GeneXpert MTB/RIF检查对结核性胸膜炎诊断的价值

郗志华

(太原市第四人民医院，山西 太原 030053)

GeneXpert MTB/RIF检查对结核性胸膜炎诊断的价值

郗志华

(太原市第四人民医院，山西 太原 030053)

目的：探讨GeneXpert MTB/RIF技术在结核性胸膜炎诊断及利福平耐药检测中的价值。方法：回顾性分析96例结核性胸膜炎和4例非结核性胸膜炎患者，比较胸水涂片抗酸染色法、结核分枝杆菌BACTEC MGITBD960液体快速培养、GeneXpert MTB/RIF技术的阳性率，并对培养阳性菌株做比例法药敏与GeneXpert MTB/RIF利福平耐药性对比。结果：GeneXpert MTB/RIF技术阳性率68.75%，明显高于涂片抗酸染色法2.1%及BACTEC MGITBD960液体快速培养24%，差异均有统计学意义(P<0.05)，GeneXpert MTB/RIF检测利福平耐药性的正确度为91.3%。结论：GeneXpert MTB/RIF技术在结核性胸膜炎诊断中有重要价值。

GeneXpert MTB/RIF技术；BD960液体快速培养；结核性胸膜炎

我国是世界卫生组织( WHO )认定的27个耐多药及广泛耐药结核病高负担国家之一[1]，发病率仅次于印度。目前估计有500万活动性肺结核患者，每年由结核病导致的死亡人数大约有5万。结核性胸膜炎是结核病中的一大类， 由结核分枝杆菌直接进入胸膜腔中和(或)其代谢产物刺激所导致的炎症，约占胸腔积液病因的30%～60%[2]。目前用常规方法来诊断结核性胸膜炎有较大难度，涂片阳性率低，培养周期长，影像学检查较易发现，但定性困难，误诊误治情况时有发生，胸膜活检具有危险性。随着分子生物学诊断技术的不断发展，GeneXperTMTB/RIF检查技术具有快速、敏感、准确的特性，主要应用在痰液检查，胸水鲜有报道。本研究将GeneXperTMTB/RIF检查技术与涂片，BD960液体快速培养对比分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年12月～2016年9月于太原市第四人民院就诊的疑似结核性胸膜炎患者。通过临床症状、影像表现，治疗疗效确诊73例，胸水结核菌培养确诊23例，男43例，女53例，年龄14～81岁，平均(46.3±3.4)岁；4例癌性胸膜炎患者，男3例，女1例，年龄15～80岁，平均(46.2±3.3)岁。两组患者的一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性。

1.2 试剂与仪器

二级生物安全柜(海尔)，抗酸染液、罗氏培养基(珠海贝索生物技术有限公司生产)，BACTEC MGITBD960液体快速培养(美国BD公司)， 全球基金项目GeneXpert 检测仪及试剂。

1.3 方法

1.3.1 涂片抗酸染色 取5 mL胸水离心，在玻片2/3处把沉淀涂抹均匀，面积为1 cm×2 cm，行抗酸染色，镜检。参照《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》[3]

1.3.2 BACTEC MGITBD960液体快速培养及罗氏比例法药敏 吸取5 mL胸水，加入2倍的 2%枸橼酸钠 半胱氨酸一氢氧化钠(2%NALC-NaOH)前处理液，旋窝震荡 20 s。室温静置 15～20 min，请勿超过 20 min。加无菌磷酸盐缓冲液 PBS(pH6.8)至约 40 mL，盖紧盖子，3 000×g离心 15 min，倒掉上清液。添加 1～3 mL PBS(pH=6.8)以中和 pH 至 6.8。取处理后标本 0.5 mL加入准备好的 MGIT 培养管培养。当培养阳性时，转种在中性罗氏培养基上生长，待生长好时刮取足量配置浓度做比例法利福平药敏，按《结核分枝杆菌药物敏感性试验标准化程序及质量保证手册》[4]操作。

1.3.3 GeneXpert 技术 用美国Cephid公司提供的消化液消化1 mL胸水15 min，消化液量视情况而定。吸取2 mL消化后的液体加入试剂盒。把试剂盒放入检测仪中，编号登记。经1.5 h，由电脑软件自动读取结果，可以同时检测出结核分支杆菌的量及利福平耐药性。

1.4 质量控制

操作均在安全柜内进行，参加国家结核病实验室药敏熟练度测试，以 H37RV标准株作为阳性参照，加以质控检测

1.5 统计学方法

应用SPSS18.0统计学软件进行数据分析。计数资料以百分率(%)表示，采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 3种检测方法阳性率比较

GeneXpert MTB/RIF技术阳性率68.75%，明显高于涂片抗酸染色法2.1%及BACTEC MGITBD960液体快速培养24%，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1，2。

表1 GeneXpert与BD960比较 例

表2 GeneXpert与涂片比较 例

2.2 药敏试验

以罗氏比例法利福平药敏为标准，共有23例标本，罗氏比例法利福平药敏耐药4例，敏感19例；GeneXpert MTB/RIF检测利福平耐药2例，敏感21例。其中有2例与罗氏比例法利福平药敏不相符，GeneXpert MTB/RIF检测利福平耐药性的正确度为91.3%。

3 讨论

胸膜炎病因复杂，临床表现无特异性，确诊困难，早期诊断和治疗对患者的预后非常重要。抗酸染色和培养结核分枝杆菌是诊断结核性胸膜炎的金标准，但是培养和涂片阳性率偏低，仅为10%左右[5]。其主要原因是：胸水中结结核分枝杆菌量少；胸水中没有结核分枝杆菌(由代谢物刺激而产生)；胸水量大不好收集。

GeneXpert MTB/RIF 是由美国Cepheid公司研发、采用 GeneXpert检测系统的一种半套式实时荧光定量PCR体外诊断技术,简化了传统 PCR检测步骤(样品的制备，核酸的提取、扩增，目标序列的检测等)，实现自动化。巢式PCR的应用使检测敏感度提高了2～3个数量级，也减少了非特异性扩增。其步骤在独立的一次性试剂盒内由系统自动完成，检出时间只需1.5 h左右。 GeneXpert检测试剂盒能检测样本中的结核分支杆菌和与利福平耐药相关的rpoB基因,主要针对rpoB 基因的81bp中部分区域设计探针。能对耐多药患者进行初筛，有很高的敏感性和特异性，检验周期短。本研究回顾分析应用GeneXpert MTB/RIF 系统检测确诊结核性胸膜炎患者的胸水，其阳性率 68.75%，明显高于结核分枝杆菌培养和涂片检测。

综上所述，GeneXpert技术操作简单，高效，快速，生物安全性高，可以推广使用。

[1] 中华人民共和国卫生部. 卫生部介绍全国肺结核疫情现状[EB /OL] . ( 2011 - 03 - 21 ). http: / /www.m oh. gov. cn.

[2] 马 玙.提高我国结核性胸膜炎的诊治水平[J].中国防痨杂志，2009,31(1):1-2.

[3] 中国疾病预防控制中心. 痰涂片镜检质量保证手册[M].北京:中国协和医科大学出版社, 2004.

[4] 赵雁林，王黎霞，成时明，等.分枝杆菌分离培养标准化程序及质量保证手册[M].北京：人民卫生出版社，2013.

[5] 张凌峰，高 梅．多项指标联合检测对良恶性胸腔积液的诊断价值[J]．海南医学，2013，24(5)：708．

本文编辑：王知平

郗志华，男，检验师，从事临床检验工作

R446.19

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1671-0126(2017)02-0043-02