急性胰腺炎大鼠胰腺细胞骨架F-actin与再生因子RegI相关性研究①

崔 莹，田 桦，程 开，迟男男，张雪梅，卓 越

(佳木斯大学附属第一医院， 黑龙江 佳木斯 154003)

急性胰腺炎大鼠胰腺细胞骨架F-actin与再生因子RegI相关性研究①

崔 莹，田 桦，程 开，迟男男，张雪梅，卓 越

(佳木斯大学附属第一医院， 黑龙江 佳木斯 154003)

目的：研究L-精氨酸诱导大鼠急性胰腺炎胰腺细胞骨架F-actin与再生因子RegI的水平变化情况及相关性。方法：将SD大鼠随机分为空白组、对照组、模型组，通过腹腔注射L-精氨酸诱导急性胰腺炎模型后将两组分别选取12h、24h、48h、72h时间点观察胰腺大体病理变化，通过westernblot检测各组F-actin与RegI的含量。结果：western-blotting检测模型组F-actin相对表达量与空白组、对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)，模型组RegI相对表达量较空白组、对照组明显升高，且差异有统计学意义(P<0.05)。结论：腹腔注射L-精氨酸诱导的急性胰腺炎胰腺细胞骨架F-actin与再生因子RegI可能呈负相关。

胰腺炎；细胞骨架；F-actin；RegI蛋白

急性胰腺炎(AP)是以胰腺局部炎症反应为主要特征的疾病，细胞骨架对于维持细胞的形态有一定作用，同时在细胞内运输和细胞器移动间起着交通作用，并在细胞有丝分裂中起着重要作用。急性胰腺炎时胰腺腺泡细胞骨架发生变化，F-actin(纤维状肌动蛋白)出现解聚，含量降低。本实验检测F-actin与再生因子RegI(胰岛再生源蛋白)各时间段的含量变化，从而探讨二者的相关性以及急性胰腺炎组织坏死后再生蛋白RegI对胰腺的保护与修复作用。

1 材料与方法[1,2]

1.1 主要动物及材料

雄性SD大鼠(n=45), 体重250～300g(由佳木斯大学实验动物中心提供)。L-精氨酸(上海翊圣公司)，RegIβ抗体(博奥森生物公司)，F-actin抗体(美国abcam公司)，β-actin抗体(三鹰生物有限公司)，二抗(博奥森公司)等。

1.2 实验方法

随机分为A组(AP模型组)、B组(对照组)、C组(空白组)，前两组再按12h、24h、48h、72h(每个时点n=5)分组。实验前各组动物禁食12h，不禁水。A组腹腔注射20%L-精氨酸(200mg/100g3次，每隔1h)，B组腹腔注射同体积的生理盐水，C组不予处理。按实验设计分别于各时间点处死大鼠，取胰腺分为固定和冻存用。常规脱水、透明、包埋、切片(3μm)，苏木精-伊红染色(HE染色)；Western-blotting检测F-actin和RegI表达量，应用全自动化学发光图像分析系统进行曝光并对其灰度值分析。

1.3 统计学方法

采用SPSS20软件对数据进行统计，用Pearson积差相关分析法分析F-actin和RegI的相关性，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 根据Nakamura[3]等标准从水肿、炎细胞浸润、坏死进行病理组织评分，各组胰腺织病理评分见表1。

表1 大鼠胰腺病理评分±s，分)

注:P<0.05

2.2western-blotting检测结果显示：AP模型组F-actin蛋白表达量较空白组、对照组减少；AP模型组RegI蛋白表达量与空白组、对照组相比明显增多。见表2。

表2 胰腺组织F-actin和RegI western blot图像净光密度比值

注:P<0.05

3 讨论

细胞骨架微丝结构是F-actin与G-actin之间维持着聚合和解聚的动态平衡，大量的F-actin趋向于胞周分布,形成F-actin环，从而维持着细胞的形态与功能。有文献表明[4]，F-actin与细胞周期进入分裂末期的胞质分裂有密切关联。细胞骨架的改变可致细胞迁移及黏附力降低，同时也降低细胞增殖能力。当胰腺受损时，胰酶原颗粒提前释放胰酶并激活，细胞骨架微丝出现结构紊乱，F-actin含量减少，导致腺泡细胞分泌胰酶受阻，加重自身消化[5]。Reg是胰腺炎时胰腺组织中提取出的一组蛋白，当胰腺损伤时腺泡细胞分泌大量Reg，故该蛋白表达呈升高趋势，RegI在48h虽有下降，但仍呈现较高水平，因此被称为应激蛋白，对保护、修复胰腺有重要作用。R.Graf,Ph.D[6]使用雨蛙素诱导急性胰腺炎，发现胰腺组织中RegI明显表达，并在48h达高峰，说明RegI对胰腺具有保护、修复作用，并促进导管和β胰岛细胞有丝分裂；但在Bimmler[7]的实验则证明轻度、中度急性胰腺炎可见RegI表达明显升高，而在重度急性胰腺炎则出现低表达情况，说明在胰腺受到轻、中度损害的前提下，RegI出现明显高表达。本实验F-actin在胰腺受损时逐渐下降，RegI在胰腺炎发展时逐渐升高，于24h后两者呈相反趋势，RegI在一定水平刺激F-actin增多,从而稳定细胞达到再生修复的作用。RegI蛋白与F-actin具体相互作用机制及信号传导途径尚不十分清楚，具体机制有待进一步研究。

[1]张舒扬，艾迎春.急性胰腺炎大鼠血清NGAL变化及意义[J].黑龙江医药科学,2015,38(2):61-63

[2]李思，王歆，沈德凤.速胰康片剂对急性胰腺炎小鼠血清白细胞介素-6的影响[J].黑龙江医药科学,2015,38(1):47-50

[3]NakamuraH,TashiroM,AsaumiH,etal.IncreasedexpressionofSmad6deterioratesmurineacuteexperimentalpancreatitisintwomodels[J] .Gut, 2008, 57(6):788-798

[4]ShihJY,LeeYC,YangSC,etal.Collapsinresponsemediatorprotein-1:anovelinvasion-suppressorgene[J].ClinExpMetastasis,2003, 20:69-76

[5]黄刚,汤为学,陶小红.生长抑素对大鼠胰腺腺泡细胞内骨架蛋白F-actin分布和细胞外分泌功能的影响[J].第三军医大学学报,2010,32(7):672-676

[6]GrafR,SchinesserM,LussiA,etal.Coordinateregulationofsecretorystressproteins(PSP/regandPAPIPAPII&Ⅲ)intheratexocrinepancreasduringexperimentalacutepancreatitis[J].SurgRes,2002,105:136-144

[7]BimmlerD,SchiesserM,PerrenA,etal.CoordinateregulationofPSP/regandPAPisoformsasafamilyofsecretorystressproteinsinananimalmodelofchronicpancreatitis[J].JSurgRes,2004,118:122-135

Correlation between cytoskeleton F-actin and regenerative factor RegI in acute pancreatitis ratsL

CUIYing,TIANHua,CHENGKai,CHINan-nan,ZHANGXue-mei,ZHUOYue

(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003，China)

Objective: To investigate the changes and correlation of cytoskeleton F-actin and regenerative factor RegI in pancreas tissue of rats with acute pancreatitis induced by L-arginine. Methods: SD rats (n=45)were randomly divided into blank group, control group and model group. Acute pancreatitis was induced by intraperitoneal injection of L-arginine, then the rats were sacrificed at 12h, 24h, 48h and 72h. The levels of F-actin and RegI were detected by western blot. Results: The relative expression of F-actin in model group was significantly lower than those in blank group and control group (P<0.05),andtherelativeexpressionofRegIinmodelgroupwassignificantlyhigherthanthoseinblankgroupandcontrolgroup(P<0.05). Conclusion: Cytoskeleton F-actin may be negatively correlated with RegI in acute pancreatitis induced by intraperitoneal injection of L-arginine.

pancreatitis；cytoskeleton；F-actin；RegI

1. 黑龙江省自然基金面上项目, 编号：H2015072；2. 佳木斯大学研究生创新项目,编号：YM2016_021；3. 佳木斯大学校管项目,编号:S2009-060；S2011-038。

崔莹(1987～)女，内蒙古呼伦贝尔人，在读硕士研究生。

卓越(1964～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，教授，硕士研究生导师。E-mail：zhuoyuejmsu@126.com。

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A

1008-0104(2017)03-0028-02

2017-03-03)