小远志中口山酮类化学成分及生物活性研究

周凌云， 余小红， 耿圆圆， 华 燕

(1.皖南医学院 药学院，安徽 芜湖241002；2.西南林业大学 林学院，云南 昆明 650224)

小远志中口山酮类化学成分及生物活性研究

ZHOU Lingyun

周凌云1,2， 余小红2， 耿圆圆2， 华 燕2*

(1.皖南医学院 药学院，安徽 芜湖241002；2.西南林业大学 林学院，云南 昆明 650224)

以小远志干燥根茎为原料，采用乙醇提取、硅胶柱层析、Sephadex LH-20、MCI-gel和半制备型HPLC分离等方法对小远志中口山酮类化学成分进行研究。从中分离得到18个口山酮类化合物，根据理化性质及ESI-MS、1H NMR、13C NMR等波谱数据，分别鉴定为：1,7-二羟基口山酮(1)，3,6-二羟基-1,2,7,8-四甲氧基口山酮(2)，1,7-二羟基-5,6-二甲氧基口山酮(3)，1,5-二羟基-6,7-二甲氧基口山酮(4)，6-羟基-1,7-二甲氧基口山酮 (5)，7-羟基-1-甲氧基口山酮(6)，3,8-二羟基-1,2,4-三甲氧基口山酮(7)，6,8-二羟基-1,2,3-三甲氧基口山酮(8)，1,3,6-三羟基-2,7,8-三甲氧基口山酮(9)，3-羟基-1,2,8-三甲氧基口山酮(10)，1,3,7-三羟基口山酮(11)，1,6-二羟基-2,3-二氧亚甲基-7,8-二甲氧基口山酮(12)，1,7-二羟基-2,3-二甲氧基口山酮(13)，1,6-二羟基-5,7-二甲氧基口山酮(14)，3,7-二羟基-1,2-二甲氧基口山酮(15)，3,7-二羟基-1,2,8-三甲氧基口山酮(16)，1,2,3,7-四甲氧基口山酮(17)，1,6-二羟基-3,5,7,8-四甲氧基口山酮(18)，除化合物13外，其它化合物均为首次从该植物中分离得到。对其中分离所得量较多的化合物1～7进行了抗氧化及抗菌实验，发现化合物4和1有较好的抗氧化活性，对ABTS·的IC50值分别为12和13 mg/L；化合物3对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用，MIC值为217 μmol/L。

小远志；口山酮类化学成分; 抗氧化；抗菌

口山酮是一类重要的天然产物，具有广泛的生理活性[1-2]，在很多高等植物中均有分布，而该类化学成分最重要的来源为远志科植物，该科包括22个属，1 300余种[3]。小远志(PolygalasibiricaL. var.megalophaFr.)为云南特有品种，仅分布在云南中部和西北部。小远志民间药用清热解毒，祛风止痛[4]。国内外对该种植物化学成分研究较少,主要为黄酮类和多糖类成分[5-9]。现代药理研究表明小远志多糖有抗肿瘤活性[10]，小远志醇提取物有抗蛇毒活性[11]。然而，对于小远志口山酮类化合物报道较少，宛瑜等[5]从小远志中分离鉴定了7个口山酮类成分，但对其生物活性没有进行深入研究。为充分揭示小远志中口山酮类成分，发掘其药用价值，本研究对小远志中口山酮类化学成分进行了系统分析，并进一步测定了其抗氧化和抗菌活性。

1 实 验

1.1 材料、试剂与仪器

小远志(PolygalasibiricaL. var.megalophaFr.)，采自云南省昭通市永善县，由西南林业大学林学院杜凡教授鉴定为远志科植物小远志，标本(2012010)保存在西南林业大学林学院植物资源利用系药用植物教研室。柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶，青岛海洋化工厂；反相填充材料RP-18(40～60 μm)，Merk公司；Sephadex LH-20 (40～70 μm)，瑞典Amersham Pharmacia公司；D101 大孔树脂，山东鲁抗医药股份有限公司；MCI-gel (70～150 μm)，Mitsubishi Chemical Corporation；常用分离试剂，工业级重蒸；乙腈，色谱纯；ABTS，北京酷来搏科技有限公司；万古霉素，上海生工生物工程技术有限公司。白色念珠菌(Moniliaalbican)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)和绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)，均由西南林业大学微生物实验室提供。

电喷雾电离质谱(ESI-MS)在甲醇中由Waters Xevo TQ-S三重四级杆串联质谱仪或Bruker HTC/Esquire spectrometer液相-离子阱色谱联用仪测定；1H NMR和13C NMR谱由Bruker AM-400 MHz和Avance III-600 MHz超导核磁共振仪测定；半制备采用Agilent-HP 1100高效液相色谱仪，HPLC半制备柱(Agilent，Zorbax SB-C18，250 mm × 9.4 mm，5 μm)进行分离纯化。UV-2450紫外可见分光光度计，北京岛津仪器有限公司。

1.2 提取分离

小远志干燥根茎约5 kg，粉碎后过筛(178 μm)，用75%的乙醇回流提取3次，每次40 L,分别提取4、2和2 h,合并提取液，减压浓缩得到浸膏约1.7 kg。浸膏稀释3倍，用温水超声波溶解，抽滤后过D101大孔吸附树脂，先用9 L水洗脱，再用12 L 65%乙醇洗脱，洗脱液减压浓缩得到500.0 g粗提样品，经硅胶柱层析，用氯仿-甲醇 (30 ∶1～ 0 ∶1，体积比) 梯度洗脱，合并后得到8个部分Fr.1～Fr.8。

Fr.1 (6.1g) 经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮(20 ∶1～ 0 ∶1，体积比) 洗脱，TLC检测后合并得到5个组分Fr.1.1～ Fr.1.5。组分Fr.1.2经过结晶和重结晶后得到化合物1 (620.7 mg)；组分Fr.1.3经过硅胶柱层析，用石油醚-丙酮(15 ∶1～3 ∶1，体积比)和凝胶Sephadex LH-20(甲醇)反复洗脱，得到了化合物3 (169.7 mg)，4(71.9 mg) 和5(50.0 mg)；组分Fr.1.4经过反复硅胶(石油醚-丙酮，体积比15 ∶1～1 ∶1；氯仿-甲醇，体积比20 ∶1～5 ∶1)和凝胶Sephadex LH-20(甲醇)柱层析，最后经半制备型HPLC分离，以乙腈-水 (45 ∶55, 体积比) 为流动相，得到了化合物13 (1.8 mg)，18 (1.3 mg)。

Fr.2 (6.6 g) 首先用MCI-gel进行脱色，脱色后的样品经TLC检测后合并得到4个组分Fr.2.1～ Fr.2.4。组分Fr.2.1经过反复硅胶(石油醚-丙酮，体积比10 ∶1～1 ∶1；氯仿-甲醇，体积比20 ∶1～3 ∶1)和凝胶Sephadex LH-20(甲醇)，最终得到了化合物6 (15.1 mg) 和7 (23.8 mg)；组分Fr.2.2经过反复硅胶(石油醚-丙酮，体积比10 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，体积比10 ∶1～2 ∶1)和凝胶Sephadex LH-20(甲醇)，最后经半制备型HPLC分离，以乙腈-水 (40 ∶60, 体积比) 为流动相，最终得到了化合物9 (3.0 mg)；组分Fr.2.3经过反复硅胶(石油醚-丙酮，体积比4 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，体积比8 ∶1～2 ∶1)和凝胶Sephadex LH-20(甲醇)，最后经半制备型HPLC分离，以乙腈-水 (38 ∶72, 体积比) 为流动相，最终得到了化合物12 (1.8 mg)。

Fr.3 (16.5 g) 首先用MCI-gel进行脱色，脱色后的样品经RP-18，用甲醇-水(30 ∶70～90 ∶10，体积比)洗脱，TLC检测后合并得到4个组分Fr.3.1～ Fr.3.4。组分Fr.3.1经过硅胶柱层析，用石油醚-丙酮(5 ∶1～0 ∶1，体积比)和凝胶Sephadex LH-20(甲醇)反复洗脱，最后经半制备型HPLC分离，以乙腈-水 (38 ∶62, 体积比) 为流动相，最终得到了化合物10 (3.0 mg)和11 (4.2 mg)；组分Fr.3.2经过硅胶柱层析，用石油醚-丙酮(2 ∶1～0 ∶1，体积比)和凝胶Sephadex LH-20(甲醇)反复洗脱，最后经半制备型HPLC分离，以乙腈-水 (35 ∶65, 体积比) 为流动相，最终得到了化合物14 (3.0 mg)，15 (2.0 mg)，16 (2.0 mg) 和17 (1.3 mg)；组分Fr.3.3经过反复硅胶(石油醚-丙酮，体积比5 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，体积比8 ∶1～2 ∶1)和凝胶Sephadex LH-20(甲醇)，最后经半制备型HPLC分离，以乙腈-水 (35 ∶65, 体积比) 为流动相，最终得到了化合物2 (2.5 mg) 和17 (1.0 mg)；组分Fr.3.4经过反复硅胶(石油醚-丙酮，体积比3 ∶1～0 ∶1；氯仿-甲醇，体积比5 ∶1～2 ∶1)和凝胶Sephadex LH-20(甲醇)，最后经半制备型HPLC分离，以乙腈-水 (33 ∶67, 体积比) 为流动相，最终得到了化合物8 (1.2 mg)。

1.3 生物活性测定

1.3.1 抗氧化活性测定 参考文献[12]报道的ABTS总自由基清除试验方法，测定化合物1～7(分离所得量少的单体化合物未进行测定)及对照品维生素C的抗氧化能力。

1.3.2 抗菌活性测定 参考文献[13～14]报道的抗菌实验方法，测定化合物1～7和对照品万古霉素对白色念珠菌(M.albican)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、大肠埃希氏菌(E.coli)和绿脓杆菌(P.aeruginosa)的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。

2 结果与分析

2.1 结构鉴定

化合物1：黄色针晶；分子式：C13H8O4，相对分子质量为228；ESI-MS(m/z)：227 [M-H]-；1H NMR (400 MHz, 丙酮-d6)δ：12.70 (1H, s, OH-1), 9.04 (1H, s, OH-7), 7.67 (1H, t,J=8.4 Hz, H-3), 7.58 (1H, d,J=3.1 Hz, H- 8), 7.49 (1H, d,J=9.3 Hz, H-5), 7.41 (1H, dd,J=9.1, 3.1 Hz, H- 6), 6.97 (1H, d,J=8.4, Hz, H- 4), 6.74 (1H, d,J=8.3Hz, H-2)；13C NMR (100 MHz, 丙酮-d6)δ：162.7 (s, C-1), 110.5 (d, C-2), 137.8 (d, C-3), 107.7 (d, C- 4), 120.2 (d, C-5), 126.1 (d, C- 6), 155.0 (s, C-7), 109.1 (d, C- 8), 182.9 (s, C-9), 157.3 (s, C- 4a), 121.8 (s, C- 8a), 107.8 (s, C-9a), 151.0 (s, C-10a)。该化合物的光谱数据与文献[15]对照基本一致，故鉴定为1,7-二羟基口山酮。

化合物2：黄色粉末；分子式：C17H16O8，相对分子质量为348；ESI-MS(m/z)：349 [M+H]+，371 [M+Na]+和387 [M+K]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：6.48 (2H, s, H- 4, 5), 3.78 (6H, s, 1, 8-OMe), 3.73 (6H, s, 2, 7-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.7 (s, C-1, 8), 138.9 (s, C-2, 7), 158.4 (s, C-3, 6), 98.9 (d, C- 4, 5), 172.5 (s, C-9), 153.0 (s, C- 4a, 10a), 108.2 (s, C- 8a, 9a), 61.4 (q, 1, 8-OMe), 60.6 (q, 2, 7-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[16]对照基本一致，故鉴定为3,6-二羟基-1,2,7,8-四甲氧基口山酮。

化合物3：黄色粉末；分子式：C15H12O6，相对分子质量为288；ESI-MS(m/z)：311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：13.20 (1H, s, OH-1), 7.55 (1H, t,J= 8.4 Hz, H-3), 6.84 (1H, d,J= 8.1 Hz, H- 4), 6.68 (1H, s, H- 8), 6.66 (1H, d,J= 11.1 Hz, H-2), 3.84 (3H, s, 6-OMe), 3.77 (3H, s, 5-OMe)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：161.2 (s, C- 1), 110.0 (d, C-2), 136.1 (d, C-3), 106.0 (d, C- 4), 153.3 (s, C-5), 138.9 (s, C- 6), 153.8 (s, C-7), 99.3 (d, C- 8), 180.4 (s, C-9), 154.8 (s, C- 4a), 107.9 (s, C- 8a), 107.5 (s, C-9a), 154.8 (s, C-10a), 61.7 (q, 5-OMe), 60.8 (q, 6-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[17]对照基本一致，故鉴定为1,7-二羟基-5,6-二甲氧基口山酮。

化合物4：黄色结晶；分子式：C15H12O6，相对分子质量为288；ESI-MS(m/z)：311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：12.88 (1H, s, OH-1), 7.65 (1H, t,J=8.3 Hz, H-3), 7.26 (1H, s, H- 8), 7.07 (1H, d,J=7.7 Hz, H- 4), 6.76 (1H, d,J=7.5 Hz, H-2), 3.90 (3H, s, 6-OMe), 3.89 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：160.8 (s, C-1), 110.0 (d, C-2), 136.4 (d, C-3), 107.2 (d, C- 4), 134.9 (s, C-5), 146.5 (s, C- 6), 148.2 (s, C-7), 99.4 (d, C- 8), 180.3 (s, C-9), 155.5 (s, C- 4a), 111.2 (s, C- 8a), 107.7 (s, C-9a), 146.3 (s, C-10a), 61.0 (q, 6-OMe), 56.0 (q, 7-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[18]对照基本一致，故鉴定为1,5-二羟基- 6,7-二甲氧基口山酮。

化合物5：白色粉末；分子式：C15H12O5，相对分子质量为272；ESI-MS(m/z)：317 [M+K]+，311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ：7.62 (1H, t,J=8.5 Hz, H-3), 7.39 (1H, s, H- 8), 7.04 (1H, d,J=7.8 Hz, H- 4), 6.90 (1H, d,J=8.2 Hz, H-2), 6.84 (1H, s, H-5), 3.86 (3H, s, 1-OMe), 3.84 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ：160.0 (s, C-1), 106.1 (d, C-2), 134.4 (d, C-3), 109.5 (d, C- 4), 102.3 (d, C-5), 153.8 (s, C- 6), 146.0 (s, C-7), 105.6 (d, C- 8), 173.6 (s, C-9), 157.4 (s, C- 4a), 114.4 (s, C- 8a), 111.3 (s, C-9a), 150.5 (s, C-10a), 56.1 (q, 1-OMe), 56.8 (q, 7-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[19]对照基本一致，故鉴定为6-羟基-1,7-二甲氧基口山酮。

化合物6：黄色粉末；分子式：C14H10O4，相对分子质量为242；ESI-MS(m/z)：265 [M+Na]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.67 (1H, t,J=8.5 Hz, H-3), 7.42 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.38 (1H, d,J=2.8 Hz, H- 8), 7.21 (1H, dd,J=9.2, 2.5 Hz, H- 6), 7.08 (1H, d,J=8.3 Hz, H- 4), 6.92 (1H, d,J= 7.9 Hz, H-2), 3.87 (3H, s, 1-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：160.2 (s, C-1), 109.7 (d, C-2), 135.5 (d, C-3), 105.9 (d, C- 4), 118.9 (d, C-5), 123.8 (d, C- 6), 153.9 (s, C-7), 108.9 (d, C- 8), 174.9 (s, C-9), 157.5 (s, C- 4a), 123.1 (s, C- 8a), 111.2 (s, C-9a), 148.1 (s, C-10a), 56.3 (q, 1-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[20]对照基本一致，故鉴定为7-羟基-1-甲氧基口山酮。

化合物7：黄色晶体；分子式：C16H14O7，相对分子质量为318；ESI-MS(m/z)：357 [M+K]+，341 [M+Na]+和319 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：13.88 (1H, s, OH- 8), 7.58 (1H, t,J= 8.1 Hz, H- 6), 6.95 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.70 (1H, d,J=8.0 Hz, H-7), 3.82 (3H, s, 1-OMe)，3.73 (3H, s, 2-OMe)，3.73 (3H, s, 4-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：133.4 (s, C-1), 150.3 (s, C-2), 153.3 (s, C-3), 140.5 (s, C- 4), 107.6 (d, C-5), 137.3 (d, C- 6), 111.4 (d, C-7), 162.9 (s, C- 8), 182.5 (s, C-9), 149.1 (s, C- 4a), 108.6 (s, C- 8a), 109.5 (s, C-9a), 156.6 (s, C-10a), 62.0 (q, 1-OMe), 61.8 (q, 2-OMe), 61.7 (q, 4-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[21]对照基本一致，故鉴定为3,8-二羟基-1,2,4-三甲氧基口山酮。

化合物8：黄色粉末；分子式：C16H14O7，相对分子质量为318；ESI-MS(m/z)：317 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：13.88 (1H, s, OH- 8), 8.28 (1H, s, OH- 6), 6.46 (1H, s, H- 4), 6.44 (1H, s, H-7), 6.23 (1H, d, s, H-5), 3.81 (3H, s, 1-OMe)，3.79 (3H, s, 2-OMe)，3.74 (3H, s, 3-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.5 (s, C-1), 139.7 (s, C-2), 154.1 (s, C-3), 96.3 (d, C- 4), 91.4 (d, C-5), 164.8 (s, C- 6), 99.5 (d, C-7), 162.5 (s, C- 8), 178.9 (s, C-9), 155.9 (s, C- 4a), 108.6 (s, C- 8a), 102.3 (s, C-9a), 155.9 (s, C-10a), 61.3 (q, 1-OMe), 60.1 (q, 2-OMe), 55.6 (q, 3-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[22]对照基本一致，故鉴定为6,8-二羟基-1,2,3-三甲氧基口山酮。

化合物9：黄色粉末；分子式：C16H14O8，相对分子质量为334；ESI-MS(m/z)：335 [M+H]+，357 [M+Na]+和373 [M+K]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：6.64 (1H, s, H-5), 6.32 (1H, s, H- 4), 3.95 (3H, s, 8-OMe), 3.88 (3H, s, 7-OMe), 3.85 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：154.5 (s, C-1), 131.9 (s, C-2), 155.9 (s, C-3), 94.4 (d, C- 4), 100.6 (d, C-5), 159.8 (s, C- 6), 140.2 (s, C-7), 153.9 (s, C- 8), 181.8 (s, C-9), 159.2 (s, C- 4a), 108.4 (s, C- 8a), 103.8 (s, C-9a), 155.8 (s, C-10a), 60.9 (q, 2-OMe), 61.7 (q, 7-OMe), 62.4 (q, 8-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[16]对照基本一致，故鉴定为1,3,6-三羟基-2,7,8-三甲氧基口山酮。

化合物10：黄色粉末；分子式：C16H14O6，相对分子质量为302；ESI-MS(m/z)：301 [M+H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.58 (1H, t,J=8.2 Hz, H- 6), 6.97 (1H, d,J=8.4 Hz, H-5), 6.87 (1H, d,J=8.1 Hz, H-7), 6.54 (1H, s, H- 4), 3.84 (3H, s, 8-OMe)，3.79 (3H, s, 1-OMe)，3.74 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.8 (s, C-1), 139.2 (s, C-2), 156.4 (s, C-3), 98.9 (d, C- 4), 108.9 (d, C-5), 133.9 (d, C- 6), 106.1 (d, C-7), 159.9 (s, C- 8), 173.1 (s, C-9), 152.8 (s, C- 4a), 112.3 (s, C- 8a), 108.9 (s, C-9a), 156.4 (s, C-10a), 61.4 (q, 1-OMe), 60.5 (q, 2-OMe), 56.0 (q, 8-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[23]对照基本一致，故鉴定为3-羟基-1,2,8-三甲氧基口山酮。

化合物11：黄色粉末；分子式：C13H8O5，相对分子质量为244；ESI-MS(m/z)：243 [M-H]-；1H NMR (400 MHz, 丙酮-d6)δ：12.96 (1H, s, OH-1), 754 (1H, s, H- 8), 7.39 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.29 (1H, d,J=8.8 Hz, H-6), 6.38 (1H, s, H- 4), 6.23 (1H, s, H-2)；13C NMR (100 MHz, 丙酮-d6)δ：164.5 (s, C-1), 98.6 (d, C-2), 166.5 (s, C-3), 94.5 (d, C- 4), 119.6 (d, C-5), 125.0 (d, C- 6), 154.9 (s, C-7), 109.2 (d, C- 8), 181.9 (s, C-9), 158.9 (s, C- 4a), 121.8 (s, C- 8a), 103.3 (s, C-9a), 150.6 (s, C-10a)。该化合物的光谱数据与文献[24]对照基本一致，故鉴定为1,3,7-三羟基口山酮。

化合物12：黄色粉末；分子式：C16H12O8，相对分子质量为332；ESI-MS(m/z)：333 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：6.57 (1H, s, H-5), 6.46 (1H, s, H- 4), 6.10 (2H, s, -O-CH2-O), 3.93 (3H, s, 8-OMe)，3.86 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：154.2 (s, C-1), 130.3 (s, C-2), 159.5 (s, C-3), 89.5 (d, C- 4), 100.9 (d, C-5), 159.8 (s, C- 6), 141.2 (s, C-7), 155.3 (s, C- 8), 181.5 (s, C-9), 153.5 (s, C- 4a), 107.4 (s, C- 8a), 106.1 (s, C-9a), 156.3 (s, C-10a), 103.9 (t, -O-CH2-O), 62.3 (q, 8-OMe), 61.6 (q, 7-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[25]对照基本一致，故鉴定为1,6-二羟基-2,3-二氧亚甲基-7,8-二甲氧基口山酮。

化合物13：黄色粉末；分子式：C15H12O6，相对分子质量为288；ESI-MS(m/z)：311 [M+Na]+和289 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：13.20 (1H, s, OH-1), 7.55 (1H, t,J=8.4 Hz, H-5), 6.84(1H, d,J=8.1 Hz, H- 4), 6.68(1H, s, H- 8), 6.66 (1H, d,J=11.1 Hz, H- 6), 3.84 (3H, s, 2-OMe), 3.77 (3H, s, 3-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：154.5 (s, C-1), 132.8 (s, C-2), 161.6 (s, C-3), 91.9 (d, C- 4), 120.0 (d, C-5), 125.7 (d, C- 6), 156.3 (s, C-7), 109.1 (d, C- 8), 182.3 (s, C-9), 155.5 (s, C- 4a), 121.8 (s, C- 8a), 104.7 (s, C-9a), 151.3 (s, C-10a), 61.1 (q, 2-OMe), 56.9 (q, 3-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[26]对照基本一致，故鉴定为1,7-二羟基-2,3-二甲氧基口山酮。

化合物14：黄色粉末；分子式：C15H12O6，相对分子质量为288；ESI-MS(m/z)：287 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：13.41 (1H, s, OH-1), 8.25 (1H, s, OH-6), 7.57 (1H, t,J=8.1 Hz, H-3), 7.16 (1H, s, H- 8), 7.00 (1H, d,J=7.9 Hz, H- 4), 6.70 (1H, d,J= 8.2 Hz, H-2), 3.85 (3H, s, 7-OMe), 3.83 (3H, s, 5-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：161.0 (s, C-1), 109.5 (d, C-2), 135.4 (d, C-3), 106.8 (d, C- 4), 134.8 (s, C-5), 148.5 (s, C- 6), 147.4 (s, C-7), 98.9 (d, C- 8), 180.2 (s, C-9), 155.4 (s, C- 4a), 117.8 (s, C- 8a), 107.6 (s, C-9a), 134.7 (s, C-10a), 60.2 (q, 5-OMe), 55.7 (q, 7-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[27]对照基本一致，故鉴定为1,6-二羟基-5,7-二甲氧基口山酮。

化合物15：黄色粉末；分子式：C15H12O6，相对分子质量为288；ESI-MS(m/z)：289 [M+H]+，311 [M+Na]+和327 [M+K]+；1H NMR (600 MHz, MeOD)δ：7.49 (1H, d,J=2.8 Hz, H- 8), 7.30 (1H, d,J=9.0 Hz, H-5), 7.17 (1H, dd,J=8.8, 2.8 Hz, H- 6), 6.59 (1H, s, H- 4), 3.92 (3H, s, 1-OMe), 3.87 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, MeOD)δ：155.0 (s, C-1), 141.1 (s, C-2), 156.8 (s, C-3), 101.1 (d, C- 4), 119.4 (d, C-5), 123.8 (d, C- 6), 150.0 (s, C-7), 110.0 (d, C- 8), 177.0 (s, C-9), 162.1 (s, C- 4a), 124.2 (s, C- 8a), 110.0 (s, C-9a), 155.0 (s, C-10a), 62.2 (q, 1-OMe), 61.6 (q, 2-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[28]对照基本一致，故鉴定为3,7-二羟基-1,2-二甲氧基口山酮。

化合物16：黄色粉末；分子式：C16H14O7，相对分子质量为318；ESI-MS(m/z)：357 [M+K]+，341 [M+Na]+和319 [M+H]+；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.17 (1H, d,J=8.9 Hz, H- 6), 7.04 (1H, d,J=8.8 Hz, H-5), 6.27 (1H, s, H- 4), 3.84 (3H, s, 1-OMe)，3.80 (3H, s, 8-OMe)，3.74 (3H, s, 2-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：152.7 (s, C-1), 138.1 (s, C-2), 156.4 (s, C-3), 99.4 (d, C- 4), 112.6 (d, C-5), 121.9 (d, C- 6), 146.3 (s, C-7), 145.3 (s, C- 8), 173.4 (s, C-9), 154.1 (s, C- 4a), 117.2 (s, C- 8a), 108.9 (s, C-9a), 148.8 (s, C-10a), 61.5 (q, 1-OMe), 61.2 (q, 2-OMe), 60.4 (q, 8-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[23]对照基本一致，故鉴定为3,7-二羟基-1,2,8-三甲氧基口山酮。

化合物17：黄色粉末；分子式：C17H16O6，相对分子质量为316；ESI-MS(m/z)：315 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ：7.68 (1H, d,J=2.3 Hz, H- 8), 7.37 (1H, d,J=8.9 Hz, H-5), 7.24 (1H, dd,J=8.8, 2.3 Hz, H- 6), 6.63 (1H, s, H- 4), 4.13 (3H, s, 1-OMe), 4.03 (3H, s, 2-OMe), 3.93 (3H, s, 3-OMe), 3.88 (3H, s, 7-OMe)；13C NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ：153.4 (s, C-1), 139.5 (d, C-2), 158.7 (s, C-3), 96.1 (d, C- 4), 116.5 (s, C-5), 123.6 (s, C- 6), 154.5 (s, C-7), 106.3 (s, C- 8), 175.2 (s, C-9), 156.1 (s, C- 4a), 122.7 (s, C- 8a), 110.3 (s, C-9a), 149.7 (s, C-10a), 61.9 (q, 1-OMe), 61.3 (q, 2-OMe), 56.1 (q, 3-OMe), 55.8 (q, 7-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[24]对照基本一致，故鉴定为1,2,3,7-四甲氧基口山酮。

化合物18：黄色粉末；分子式：C17H16O8，相对分子质量为348；ESI-MS(m/z)：347 [M-H]-；1H NMR (600 MHz, CDCl3)δ：13.32 (1H, s, OH-1), 6.44 (1H, s, H-2), 6.33 (1H, s, H- 4), 4.04 (3H, s, 8-OMe), 4.02 (3H, s, 5-OMe), 3.98 (3H, s, 7-OMe), 3.88 (3H, s, 3-OMe)；13C NMR (150 MHz, CDCl3)δ：163.6 (s, C-1), 97.3 (d, C-2), 166.1 (s, C-3), 92.3 (d, C- 4), 138.0 (s, C-5), 151.6 (s, C- 6), 148.4 (s, C-7), 131.7 (s, C- 8), 180.3 (s, C-9), 156.6 (s, C- 4a), 108.7 (s, C- 8a), 103.6 (s, C-9a), 147.3 (s, C-10a), 62.1 (q, 8-OMe), 61.8 (q, 5-OMe), 61.8 (q, 7-OMe), 55.8 (q, 3-OMe)。该化合物的光谱数据与文献[29]对照基本一致，故鉴定为1,6-二羟基-3,5,7,8-四甲氧基口山酮。

化合物1～18的结构如图1所示。

2.2 生物活性测定结果

2.2.1 抗氧化活性 以Vc(IC50= 7 mg/L)作为阳性对照，测试了化合物1～7对ABTS自由基的清除能力，结果见表1。结果显示化合物1和4具有较好的抗氧化活性，其IC50值分别为13和12 mg/L。

表1 化合物1～7对ABTS自由基的清除能力

图1 化合物1～18的结构

2.2.2 抗菌活性 以万古霉素(MIC=0.69 μmol/L，MBC=1.38 μmol/L)作为阳性对照，所测定的化合物1～7中仅化合物3对金黄色葡萄球菌表现出一定的抑制作用，其MIC值为217 μmol/L。

3 结 论

本研究对小远志中口山酮化学成分进行了系统研究，从中分离到了18个化合物，除化合物13外，其它化合物均为首次从该植物中分离得到。对分离所得量较多的化合物1～7进行抗氧化和抗菌活性测定，发现化合物4和1有较好的抗氧化活性，对ABTS·的IC50值分别为12和13 mg/L；化合物3对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用，MIC值为217 μmol/L。

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Chemical Constituents and Bioactivities of Xanthones fromPolygalasibiricaL. var.megalophaFr.

ZHOU Lingyun1,2, YU Xiaohong2, GENG Yuanyuan2, HUA Yan2

(1. School of Pharmacy,Wannan Medical College, Wuhu 241002, China；2. College of Forestry, Southwest Forestry University, Kunming 650224, China)

Eighteen compounds were isolated by ethanol extraction, silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography, MCI-gel column chromatography and semi-preparative HPLC from the dried roots ofPolygalasibiricaL. var.megalophaFr. Their structures were identified as 1,7-dihydroxy xanthone (1), 3,6-dihydroxy-1,2,7,8-tetramethoxy xanthone (2), 1,7-dihydroxy-5,6- dimethoxy xanthone (3), 1,5-dihydroxy-6,7-dimethoxy xanthone (4), 6-hydroxy-l,7-dimethoxy xanthone (5), 7-hydroxy-1-methoxy xanthone (6), 3,8-dihydroxy- 1,2,4-trimethoxy xanthone (7), 6,8-dihydroxy-1,2,3-trimethoxy xanthone (8), 1,3,6-trihydroxy-2,7,8-trimethoxy- xanthone (9), 3-hydroxy-1,2,8-trimethoxy xanthone (10), 1,3,7-trihydroxy xanthone (11), 1,6-dihydroxy-2,3-methylene-dioxy-7,8-dimethoxy xanthone (12)，1,7-dihydroxy-2,3-dimethoxy xanthone (13), 1,6-dihydroxy-5,7-dimethoxy xanthone (14), 3,7-dihydroxy-1,2-dimethoxy xanthone (15), 3,7- dihydroxy- 1,2,8-trimethoxy xanthone (16), 1,2,3,7-tetramethoxy xanthone (17), 1,6-dihydroxy-3,5,7,8-tetramethoxy xanthone (18) by ESI-MS,1H NMR,13C NMR. All compounds except 13 were isolated from this plant for the first time. The antioxidant and antimicrobial activities of compound 1-7 were studied. And the results showed that the compound 4(IC50= 12 mg/L)and compound 1(IC50= 13 mg/L)showed good ABTS scavenging activity and compound 3(MIC = 217 μmol/L)had certain inhibitory activity againstStaphylococcusaureus.

Polygala.sibiricaL. var.megalophaFr.; xathones; antioxidant; antimicrobial

10.3969/j.issn.0253-2417.2017.02.016

2016- 07- 05

国家自然科学基金资助项目(31260083)；皖南医学院校重点科研项目培育基金(WK2016Z06)

周凌云(1980— )，男，安徽芜湖人，博士生，主要从事中药活性成分研究

*通讯作者：华 燕，女，教授，博士生导师，主要从事天然药物化学的研究；E-mail:huayan1216@163.com。

TQ35

A

0253-2417(2017)02- 0121- 08

周凌云，余小红，耿圆圆，等.小远志中口山酮类化学成分及生物活性研究[J].林产化学与工业，2017，37(2)：121-128.