结肠腺瘤癌变过程中MTA1、RECK的表达及意义

陈现亮，吴义娟，吕 卓，赵慧敏，韩宝娟

·短篇论著·

结肠腺瘤癌变过程中MTA1、RECK的表达及意义

陈现亮，吴义娟，吕 卓，赵慧敏，韩宝娟

目的 分析MTA1、RECK在结肠腺瘤及结肠癌组织中的表达，探讨MTA1、RECK在结肠腺瘤癌变过程中的作用。方法 应用免疫组化SABC法检测104例结肠癌组织、114例结肠腺瘤组织、30例正常结肠组织中MTA1、RECK蛋白表达，并复习相关文献。结果 正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤至结肠癌组织中MTA1的阳性率呈逐渐增高趋势(P<0.05)；结肠腺瘤(中重度异型增生)组中MTA1的阳性率高于结肠腺瘤(轻度异型增生)组(P<0.05)；MTA1在结肠癌中的阳性率随肿瘤临床Dukes分期的提高、淋巴结转移及肿瘤分化程度的降低而升高(P<0.05)。RECK在正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、结肠癌组中的阳性率分别为100%、78.57%、77.27%、53.85%；正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤至结肠癌组中RECK的阳性率呈逐渐降低趋势；中重度异型增生结肠腺瘤组中RECK的阳性率明显低于轻度异型增生结肠腺瘤组，差异有统计学意义(P<0.05)；RECK在结肠癌中的阳性率随肿瘤临床Dukes分期的提高、淋巴结转移及肿瘤分化程度的降低而降低(P<0.05)。结论 结肠癌组织中MTA1呈高表达，RECK表达缺失。MTA1、RECK参与正常组织、癌前病变、癌组织的发生、发展，在结肠腺瘤的癌变过程中起着重要作用。

结肠肿瘤；结肠癌；结肠腺瘤；MTA1；RECK

结肠腺瘤是一种结肠良性肿瘤，被认为是结肠癌的癌前病变，腺瘤的病理类型与腺瘤恶变密切相关，积极诊断和治疗结肠腺瘤是控制、减少结肠癌发病的重要途径。但目前有关结肠腺瘤癌变的机制研究较少，且其具体机制尚不明确[1-2]。近年来许多研究结果显示MTA1、RECK与多种恶性肿瘤的发生、发展、浸润和转移密切相关[3-5]。因此研究结肠癌的早期肿瘤标志物成为热点，这些研究将有助于对结肠癌的早期临床诊断、预后评价并且为进一步探讨结肠癌的发病机制提供依据。本实验采用免疫组化法对不同病理类型结肠腺瘤及结肠癌中MTA1、RECK的表达进行检测，探讨其在结肠腺瘤癌变过程中的作用，对预测结肠腺瘤的癌变可能性及化学干预有重要意义。

1 材料与方法

1.1 临床资料 收集2010～2015年邢台市人民医院肿瘤外科手术切除的104例结肠腺癌标本，由两位高年资病理科医师严格按WHO(2000)消化系统肿瘤标准明确诊断，并根据其制定的病理标准进行分级。全部病例术前均未行化疗或放疗。患者年龄31～83岁，男性79例，女性25例，有淋巴结转移者60例，无淋巴结转移者44例，按Dukes分期中国改良法分期标准：A+B期44例，C+D期60例；并按WHO(2000)结直肠癌组织学分类标准：高+中分化80例，低分化24例。肠镜活检及切除结肠腺瘤标本114例，年龄28～74岁，其中男性82例，女性32例，结直肠腺瘤组依据其伴上皮内病变的程度分为轻度异型增生组82例、中重度异型增生组32例，根据其组织学类型分为管状腺瘤70例、绒毛状腺瘤44例。正常结肠组织30例，年龄24～70岁，男性18例，女性12例。

1.2 方法 免疫组化染色按SABC试剂盒操作说明书进行。鼠抗人MTA1单克隆抗体(1C3)购自美国Santa Cruz公司，工作浓度为1 ∶100。羊抗鼠辣根过氧化物酶标记二抗；兔抗人RECK单克隆抗体(D8C7)购自福州迈新公司，工作浓度为即用型；防脱片剂APES及DAB显色剂均购自北京中杉金桥公司；以PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性切片作为阳性对照。

1.3 结果判断 MTA1蛋白定位于细胞核，呈棕黄色颗粒为阳性；RECK蛋白定位于胞质或胞核呈棕黄色着色为阳性。结果判定：所有病理染色标本均由两名病理医师判断，判断标准：染色强度按棕色深浅可分为0分、1分、2分及3分，按阳性细胞比例范围分为(0)0分、(0～30%)1分、(30%～60%)2分和(>60%)3分；最后将两项得分结果相加：0～2分为阴性，3～6分为阳性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，数据应用χ2检验进行分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MTA1、RECK在不同结肠组织中的表达 MTA1在正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、结肠癌组织中的阳性率分别为6.67%、42.85%、63.64%、84.61%(图1)。MTA1在结肠癌与绒毛状腺瘤间的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)，在绒毛状腺瘤与管状腺瘤间的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)，在管状腺瘤与正常结肠组织间的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)，由此可见MTA1在正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤至结肠癌中的阳性率呈逐渐增高趋势(表1)。RECK在正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、结肠癌组中的阳性率分别为100%、78.57%、77.27%、53.85%(图2)。RECK在结肠癌与绒毛状腺瘤间的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)，在绒毛状腺瘤与管状腺瘤间的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)，在管状腺瘤与正常结肠组织间的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)，由此可见RECK在正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤至结肠癌中的阳性率呈逐渐降低趋势(表1)。

表1 MTA1、RECK在不同结肠组织中的表达

结肠癌与绒毛状腺瘤、管状腺瘤及正常结肠组相比，☆P<0.05；绒毛状腺瘤与管状腺瘤、正常结肠组织相比，*P<0.05；管状腺瘤与正常结肠组织相比，△P<0.05

2.2 MTA1、RECK在结肠腺瘤癌变过程中的表达 在结肠腺瘤中MTA1的阳性率分别为39.02%(轻度异型增生)、81.25%(中重度异型增生)，差异有统计学意义(P<0.05)。RECK在轻度异型增生结肠腺瘤、中重度异型增生结肠腺瘤中的阳性率分别为90.24%、46.88%，中重度异型增生结肠腺瘤中RECK阳性率明显低于轻度异型增生结肠腺瘤，差异有统计学意义(P<0.05，表2)。

表2 MTA1、RECK在结肠腺瘤癌变过程中的表达

与轻度异型增生相比，*P<0.05

2.3 MTA1、RECK表达与结肠癌临床病理特征的关系 MTA1在结肠癌中的阳性率随肿瘤临床Dukes分期的提高及肿瘤分化程度的降低而升高(P<0.05)。有淋巴结转移组(Dukes C+D组)明显高于无淋巴结转移组(Dukes A+B组)，差异有统计学意义(P<0.05)。MTA1表达与结肠癌患者年龄、性别无关(P>0.05)。RECK在结肠癌中的阳性率随肿瘤临床Dukes分期的提高、淋巴结转移及肿瘤分化程度的降低而降低(P<0.05)。在有淋巴结转移组(Dukes C+D组)明显低于无淋巴结转移组(Dukes A+B组)，差异有统计学意义(P<0.05)。RECK表达与结肠癌患者年龄、性别无关(P>0.05，表3)。

3 讨论

MTA1是1993年Pencil等[6]应用差异杂交技术从具有转移潜能的鼠乳腺癌细胞株13762NF中筛选克隆出来的基因，其通过影响染色质的状态来调节转录，调控组蛋白脱乙酰基从而发挥其生物学作用。MTA1是MTA家族的一员，其与肿瘤的侵袭和转移密切相关[7]。MTA1是一种关键的癌蛋白，有研究显示MTA1在人类肿瘤中表达上调，其高表达与肿瘤的高侵袭特征如高病理分级、血管形成和预后不良等相关。MTA1可能通过以下机制在肿瘤发展进程中发挥作用：(1)MTA1基因与组蛋白去乙酰化酶结合重塑染色质的结构，实现转录相关蛋白的下调[8]；(2)MTA1基因能够改变细胞角蛋白纤维系统，使细胞获得更强的侵袭及转移特征[9]。张金龙等[10]采用免疫组化法检测结肠癌中MTA1的表达，结果显示结肠癌组织及转移组织中MTA1细胞质染色强度均显著高于正常组织，MTA1在细胞质的表达强度与临床分期呈正相关，生存时间<5年的结直肠癌患者的肿瘤组织细胞质内MTA1的表达强度显著高于生存时间≥5年的患者组织，提示结肠癌中MTA1细胞质过表达者预后不良。本实验结果显示正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤至结肠癌中MTA1阳性率呈逐渐上升趋势，且中重度异型增生结肠腺瘤中MTA1阳性率明显高于轻度异型增生结肠腺瘤，MTA1在结肠癌中的阳性率随肿瘤临床Dukes分期的提高、淋巴结转移及肿瘤分化程度的降低而升高，与张金龙等的研究结果一致。提示MTA1高表达是结肠癌发生的早期事件，MTA1在结肠腺瘤癌变过程中发挥一定的作用。

①A①B①C②A②B②C

图1 MTA1的表达：A.正常结肠黏膜中阴性；B.结肠癌中阳性；C.结肠腺瘤中阳性，SABC法 图2 RECK的表达：A.正常结肠黏膜中阳性；B.结肠癌中阴性；C.结肠腺瘤中阳性；SABC法

表3 MTA1、RECK表达与结肠癌临床病理特征的关系

RECK基因是1998年日本学者Takahashi等[11]在v-Kiras转染的NIH3T3细胞中发现的一种新的肿瘤抑制基因，其具有抑制基质金属蛋白酶表达与活性的功能。Morioka等[12]研究表明，RECK基因表达缺失的细胞周围黏连斑不能形成，细胞间连接遭受破坏；而对稳定细胞微管系统有显著作用的谷氨酸微管蛋白水平显著降低，明胶溶解功能增加，纤维粘连蛋白减少；同时，RECK基因表达降低的成纤维细胞在迁移过程中，其细胞极性消失，细胞定向迁移的稳定性显著减弱而迁移速度却明显增加。这说明RECK对于细胞形成和维持合适的细胞-细胞基质间粘连以及细胞的定向迁移具有调节作用；而在恶性肿瘤中，由于RECK基因表达缺失，这一功能被弱化。同时，RECK能在转录后水平抑制至少3种MMPs，即MMP-2、MMP-9及MTI-MMP，进而抑制肿瘤的血管形成及转移。近年来,研究显示RECK基因参与许多肿瘤的发生、发展，这些肿瘤包括肺癌、肝癌、头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌及膀胱异型细胞癌等[13-14]。并且该基因与恶性肿瘤的浸润、转移和预后密切相关。本组实验结果显示正常结肠组织、管状腺瘤、绒毛状腺瘤至结肠癌中RECK阳性率呈逐渐降低趋势，且中重度异型增生结肠腺瘤中RECK阳性率明显低于轻度异型增生结肠腺瘤。RECK在结肠癌中的阳性率随肿瘤临床Dukes分期的提高、淋巴结转移及肿瘤分化程度的降低而降低。在有淋巴结转移组(Dukes C+D组)明显低于无淋巴结转移组(Dukes A+B组)，差异有统计学意义。韩兵等[15]研究发现，RECK在结肠癌组织中的阳性率低于正常结肠组织。RECK表达与结肠癌浸润层次、淋巴结转移、Dukes分期呈明显负相关，与本组实验结果一致。由此可见MTA1、RECK参与正常组织、癌前病变、癌组织的发生、发展，在结肠腺瘤的癌变过程中起着重要作用。MTA1、RECK可能成为结肠癌基因治疗的靶点之一，为结肠腺瘤癌变的早期预防和临床靶向治疗提供科学依据。

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邢台市科技支撑计划项目(2014ZC157)

河北医科大学附属邢台市人民医院消化内科，邢台 054000

陈现亮，男，硕士，主治医师。Tel: (0319)3286143， E-mail: 125569317@qq.com

时间：2017-4-17 18:19

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170417.1819.018.html

R 735.3

A

1001-7399(2017)04-0432-04

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.04.018

接受日期：2017-01-13