玛咖压片糖果中西地那非含量

鲁 刚， 宗万里

(威海市食品药品检验检测中心， 山东 威海 264209)

建立了玛咖压片糖果中西地那非含量的液相色谱串联质谱测定方法.样品经过提取后，处理溶液直接注入液相色谱串联质谱仪中进行检测，利用ESI源(正离子模式)，C18液相色谱柱，以及SRM方法对样品中的西地那非进行测定.测定结果的相对标准偏差小于8%(n=6),平均回收率均大于80%,线性范围为2～20 ng/mL,定量限为3.0 μg/kg.

液相色谱—串联质谱；玛咖压片糖果；西地那非

0 引 言

西地那非为1998年上市的首种口服抗阳萎药，其通过抑制磷酸二酯酶的水解活性来提高环磷酸鸟苷水平，而不影响环磷酸腺苷，从而增加性刺激引起的一氧化氮合成酶/环磷酸鸟苷瀑布作用，使海绵体平滑肌松弛，达到治疗勃起功能障碍的目的[1].但西地那非的副反应包括严重心脏事件，如心肌梗死、突然心脏病死亡、室性心律失常，以及异常勃起、视力降低、眼内压升高和斑点性水肿等状况.按照《食品安全法》第38条规定，生产经营的食品中不得添加药品，西地那非为处方药，在食品或保健食品等特殊食品中添加属于违法行为[2].目前，检测保健食品中西地那非含量的方法主要有液相色谱法[3-4]与液相色谱—质谱联用法[5-6].在此基础上，本研究建立了一种利用液相色谱—串联质谱法对玛咖压片糖果中的西地那非含量的检测方法.该方法在满足实验要求的同时，简化了样品前处理流程，节省了检测时间，适用于在时间限制要求较高的情况下，实验室大批量样品的检测.

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

实验所用仪器包括：高效液相色谱—质谱联用仪，液相部分为赛默飞公司Ultimate 3000型(二元高压梯度)，质谱部分为赛默飞公司TSQ QUANTUM ULTRA型三重四极杆质谱检测器(配电喷雾离子源ESI)；液相色谱柱(2.1×100 mm,3 μm),Hypersil Gold型，反相C18(赛默飞公司)；0.22 μm有机相针式滤头(艾杰尔公司);MS3 Digital型漩涡振荡器、A11型研磨机(IKA公司);Neofuge 23R型高速冷冻离心机(上海力申科学仪器有限公司)；JY10002型电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司).

实验所用试剂包括：甲醇，色谱纯，TEDIA公司；乙腈，色谱纯，默克公司；甲酸，≥98%，Sigma-Aldrich公司；西地那非标准物质，0.1 g/瓶，99.9%,中国食品药品检定研究院.

1.2 实验条件

1.2.1 液相色谱条件.

实验的液相色谱条件为：柱温箱温度为35 ℃，流动相梯度洗脱条件如表1所示.

表1 流动相梯度洗脱条件表

1.2.2 质谱参考条件.

实验的质谱参考条件为：电离方式为电喷雾电离，正离子扫描模式；喷雾电压为3.5 kV(正模式)，蒸发器温度为常温，鞘气(N2)压力为35 Arb；辅助气(N2)流量为10 Arb；碰撞气(Ar)压力为1.5 m Torr；离子传输毛细管温度为350 ℃；扫描方式为选择反应监测(SRM)；质谱divert valve状态：5～12 min处于LoadDetector状态，其余时间处于InjectWaste状态.

1.3 标准溶液的制备

准确称取10 mg的西地那非标准品至小烧杯中，用少量甲醇溶解后转移至50 mL容量瓶中，用甲醇定容，制得浓度为0.2 mg/mL的西地那非标准溶液.再从0.2 mg/mL的西地那非标准溶液中吸取0.25 mL加入到50 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度制得1.0 μg/mL的西地那非标准溶液.

分别从1.0 μg/mL的标准溶液中吸取30 μL、60 μL、120 μL、150 μL、300 μL加入到5个不同的含有3.00 g经过研磨的西地那非空白的玛咖压片糖果样品的刻度离心管中，然后在每个刻度离心管中分别加入3 mL水浸润，再加甲醇至15 mL,涡旋混合器提取1 min，经高速离心机以8 000 r/min离心5 min，制得浓度分别为2、4、8、10.0、20.0 ng/mL的含有西地那非的标准溶液.每个浓度取10 μL注入液相色谱—三重四极杆串联质谱联用仪进行分析检测,并用外标法绘制出标准曲线.

1.4 样品前处理

称取3.00 g(精确至0.01 g)经过研磨机研碎的样品于50 mL刻度离心管中,加入3 mL水浸润，再加甲醇至15 mL, 涡旋混合器提取1 min，经高速离心机以8 000 r/min离心5 min,取清液用0.22 μm的针头滤膜过滤后注入液相色谱—串联质谱联用仪进行分析.

2 结果与讨论

2.1 样品前处理

因西地那非能够溶解在甲醇中，故本研究使用甲醇对样品中的西地那非进行提取，经过高速离心机离心后，可得到澄清的上层溶液，该上层溶液能够较为容易地通过0.22 μm的有机滤膜.

2.2 色谱及质谱条件

本研究采用反相色谱柱C18(100 mm×2.1 mm,3 μm),在梯度洗脱的条件下对西地那非进行洗脱.结果显示，西地那非在C18柱上可较好地保留，且保留时间适中.在质谱部分，利用质谱检测器自身的优化功能，自动优化出西地那非的3个丰度最强的子离子及其碰撞能量，选择其中1个丰度最强的子离子设为定量离子，其余2个离子设为定性参考离子.优化出的离子对与碰撞能量如表2所示.

表2 西地那非的离子碎片与碰撞能量

2.3 色谱图

按照“1.2”项下色谱及质谱条件进行分析,得到西地那非标准品在SRM方式下的总离子流图，空白样品的总离子流图及加标空白样品的总离子流图，具体如图1～图3所示.

图1 标准样品在SRM方式下的总离子流图

图2 空白样品在SRM方式下的TIC色谱图

图3 加标空白样品在SRM方式下的TIC色谱图

2.4 标准曲线和最低检出限

在实验条件下，以标准物峰面积Y为纵坐标，质量浓度X(μg·mL-1)为横坐标绘制标准曲线，得线性方程(见图4).以基线噪声10倍峰面积对应的质量浓度为定量限(S/N=10)[7]，其回归方程、相关系数及检出限如表3所示.

图4 标准曲线

2.5 精密度和加标回收实验

取不含西地那非的玛咖压片糖果空白样品进行加标回收实验.分别向5 g不同样品中添加1 μg/mL西地那非标准溶液75、150、300 μL，即样品中西地那非含量分别为25、50、100 μg/kg.按上述样品处理方法对加标样品进行处理，每个水平做6次平行，按上述的色谱及质谱条件进行测定，其精密度与回收率计算结果如表4所示.

表4 样品添加回收和精密度实验(n=6)

3 结 论

本研究通过实验建立了玛咖压片糖果中西地那非含量的液相色谱—串联质谱检测方法：样品提取后注入液相色谱—串联质谱仪进行检测，通过样品空白基质加标绘制标准曲线的方法对回收率以及在电喷雾离子源上对可能产生的样品基质效应进行消除；同时，通过质谱仪自带的分流阀，在适当的时间段分流流动相以降低对离子源及质谱内部的污染.本方法样品前处理简单，测试结果稳定性较好且准确度较高.

[1]白忠宏.安特尔联合万艾可治疗糖尿病性勃起功能障碍的效果观察[J].中国医药指南,2013,11(35)：500-501.

[2]警惕非法添加的“西地那非”[J].食品与生活,2016,38(6)：19-20.

[3]沈志武,唐宏兵,李群,等.高效液相色谱法测定保健食品中他达拉非、西地那非、伐地那非违禁药物含量[J].理化检验(化学分册),2008,44(6)：540-542.

[4]鲁琳,高燕红,李少霞,等.高效液相色谱—二极管阵列检测法测定保健食品中枸橼酸西地那非的研究[J].中国卫生检验杂志,2005,15(9)：1052-1054.

[5]陈波,朱小兰,姚守拙,等.高效液相色谱/质谱联用测定保健食品中的西地那非和西力士[J].中国食品卫生杂志,2004,16(2)：121-124.

[6]王一红,冯家力,潘振球,等.液相色谱—质谱—质谱方法同时测定抗疲劳保健食品中伐地那非、西地那非、他达那非[J].中华预防医学杂志，2009,43(8)：727-729.

[7]中华人民共和国卫生部，中国国家标准化管理委员会.食品卫生检验方法：GB/T5009.1-2003[S].北京:中国标准出版社,2003.

Determination of Sildenafil Content in Maca Tabletting Candy by LC-MS/MS

LUGang，ZONGWanli

(Weihai Inspection and Testing Center for Food and Drug, Weihai 264209, China)

The method for the determination of Sildenafil content in maca tabletting candy by liquid chromatography-Tandem mass spectrometry(LC-MS/MS) was established.The sample was injected into LC-MS/MS for a test after being extracted.Sildenafil of the sample was determined by ESI source under positive and negative ion mode,C18liquid column and SRM method.The RSD of the method was less than 8%,the average recovery was more than 80%,the liner range was in 2～20 ng/mL and the limit of quantitation of Sildenafil was 3.0 μg/kg.

LC-MS/MS;maca tabletting candy;Sildenafil

1004-5422(2017)02-0138-03

2017-05-02.

鲁 刚(1977 — )， 男， 高级工程师， 从事食品安全检测技术研究.

R284.1；O657.63

A