不同类型冠心病患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平变化

李安　何汉康　陈剑

【摘要】 目的：探讨冠心病患者外周血CD4+CD25+调节T细胞（Treg）水平的变化及意义。方法：选取笔者所在医院接诊冠心病患者108例，根据诊断结果分为36例稳定型心绞痛（SAP）组、38例急性心肌梗死（AMI）组、34例不稳定型心绞痛（UAP）组，另选取30例健康体检者作为对照组，分别行流式细胞仪测定外周血CD4+CD25+Treg水平与冠脉造影。结果：冠心病各组外周血CD4+CD25+Treg测定结果明显低于对照组，AMI组外周血CD4+CD25+Treg测定结果低于SAP组、UAP组，UAP组外周血CD4+CD25+Treg测定结果低于SAP组，差异均有统计学意义（P<0.05）；外周血CD4+CD25+Treg与冠脉狭窄病变支数呈负相关，与GENSINI积分呈负相关（P<0.01）。结论：不同冠心病患者外周血CD4+CD25+Treg水平有显著变化，且与冠心病病变程度呈负相关。

【关键词】 冠心病； CD4+CD25+调节T细胞； 相关性

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.12.030 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2017）12-0054-03

调节T细胞（Treg）是一组具有免疫抑制功能的T细胞亚群，CD4+CD25+Treg作为该家族中非常重要的成员，其主要来自胸腺中的幼稚T细胞。已有大量研究证实CD4+CD25+Treg与感染、肿瘤、过敏反应等多种疾病均直接相关[1]。目前，认为心血管发生、发展与免疫反应和炎症反应均直接相关，故推测冠心病可能与CD4+CD25+Treg水平变化存在相关性。鉴于此，本研究拟选取不同类型冠心病患者，对其CD4+CD25+Treg水平进行测定，旨在了解冠心病与CD4+CD25+Treg的关系，同时进一步明确冠心病的可能机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

自笔者所在医院2015年1月-2016年6月接诊的冠心病患者中选取108例作为研究对象，所有患者均根据世界卫生组织颁布的冠心病临床诊断标准确诊。其中36例为稳定型心绞痛（SAP）、38例为急性心肌梗死（AMI）、34例为不稳定型心绞痛（UAP）。另从同期健康体检人群中选取30例作为健康对照组。四组一般资料及外周淋巴细胞计数差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 外周血CD4+CD25+Treg测定 （1）标本采集：入组后于次日清晨取空腹静脉血，每例取2 ml，行肝素抗凝处理，在标本采集后4 h内通过流失细胞术进行测定。（2）检测方法：运用流式细胞仪三色荧光标记技术行外周血CD4+CD25+Treg测定。每例对象分别取2份100 μl新鲜全血放入流式管中，将其标记为对照管和试验管。分别向其中依次加入 20、5 μl；另再向试验管中加入20 μl；向对照管中加入CD25同型对照抗体20 μl；将其充分混匀，在室温条件下避光孵育30 min，向其中加入1 ml红细胞裂解液，将其充分混合，室温条件下避光15 min，反復以PBS洗涤2次，将上清液去除，继续向其中加入300 μl PBS，混匀之后即可放入流式细胞仪中进行测定，以对照管设门圈定CD4+CD25+Treg，并对其占CD4+T细胞比例进行测定。

1.2.2 冠状动脉造影 冠脉病变血管支数主要分为左前降支、左主干、右侧冠脉和回旋支，其狭窄程度≥50%的累计支数，分为1～3支病变。其中钝缘支、对角支与左室后支病变分别可将其记入到回旋支、左前降支、右冠状支脉，左主干受累的情况下，可同时对回旋支和左前降支受累来进行计数。若患者狭窄的冠脉血管支数为3支，则可将其记录为3支冠脉病变。所有对象造影结果均由两位心内科医生分别进行评价，以评价结果一致为最终结果，针对存在争议的情况则由2名医师协商一致后确定。根据GENSINI标准对冠脉造影狭窄严重程度进行评分，32分：100%；16分：91%～99%；8分：76%～90%；4分：51%～75%；2分：26%～50%；1分：0～25%。结合每处冠状动脉的狭窄程度评估得分与其该部位的权重系数相乘，即可获得该部位病变积分，然后将各病变处的积分累及起来即可得出GENSINI积分。

1.3 统计学处理

运用Epidata软件录入所有资料，并以SPSS 15.0行统计分析；计量资料以（x±s）表示，采用t检验；同时以Spearman行相关性分析；P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组外周血CD4+CD25+Treg测定结果比较

冠心病各组与对照组外周血CD4+CD25+Treg测定结果对比差异有统计学意义（P<0.05）；SAP组、UAP组、AMI组外周血CD4+CD25+Treg测定结果对比差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 冠心病冠脉造影特点与外周血CD4+CD25+Treg相关性

通过Spearman相关性分析，结果表明，外周血CD4+CD25+Treg与冠脉狭窄病变支数呈负相关（r=-0.627，P<0.01）；外周血CD4+CD25+Treg与GENSINI积分呈负相关（r=-0.616，P<0.01）。

3 讨论

近几年来，大量国内外文献报道证实，人体自身主要通过Treg来实现对免疫性疾病的控制，从而提高免疫耐受程度[2]。CD4+CD25+Treg作为Treg中非常重要的成员，其在免疫性疾病控制中发挥着非常重要的作用，其主要通过免疫负向调节的方法来实现自身反应性T细胞作用的有效抑制，从而达到控制免疫性疾病的目的[3]。CD4+CD25+Treg作为一种具有成熟全面功能的T细胞亚群，具有免疫抑制与免疫无能性作用[4]。其中免疫抑制性主要表现为经由T细胞受体介导信号的刺激之后，实现对CD4+与CD8+T细胞增殖与活化的有效抑制。而其免疫无能性则主要表现为对高浓度IL-2的单独刺激，固相包被或可溶性抗CD3单抗，同时能够与抗CD28单抗及抗CD3单抗相互影响，形成无应答状态，导致IL-2分泌受阻[5]。另受到T细胞受体介导信号刺激的影响，其能够在外周IL-2呈现为高浓度状态时，实现CD4+CD25+Treg的活化和增殖，但其增殖程度相较于CD4+CD25-T细胞会明显更弱[6]。为此，CD4+CD25+Treg免疫抑制功能是通过多种机制来实现的，结合不同的环境、强度，来确定发挥何种抑制作用。

因CD4+CD25+Treg所具备的免疫抑制功能，故不少研究者经过大量研究推测其与冠心病存在相关性[7]。国外有研究通过选取慢性心力衰竭患者，对其细胞因子与T细胞免疫表型进行测定，结果发现患者T细胞CD25表型出现了非常显著的增强，故其认为T细胞激活是炎症反应出现的独立危险因素，且与病因无直接关系[8]。另有研究者选取冠心病42例对其CD4+CD25+Treg表达水平进行测定，發现其外周血中CD4+CD25+Treg水平出现了非常明显的下降，并且随着心功能的改变，CD4+CD25+Treg水平也呈现规律的变化[9]。本研究通过选取108例冠心病患者，对其外周血CD4+CD25+Treg表达水平进行测定，结果表明，冠心病患者表达水平显著低于健康人群，同时AMI组外周血CD4+CD25+Treg测定结果低于SAP组、UAP组，UAP组外周血CD4+CD25+Treg测定结果低于SAP组（P<0.05）。该结果与文献报道结果一致。此外，本研究对冠脉狭窄病变支数、GENSINI积分与CD4+CD25+Treg水平相关性进行分析，结果表明，CD4+CD25+Treg与冠脉狭窄病变支数、GENSINI积分均呈现明显的负相关（P<0.01）。该结果进一步证实了，CD4+CD25+Treg与冠心病发生、发展的关系。

综上所述，不同类型冠心病患者CD4+CD25+Treg表达水平有明显差异，且病情程度与CD4+CD25+Treg水平呈现明显的负相关性，故可将CD4+CD25+Treg作为冠心病诊断、预后判断的重要指标，同时也是将来冠心病治疗和控制的重要靶向指标。

参考文献

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（收稿日期：2016-12-02）