不同类型婴儿湿疹皮损处微生物菌群检出情况分析

宋志琴 ，卢致民，张琼方，冯冬梅，吴远慧，周向昭

(1.河北北方学院，河北 张家口 075000;2.河北北方学院附属第一医院皮肤科，河北 张家口 075000)

不同类型婴儿湿疹皮损处微生物菌群检出情况分析

宋志琴1，卢致民1，张琼方1，冯冬梅2，吴远慧2，周向昭2

(1.河北北方学院，河北 张家口 075000;2.河北北方学院附属第一医院皮肤科，河北 张家口 075000)

目的 检测不同类型婴儿湿疹(infantile eczema,IE)皮损处微生物菌群，分析其致病相关性。方法 取IE患儿皮损、非皮损处及健康婴儿皮肤表面分泌物或皮屑行微生物培养及鉴定，对比分析不同类型IE患儿皮损处微生物检出类别的差异。结果 IE患儿皮损处金黄色葡萄球菌(SA)、糠秕孢子菌(MF)、链球菌(SP)检出率均明显高于非皮损及健康婴儿(P<0.05)，三者间表皮葡萄球菌(SE)检出率差异无统计学差异。不同类型IE患儿皮损处微生物检出种类差异明显，其中渗出型湿疹患儿皮损处SA检出率最高，明显高于脂溢型及干燥型湿疹(P<0.05)；脂溢型及干燥型湿疹患儿皮损处MF检出率均明显高于渗出型湿疹(P<0.05)，但前两者间差异无显著性(P>0.05)。结论 微生物感染或定植与IE发病密切相关，且不同类型IE皮损处微生物类型存在一定差异。

婴儿湿疹；皮损；微生物

婴儿湿疹(infantile eczema, IE)是最常见也是最早发生在婴儿期的变态反应性疾病，近年来IE发生率有上升趋势[1]，常伴有瘙痒等不适，且与过敏性鼻炎、过敏性哮喘等其他过敏性疾病相关(即“过敏历程”)[2]。相关研究表明，IE的发病不仅与遗传、环境、免疫等有关，还与患儿皮肤表面的微生物感染或定植相关[3]。我们对468例IE患儿皮损、非皮损处及60例健康婴儿皮肤表面分别进行微生物培养、鉴定，旨在探讨婴儿湿疹与不同微生物之间的致病相关性，现报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

2014-08—2016-05月就诊于河北北方学院附属第一医院皮肤科门诊的468例IE患儿，诊断均符合《中国临床皮肤病学》相关标准[4]，均征得家属知情同意。其中男213例，女255例；年龄20 d～12个月；根据皮损特点，分为渗出型、脂溢型、干燥型3种[4,5]，其中以面颊、额部、头皮处为重的渗出型湿疹168例(男82例，女86例)，以眉区、头皮及耳后为重的脂溢型湿疹219例(男98例，女121例)，以四肢、躯干为重的干燥型湿疹81例(男33例，女48例)。60例健康婴儿均来自我院新生儿科或小儿科，其中男28例，女32例；年龄18 d～12个月。所有患儿及健康婴儿纳入研究前2周内均未接受局部或系统抗组胺、抗生素、抗真菌或激素类药物系统治疗，3 d内未洗浴，无明显发热、流脓等感染症状，未合并过敏性哮喘等其他过敏性疾病及器质性疾病，无过敏性家族史。

1.2 方法

1.2.1 细菌的鉴定

1.2.1.1 样本采集 患儿确诊为IE后，在实验室清洁区于患儿皮损最严重部位、非皮损部位(距离皮损处至少10 cm以外的正常部位皮肤或皮损的对称部位)分别采集样本。渗出型皮损用无菌棉拭子取分泌物，非渗出型皮损先用无菌生理盐水冲洗，随后以吸附无菌生理盐水的无菌棉拭子摩擦皮损3～5次，取样立即送检。健康婴儿取颜面部皮肤表面皮屑，操作同上。

1.2.1.2 细菌培养及鉴定 样本取材后首先行涂片镜检，随后用分区划线法将标本接种于麦康凯琼脂培养基及一次性血琼脂培养基(天津市金章科技发展有限公司)平板，置于35 ℃温箱中培养24 h，根据菌落形态与涂片镜检进行分离与纯化，随后采用Phoenix-100全自动细菌鉴定/药敏系统(美国BD)对标本进行培养及鉴定。操作过程严格按照《全国临床检验操作规程》以及Phoenix-100系统说明书进行：首先将鉴定管放在加样盘上，使用无菌棉签挑取经过夜培养的新鲜平板上的菌落至肉汤鉴定管，配制成0.5麦氏单位菌悬液，将其倒入检测板，密封条封好，输入并添加样本信息，按要求运行系统，等待细菌鉴定结果并打印记录。

1.2.2 真菌的鉴定

1.2.2.1 样本取材 采集标本前用75%乙醇清洁待检处皮肤，用火焰灭菌钝刀从皮损的边缘向外刮取皮屑或分泌物，立即进行真菌镜检及培养。若皮肤干燥且鳞屑较少，即采用黏着透明胶带黏着面紧压于皮损上，剥下后立即送检。

1.2.2.2 真菌镜检 将上述所取标本立即置于载玻片上，加一滴10%KOH液，微加温使角质溶解，加盖玻片后于暗视野显微镜下观察有无菌丝或孢子。用透明胶带取材时，先加一滴10%KOH液于载玻片上，再将黏有标本的胶带压于其上，于显微镜下观察并记录结果。

1.2.2.3 真菌培养 取材后立即于超净工作台将样本接种于含氯霉素及菜籽油的沙氏葡萄糖琼脂培养基(杭州天和微生物试剂有限公司)，并于(27±1) ℃恒温箱中培养，每3天观察一次，记录菌落生长情况，共观察15 d，然后根据菌落形态及显微镜下形态鉴别所属菌种，记录所得结果。操作过程避免污染，确保按照真菌培养规程进行。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件分析数据，采用卡方检验，检验水准α=0.05，多样本率两两间比较时检验水准α`=0.0125。

2 结 果

2.1 患儿皮损、非皮损处及健康婴儿皮肤微生物检测结果

IE患儿皮损处、非皮损处及健康婴儿皮肤表面金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，SA)、糠秕孢子菌(Malasseziafurfur，MF)检出率差异有统计学意义(χ2=58.55，P<0.05；χ2=55.74，P<0.05)；SA在皮损处检出率明显高于非皮损及健康婴儿皮肤(χ2=50.35，P<α`；χ2=55.74，P<α`)，后两者间差异不明显(χ2=1.06，P>0.0125)；MF在皮损处检出率亦明显高于非皮损及健康婴儿皮肤(χ2=48.18，P<α`；χ2=15.08，P<α`)，后两者间差异亦不明显(χ2=0.92，P>α`)。三者间表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermedis，SE)检出率差异无统计学意义(χ2=5.35，P>0.05)；链球菌(Streptococcusphages，SP)在皮损处检出率高于非皮损(χ2=22.16，P<0.05)，在健康婴儿皮肤表面无检出(见表1)。

表1 IE患儿皮损、非皮损处及健康婴儿皮肤微生物类型比较 n(%)

注：其他包括成团肠杆菌、粪肠球菌、犬小孢子菌等；合并菌种表示存在2种或2种以上微生物检出。

2.2 不同类型IE患儿皮损处微生物检出情况

三种类型IE患儿皮损处SE的检出率均较高且差异无统计学意义(χ2=5.78，P>0.05)，IE患儿皮损、非皮损处及健康婴儿皮肤SE的检出率差异也无统计学意义，可认为SE是一种皮肤正常寄生菌，因此在以下统计分析中将SE剔除。渗出型中，SA的检出率明显高于MF、SP及其他类型(χ2分别为41.76、46.56、73.76，P<α`)，且渗出型中SA的检出率也明显高于脂溢型和干燥型(χ2分别为36.12、47.49，P<α`)。脂溢型中MF检出率明显高于SA、SP及其他类型(χ2分别为23.24、105.78、85.48，P<α`)，且脂溢型中MF检出率也明显高于渗出型(χ2=28.84,P<α`)，但与干燥型差异无显著(χ2=0.56,P>α`)。类似于脂溢型，干燥型中MF检出率也是明显最高的(χ2分别为22.43、46.29、26.63，P<α`)。即渗出型IE皮损处微生物类型以SA为主，而脂溢型和干燥型则以MF为主(见表2)。

表2 不同类型IE患儿皮损处微生物类型比较 n(%)

3 讨 论

IE是婴儿期最常见的过敏性疾病，多发生于婴儿头面部，严重者可累及躯干及四肢。其病因及发病机制复杂，到目前为止尚无定论，多数学者认为是特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)的婴儿期表现[6]，《中国临床皮肤病学》中将其归于AD的范畴[4]。相关报道指出，微生物菌群，尤其是SA的感染或定植与湿疹的发生、发展有一定的相关性[7]。本研究中，468例IE患儿皮损、非皮损处及60例健康婴儿皮肤表面微生物检测对比分析发现，皮损处SA、MF、SP等微生物检出率明显高于非皮损处及健康婴儿，以SA、MF检出率最高，SE在三者间差异无统计学意义，与Hon KL[7]等的研究结果相似，提示SA、MF为最主要的致病菌，而SE作为皮肤正常寄生菌，对于IE的发生、发展影响不大。

IE的发生在一定程度上与皮肤屏障功能的减弱及抗菌肽的表达降低密切相关。研究表明，婴儿自出生后至少需12个月的时间皮肤屏障功能才能达到成人水平[8]；此外，由于不同部位皮肤表面pH值不同[9]，直接影响抗菌肽的表达，因此不同部位皮肤表面抗菌肽的浓度也会有一定差异，同时，不同pH值环境也适宜不同微生物生长[10]，均可进一步导致皮损、非皮损部位微生物定植或感染的种类及浓度的差异存在。同时，皮肤表面微生物失衡、有害微生物浓度增加并产生微生物超抗原类毒素及蛋白酶类又可进一步加重皮肤屏障功能的破坏，导致疾病迁延难愈[11]。本研究中，不同类型IE患儿皮损处微生物检测情况亦有一定差异，其中渗出型患儿皮损表面以SA为主，脂溢型及干燥型患儿皮损处以MF为主，表明不同类型湿疹患儿皮肤表面微生态(包括pH环境等)适宜于特定种类的微生物生存，同时，不同类型的微生物又可产生不同的超抗原类毒素，使机体产生不同的免疫反应，导致不同的皮损表现，于是出现不同的湿疹类型。本研究中，我们还观察到湿疹患儿皮损处存在约35.25%的2种及以上混合菌种检出，明显高于非皮损及健康婴儿，结合患儿病程及临床症状，考虑混合菌群感染或定植与病情严重程度有关，尚需进一步研究其相关性。

综上，以SA、MF为主的病源菌感染和定植是导致婴儿湿疹的病因之一，同时不同类型的婴儿湿疹皮损处存在不同类型的微生物，因此，要注意婴儿皮肤屏障功能及微生态平衡的防护。在治疗婴儿湿疹时，要根据不同类型及表现制定不同的治疗方案，在联合应用抗生素的同时，要兼顾MF的治疗。

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[责任编辑：李蓟龙 英文编辑：刘彦哲]

Detection of Microbial Flora in Different Types of Infantile Eczema

SONG Zhi-qin1,LU Zhi-min1,ZHANG Qiong-fang1,FENG Dong-mei2,WU Yuan-hui2,ZHOU Xiang-zhao2
(1.Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China;2.Department of Dermatology,The First Affiliated Hospital of Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China)

Objective To investigate the microflora in skin lesions of infants with different types of eczema(IE),and analyze the association between microflora and IE.Methods Microbial culture and identification of the skin surface secretions or dander from skin lesions,non skin lesions of IE children and healthy infants were conducted.The differences among microorganisms were detected in skin lesions of different types of IE. Results The isolation rates ofStaphylococcusaureus(SA),Malasseziafurfur(MF)andStreptococcusphages(SP)in skin lesions of IE were significantly higher than those in non-lesions of IE and skins of healthy infants(P<0.05),while no significant differences ofStaphylococcusepidermidis(SE)were found among them.There were significant differences in the detection of the skin lesions from different types of IE.The detection rate of SA in the lesions of children with exudative eczema was the highest,which was significantly higher than that of seborrheic eczema and dry eczema(P<0.05).The detection rate of MF in lesional skin of patients with seborrheic dermatitis and dry eczema was significantly higher than that of exudative eczema(P<0.05),but there was no significant difference between the former two groups(P>0.05).Conclusions The infection or colonization of microflorais closely related to IE,and there were some differences in microorganisms detected in skin lesions of different types of IE.

infantile eczema; skin lesion; microorganism

宋志琴(1990-)，女，湖北黄冈人，河北北方学院2014级硕士研究生，研究方向：变态反应性皮肤病。

周向昭(1965-)，男，主任医师，教授，硕士生导师，主要研究方向：变态反应性皮肤病。

R 758.23

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2017.04.008

来稿日期：2016-12-02