VEGF、P53的表达与食管癌临床特征及预后的关系

李铁志 石彦涛 高少林 郑兆伟 张合林

·论著·

VEGF、P53的表达与食管癌临床特征及预后的关系

李铁志 石彦涛 高少林 郑兆伟 张合林

目的 探讨食管癌中VEGF和P53的表达与食管癌临床特征的关系，分析其在食管癌患者淋巴结转移、预后中的作用。方法 选取胸外科诊治的54例食管癌患者以及同期40例健康人群作为研究对象，采用ELISA方法检测所选者P53蛋白、VEGF的表达情况并进行分析。结果 食管癌患者VEGF、P53的浓度明显高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；以年龄、性别及TNM分期等指标差异进行比较，VEGF、P53 蛋白在食管癌患者中的表达水平均无显著差异(P<0.05)；而患者有无淋巴结转移、5年生存率指标差异进行比较，VEGF、P53 蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)；通过随访后发现VEGF、P53表达阳性的食管癌患者其复发率明显高于阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VEGF、P53在食管癌患者中高表达，且与食管癌是否发生淋巴结转移有关，影响着患者的5年生存率，可作为食管癌的重要生物学指标为临床诊治食管癌提供参考。

食管癌；P53蛋白；血管内皮生长因子

食管癌是发生在食管黏膜上皮或者腺体的一种恶性肿瘤，其在国内外均有较高的发病率，在我国尤为高发，其病死率亦较高[1]。至今食管癌的发病原因、发病机制仍未明确，多数研究认为是多因素协同作用所致。随着分子生物学技术的不断发展，诸多细胞因子被发现在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用，人们在分子水平或是基因的水平对肿瘤的发生机制获得深层次的认识。这些肿瘤标志物对肿瘤的诊断、治疗以及评估预后等均具有重要指导意义[2]。血管内皮生长因子(VEGF)是血管内皮细胞特异性的生长因子，具有促进血管内皮细胞增殖，促进血管生成等功能，与肿瘤的生长、浸润以及转移密切相关。P53是一种抑癌基因，大量研究证实P53在肿瘤的发生发展中起着重要作用，并直接影响其生物学行为[3]。我们采用酶联免疫吸附法方法(ELISA)检测食管癌组织中 VEGF 和 P53的表达,探讨VEGF和P53蛋白表达与食管癌临床各参数之间的关系，探讨VEGF和P53在食管癌患者转移、预后中的作用，为食管癌的诊治提供参考，具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月至2015年1月我院胸外科诊治的食管癌患者54例作为研究对象，所选患者均经病理检查明确诊断，初治患者，Karnofsky功能状态评分(KPS)[4]≥70,可行手术或根治性放疗,行PET/CT检查，临床及随访资料完整，排除患者曾进行过新辅助治疗，局部复发患者或初次确诊时即有转移的患者，其中男34例，女20例；年龄42～78岁，平均(58.8±10.5)岁；体重(62.3±8.9)kg；身高(169.3±8.1)cm；TNM分期[5]：Ⅰ～Ⅱ期36例，Ⅱ～Ⅳ期18例；根据有无远处转移分为有淋巴结转移28例,无淋巴结转移26例。选取同期体检中心的健康人群40例作为健康对照组，男26例，女14例；年龄43～74岁，平均(58.3±10.2)岁；体重(62.1±8.3)kg；身高(168.9±7.8)cm。2组年龄、性别比等一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 实验试剂及设备:P53、VEGF ELISA检测试剂盒，购自美国USCNLIFE公司。96孔细胞培养板和 ELISA 板，Costar 公司；酶标仪，UV-250 型分光光度计，日本岛津公司；TG16W 高速离心机，长沙平凡仪器厂。

1.2.2 检测方法:收集所选对象空腹静脉血，于3 000 r/min离心10 min,分离出血清后，在-20℃冰箱保存备用。采用ELISA方法检测血清中的VEGF、P53浓度，具体操作步骤依据说明书。

2 结果

2.1 VEGF、P53在食管癌中的表达与临床特征之间的相关性 所选食管癌患者手术顺利出院，随访5年，记录5年生存率情况。食管癌患者VEGF的浓度明显高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；食管癌患者P53的浓度明显高于健康对照组，差异显著(P<0.05)。与临床特征之间的关系结果提示，以年龄、性别及TNM分期等指标差异进行比较，VEGF、P53 蛋白在食管癌患者中的表达水平均无显著差异(P>0.05)；而患者有无淋巴结转移、5年生存率指标进行比较，VEGF、P53 蛋白表达水平均有显著差异(P<0.05)。见表1、2。

组别VEGF(ng/L)P53(ρ·Pg-1·ml-1)食管癌组(n=54) 101.3±54.5190.15±44.56健康对照组(n=40)55.3±54.5*105.57±12.26*

注：与食管癌组比较，*P<0.05

表2 VEGF、P53在食管癌中的表达与临床特征的关系 ±s

2.2 P53蛋白与VEGF表达的相关性 VEGF表达与P53蛋白表达有较好的相关性。见表3。

表3 P53蛋白与 VEGF 表达的相关性 例

2.3 P53、VEGF表达与食管癌预后关系的随访结果 随访所选54例患者，记录患者复发例数，P53、VEGF阳性患者其复发率明显高于阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 P53、VEGF对食管癌复发率的影响

3 讨论

肿瘤细胞的无限生长，主要是新生血管的不断形成，输送细胞生长所需的营养，输出细胞代谢废物。人体正常组织中，新生血管形成有着严格的生理调控机制，但在肿瘤细胞中，患者的内环境发生变化，血管形成调控机制发生障碍，新生血管不断形成，无限增多。

3.1 VEGF与食管癌的相关性 VEGF是目前发现最强的促进血管生长的细胞因子。肿瘤的进展即肿瘤的生长，要有充足的营养供给，新生血管形成能为肿瘤细胞生长提供必需的氧气以及营养物质。当肿瘤逐渐生长，病灶逐渐变大，呈浸润性生长或者发生转移，经由微循环渗透所带来的营养不足以提供其生长所需养分，新生的血管即逐步形成。肿瘤新生血管形成主要依靠各种促血管形成因子的作用。VEGF促血管生成的机制可能为：VEGF能特异性地激活、诱导血管内皮细胞发生分裂，促进血管生成；VEGF增强血管通透性，使得血浆纤维蛋白渗出，形成纤维网络为血管内皮细胞的增殖、血管形成提供支架，利于毛细血管网以及肿瘤间质的形成[6]。

关于VEGF与食管癌的相关研究表明，VEGF在食管癌的发生、发展及转移的过程中，均起着重要的作用，作为最强的有道肿瘤血管生成的细胞因子，已经被作为判定食管癌预后的相关指标，并开展了诸多关于其靶向治疗的研究。诸多研究表明，VEGF在食管癌中的阳性率为23.9%～93.3%，大量文献均提示VEGF的表达与食管癌的侵袭性密切相关[7,8]。VEGF与食管癌的浸润深度、淋巴管侵犯、淋巴结转移呈明显相关性，能作为预测食管癌发生转移并评估预后的一个强有力的生物学指标[9]。

本文研究中食管癌患者中的VEGF表达量明显高于健康对照组，且在食管癌患者中，VEGF的表达与癌症是否发生转移密切相关，并影响着患者的5年生存情况。进一步证实了VEGF与食管癌的相关性，参与了食管癌的发生、发展过程，影响患者的生存质量。本研究结果支持上述观点，VEGF阳性患者其复发率显著高于阴性患者，VEGF加快了食管癌的进展。VEGF阳性患者术后是VEGF阴性患者肿瘤复发风险高3.316 倍，说明VEGF确实使促进血管生成的蛋白表达增多，促进肿瘤组织形成大量结构和功能异常的血管,促进了食管癌的发展。

3.2 P53与食管癌的相关性 P53基因是一种肿瘤抑制基因，具有特异性的转录激活作用，控制细胞周期的启动[10]。在人体内存在着野生型P53和突变型P53两种形式，野生型通过刺激抑制血管生成基因 Smad4 等的表达，抑制肿瘤生长，抑制细胞分裂和增殖。突变型则通过刺激VEGF等血管生长因子分泌增加，参与细胞生长，促进细胞发生恶化[11]。

关于P53基因的研究，既往多以恶性肿瘤细胞为研究对象，近年来逐渐关注于临床研究。在食管癌中P53被认为是分子水平的改变，提高了肿瘤的转移率，影响患者术后的生存期，一般突变型P53被看作是判定患者预后的独立危险因素。P53在健康人群中未有表达，而在食管癌患者中高表达，提示其可以鉴别食管癌的良恶性病变。有文献报道，P53的阳性率随着食管癌分化程度的增高而升高，且与是否发生淋巴结转移呈正相关性，高P53表达预示着淋巴结转移的潜在可能性[12]。由此可以为手术提供一个参考依据，当术中未见食管癌发生淋巴结转移，亦应扩大手术范围并行淋巴结清扫术。

本文研究中P53在食管癌患者中高表达，且与食管癌患者否发生转移及5年生存情况密切相关。对食管癌患者进行随访，发现P53阳性患者的复发率明显高于P53阴性患者。有研究P53对膀胱癌复发率的影响结果提示，P53阳性患者术后与P53阴性患者相比，肿瘤复发风险为2.913倍[13]。说明P53蛋白阳性者预后较差，P53蛋白表达可作为判断食管鳞癌患者预后的指标之一。

3.3 P53、VEGF在食管癌中的相关性 通过以上描述，可知VEGF、P53与食管癌均存在着相关性。VEGF与P53基因之间亦存在一定的相关性。本文研究结果提示VEGF 表达与 P53 蛋白表达有较好的相关性(r=0.42)，进一步证实二者之间的关系。考虑机制可能为P53基因可以刺激VEGF的过度分泌，VEGF的过度表达与抑癌基因失活、原癌基因激活有关[14]。野生型P53基因抑制VEGF表达，从而抑制肿瘤血管生成，突变型P53基因则促进VEGF表达，促进肿瘤血管生成。大量研究表明，P53对血管生长的作用主要包括：(1)下调栓桥蛋白的表达(TSP)，从而降低血管生长抑制；(2)增强蛋白激酶C(PKC)活性，促进VEGF的表达；(3)野生型P53基因可以通过调节VEGF启动子的四个SPI结合位点反向调节VEGF启动子，抑制VEGF的转录合成，突变型P53基因基因突变后失去调节VEGF启动子的作用，进而失去抑制VEGF转录的作用，失去了抑制肿瘤血管的形成作用[15]。

综上，P53、VEGF在食管癌中的阳性表达可能存在相关性，与食管癌血管生成密切相关。食管癌中较高的 VEGF、P53 蛋白表达是否发生淋巴结转移相关，将两者有机结合，可望提高对淋巴结转移诊断的准确率。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.12.021

项目来源：河北省医学科学研究重点课题(编号：20150229)

050000 石家庄市，河北医科大学第二医院

张合林，050000 石家庄市，河北医科大学第二医院；

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2016-12-12)