化湿降浊方对高尿酸血症模型大鼠血尿酸、尿尿酸水平及肾功能的影响*

周 翔陈志亮熊秀林顾 宁△

（1.南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京 210029；2.南京中医药大学三附院，江苏 南京 210001；3江西中医药大学第一临床医学院，江西 南昌 330000）

·研究报告·

化湿降浊方对高尿酸血症模型大鼠血尿酸、尿尿酸水平及肾功能的影响*

周 翔1陈志亮2熊秀林3顾 宁2△

（1.南京中医药大学第一临床医学院，江苏 南京 210029；2.南京中医药大学三附院，江苏 南京 210001；3江西中医药大学第一临床医学院，江西 南昌 330000）

目的 观察化湿降浊方对高尿酸血症模型大鼠血尿酸、尿尿酸及肾功能的影响。方法 采用灌胃次黄嘌呤联合氧嗪酸钾腹腔注射方法复制高尿酸血症大鼠模型。以苯溴马隆为阳性药物对照，研究化湿降浊方（1.2 g/mL）对高尿酸血症大鼠血尿酸（UA）、尿UA、血清黄嘌呤氧化酶（XOD）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）的影响。结果 与空白组对比，模型组大鼠血UA、血清XOD的活性显著升高（均P＜0.01），尿UA水平下降（P＜0.01）。与模型组相比，中药组与苯溴马隆组都能不同程度地促进大鼠尿UA排泄、抑制血清XOD的活性以达到降低血UA的作用，其差异具有统计学意义（均P＜0.01）。中药组与苯溴马隆组都能不同程度降低模型大鼠异常的血清SCr、BUN水平，与模型组大鼠比较，差异均有统计学意义（均P＜0.01），且中药组较苯溴马隆组降低异常的血清SCr作用更明显（P＜0.01）。结论 灌胃次黄嘌呤联合氧嗪酸钾腹腔注射可以成功复制高尿酸血症模型大鼠；化湿降浊方可明显促进模型大鼠尿UA的排泄，具有抑制血清XOD的活性，从而达到降低血UA目的，并能一定程度改善异常的肾功能。

化湿降浊方 高尿酸血症 模型大鼠 血尿酸 尿尿酸 肾功能

高尿酸血症 （HUA）是指血尿酸水平超过正常（男＞420 μmol／L，女＞357 μmol／L）的一种状态，其发病机制与遗传背景 （如HGPRT/PRS等基因缺陷）、内分泌和环境因素等相关［1］。高尿酸状态可加重心血管事件发生，近年来，有大量流行病学证据和临床研究显示，HUA与心血管事件（高血压、冠心病、心肌梗死、心力衰竭等）的发病率及死亡率相关，是心血管事件的一项独立危险因素［3］，故高尿酸的早期干预，尤其是心血管疾病患者防治HUA的意义重大。回顾文献资料，关于中药或中西药联合治疗HUA均取得了较好的临床疗效。本研究建立HUA大鼠模型，观察化湿降浊方干预作用，初步探析化湿降浊方影响尿酸代谢的作用机制，为其临床应用提供一定实验依据。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 动物 雄性SD大鼠40只，体质量（180±20）g，购自浙江省实验动物中心，许可证号：SCXK（浙）2014-001。

1.2 药物试剂 1）化湿降浊方：泽泻25 g，土茯苓25 g，炒黄柏20 g，炒苍术15 g，猪苓10 g，川牛膝20 g。上述中药（饮片）加水煎，将化湿降浊方药物加水浸泡0.5 h，文火煎煮2次，每次40 min，合并2次水煎液，并过滤取药液，70℃恒温水浴，浓缩成每毫升药液含生药1.2 g，按化湿降浊方成人剂量计算每日60 mL，用蒸馏水配成所需浓度（1.2 g/mL），给药浓度为0.72 g/mL，置于4℃备用。2）苯溴马隆（世贸天阶制药有限责任有限公司，批号H20033683）压碎，加蒸馏水溶解配成0.5 mg/mL，4℃冰箱保存备用。3）氧嗪酸钾（OAPS）购自美国Sigma公司（STBC1486V）。4）次黄嘌呤（HX）购自上海阿拉丁生化科技有限公司（D1513017）。5）尿酸（20160704）、肌酐、尿素氮（批号20160613），黄嘌呤氧化酶（XOD）试剂盒（20160627），上述试剂盒均采自南京建成生物研究所。

1.3 仪器 7600全自动生化分析（日本日立公司）；低速自动平衡离心机 （KUBOTA Corporation-5420型）；FSH-Ⅱ高速电动匀浆机 （江苏金坛市环宇科学仪器厂）；光谱752紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；酶标仪（BIDRAD Corporation 680型）。

1.4 造模 选用尿酸前体物质次黄嘌呤和尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾联合应用的造模方法建立大鼠HUA病理模型［2］。造模灌胃予大鼠HX（30 g/L可溶性淀粉配制），体积为2 mL/kg，每日1次。第2日，除空白组外，各组大鼠继续给予OAPS（200 mg/kg，体积为1 mL/kg）腹腔注射，每隔48 h腹腔注射1次。

1.5 分组及给药 普通饲料适应性喂养1周后，将40只雄性SD大鼠随机分为4组，空白组10只，模型组10只，中药组10只，苯溴马隆组10只，大鼠造模同1.4制备HUA大鼠模型，至造模的第7日开始，中药组与别嘌呤醇组上午造模，下午灌胃给药1次，空白组、模型组均予等量0.9%氯化钠注射液灌胃，各组连续7 d。

1.6 指标检测 在造模给药第14日清晨将大鼠放入代谢笼，收集次日24 h尿，取新鲜尿样以3500 r/min离心15 min，取上清，通过全自动生化分析仪检测尿尿酸；收集尿液结束后禁食12 h，将各组大鼠腹腔注射水合氯醛（350 mg/kg）麻醉，由腹主动脉取血3～5 mL，加入抗凝剂，静置2 h后，离心（3000 r/min，15 min）后取上层清液，具体操作步骤按试剂盒说明进行。

1.7 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件处理。计量资料均以（±s）表示，多样本均数的两两比较采用单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组大鼠血清UA、尿UA、血清XOD的比较 见表1。与空白组比较，模型组大鼠尿UA显著降低，而血清UA、血XOD均显著升高（均P＜0.01），提示大鼠HUA模型制作成功。中药组与苯溴马隆组均能不同程度降低HUA模型大鼠血清UA、XOD水平，与模型组大鼠比较，差异均有统计学意义（均P＜0.01），其中苯溴马隆组降低血清UA的作用较中药组更为明显（P＜0.01），而中药组降低血清XOD的作用较苯溴马隆组更为明显（PP＜0.01）。中药组与苯溴马隆组大鼠尿UA水平，与模型组大鼠比较，均有不同程度地升高（均P＜0.01），其中苯溴马隆组排泄UA的作用较中药组更为明显（P＜0.01）。

表1 各组大鼠血清UA、尿UA、血清XOD比较（±s）

表1 各组大鼠血清UA、尿UA、血清XOD比较（±s）

与空白组比较，*P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.01；与苯溴马隆组比较，▲P＜0.01。下同。

组别 n 血XOD（U/L）血清UA（μmol/L） 尿UA（μmol/L）空白组 10 12.3±2.8模型组 10 27.8±5.1*苯溴马隆组 10 17.2±4.9△110.2±17.5 254.7±24.1 310.1±34.1*129.6±32.7*179±22.6△221.2±25.6△中药组 10 11.8±6.2△▲194±43.3△195.5±24.3△▲

2.2 各组大鼠血清Scr、BUN的比较 见表2。模型组大鼠血SCr、BUN水平较空白组均有不同程度升高（均P＜0.01），表明大鼠制作HUA模型后存在不同程度的肾功能异常。中药组与苯溴马隆组能不同程度降低HUA模型大鼠异常的血清SCr、BUN水平，与模型组大鼠比较，差异均有统计学意义（均P＜0.01），且中药组较苯溴马隆组降低异常的血清SCr作用更明显（P＜0.01）。

3 讨 论

中医学并无“高尿酸血症”相应的病名，历史上诸多医著中“痹证”“浊毒”“湿毒”等章节内容涉及于此，其主要形成与先天禀赋不足，肝、脾、肾三脏亏虚以致筋脉失养有关，或后天嗜食肥甘厚味，海鲜发物，久则损伤脾胃，脾失健运、酿湿生浊，湿浊蕴毒。又湿性黏滞，湿浊流注血脉，久而化热，内蕴化痰，痰湿胶结，腐伤血肉，形成痰浊瘀阻的病理基础。在充分参考文献资料和前期临床实践基础上，本课题组总结出 “湿浊内蕴”是形成HUA的病理基础，故以祛湿化浊，利小便为治法，自拟化湿降浊方。

表2 各组大鼠血清Scr、BUN比较（±s）

表2 各组大鼠血清Scr、BUN比较（±s）

组别 n SCr（μmol/L） BUN（mmol/L）空白组 10 103.9±28.9 27.6±17.2模型组 10 236.4±46.5*57.3±21.6*苯溴马隆组 10 206.9±22.3△48.2±14.6△中药组 10 149.6±31△▲36.6±23.8△

化湿降浊方中重用泽泻、土茯苓为君，以健脾化湿兼清热；黄柏味苦燥湿，助下焦泄浊以为臣；苍术、猪苓为佐药，苍术性辛苦温，可消痰水，逐皮间风水结肿；猪苓甘淡平，归肾经，善利尿消肿；川牛膝引药下行为使，兼能补肝肾，扶正固本。该方具有祛湿化浊、利尿消肿、清热通络之功。近来来，现代药理学表明：土茯苓［4］具有显著的降低血尿酸作用，对于肾功能有一定程度的改善作用，可减轻其全身炎症反应应激状态；亦有学者研究提示［5］黄柏与苍术的提取物对HUA小鼠起到明显降低尿酸水平作用，此外其他复方研究表明二妙丸、五子承气汤、活血四妙汤等均具有良好的降低血尿酸作用［6-8］。

现代医学表明，无症状HUA可以促进低密度脂蛋白胆固醇过氧化，促进血小板黏附、聚集，最终引起血栓形成，同时尿酸盐结晶沉积对血管内膜有着直接损伤作用［9］。Yu等［10］研究报道，尿酸可能通过有机阴离子转运体（OTA）进入人脐静脉内皮细胞，并快速诱导氧化应激反应，反过来进一步激活局部的肾素-血管紧张素系统，并产生血管紧张素Ⅱ，促进心室重塑过程。目前临床西药常用苯溴马隆作为降尿酸的主要药物，苯溴马隆主要具有抑制近曲肾小管对尿酸的重吸收作用，虽使尿尿酸排出增多，但常常易于导致尿酸盐晶体在尿路沉积［11］。由于短时间内大量尿酸结晶沉积于肾脏集合管、肾盂和输尿管，显微镜下可见管腔内尿酸结晶沉积，形成晶体或呈雪泥样沉积物，这些物质可导致输尿管梗阻或急性肾衰竭［12］。同时，无症状HUA合并肾脏病变的风险系数增高，肾损害的程度与血尿酸过高持续时间呈线性关系，导致肾脏纤维形成，肾小球硬化、动脉硬化及动脉壁增厚［13］，最终诱发心血管事件，包括心衰、高血压、冠心病等。

尿酸作为嘌呤代谢的最终产物，XOD是尿酸形成过程中关键酶，是调控尿酸生成的至关重要的因素。当嘌呤核苷酸经过代谢，转化为黄嘌呤，最终需经过XOD的氧化，转化为尿酸。人体内肝脏XOD的含量最高，其次是小肠［14］，因此抑制XOD活性是治疗HUA的主要机制之一，对于高尿酸的早期预防意义重大。

本实验采用灌胃次黄嘌呤联合腹腔注射氧嗪酸钾来复制高尿酸血症病理模型，次黄嘌呤作为外源性尿酸形成前体，可直接激活XOD的活性，转化尿酸，再联合尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾可减少尿酸分解，维持一定时间内的血尿酸浓度［15］。本次实验选择血UA、尿UA及血清XOD、肾功能作为检测指标，着重观察化湿降浊方促进尿酸排泄、抑制血清XOD活性，从而降低血UA水平及改善异常肾功能的干预效应。结果表明：化湿降浊方能够一定程度促进尿UA的排泄及抑制血清XOD活性、阻碍内源性尿酸的生成。血Cr和BUN作为肾功能重要指标，化湿降浊方可一定程度减轻HUA模型大鼠的肾损害。本研究结果为化湿降浊方的临床应用提供了一定的实验依据。

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Effect of HuaShi Jiangzhuo Decoction on Levels of Serum and Urine Uric Acid and Renal Function of Hyperuricemia Model Rats

ZHOU Xiang，CHEN Zhiliang，XIONG Xiulin，et al. The First Clinical MedicalCollege of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu，Nanjing 210029，China.

Objective：To observe the effect of Huashi Jiangzhuo decoction on hyperuricemia rat model and do the preliminary study of Huashi Jiangzhuo decoction to improve the uric acid metabolism.Methods：Hyperuricemia rat model was replicated by intragastric administration of hypoxanthine combined with potassium oxonate injection.Benzene bromine Malone was taken as positive drug control，the effect of Huashi Jiangzhuo decoction（1.2 g/mL）on serum uric acid（UA），urine UA，serum xanthine oxidase（XOD），blood urea nitrogen（BUN），creatinine（Scr）was oberved.Results：Compared with the control group，the model group significantly increased blood UA and serum XOD（P＜0.01）.Compared with the control group，traditional medicine group and benzene bromine Malone group effectively promoted urinary UA excretion，inhibited the activity of serum XOD in order to reduce the blood UA，the difference was significant（all P＜0.01）；traditional medicine group and benzene bromine Malone group decreased the abnormal serum Scr and content of BUN and the difference was significant（all P＜0.01）；the traditional medicine group did it better than the benzene bromine Malone group on decreasing the abnormal serum Scr，the difference was significant（all P＜0.01）.Conclusion：Intragastric administration of hypoxanthine combined with potassium oxonate by intraperitoneal injection can replicate hyperuricemia model rats successfully；Huashi Jiangzhuo decoction can obviously promote urinary UA excretion，inhibit the activity of serum XOD，reduce blood UA to protect the renal function，thus is worthy of further research and promotion.Gu Ning is the anthor of communication.

Huashi Jiangzhuo decoction；Hyperuricemia；Model Rats；Uric acid；Urine Uric Acid；Renal function

R285.5

A

1004-745X（2017）04-0588-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2017.04.007

2016-10-06）

江苏省中医药局科技项目（YB2015058）；南京市中医院科研项目（YJ201402）

△通信作者（电子邮箱：zx6214196@sina.com）