探讨模式液基薄层细胞学检测(TCT)技术和高危型HPV-DNA检测与宫颈病变的相关性

车洪智 马 飞 付玉荣 刘柯君 姜淑芳*

探讨模式液基薄层细胞学检测(TCT)技术和高危型HPV-DNA检测与宫颈病变的相关性

车洪智①马 飞②付玉荣①刘柯君①姜淑芳①*

目的：探讨模式液基薄层细胞检测(TCT)技术和高危型人乳头瘤病毒(HPV)-DNA检测与宫颈病变的相关性。方法：回顾性分析224例TCT异常患者资料，依据HPV-DNA检测结果将其分为A组(182例)与B组(42例)。A组患者HPV(HC2)检测阳性；B组患者HPV-DNA(HC2)检测阴性，两组以阴道镜下取活检病理结果为宫颈病变诊断的金标准进行比较。结果：A组患者筛查出宫颈上皮内瘤变(CIN)、鳞癌及腺癌121例(占66.48%)；B组患者筛查出CIN、鳞癌及腺癌17例(占40.48%)，两组比较差异有统计学意义(x2=9.758，P＜0.05)。结论：采用TCT技术联合HPVDNA(HC2)检测方法能够有效提高子宫颈病变的阳性检查率；随着宫颈病变级别的升高，HPVDNA的感染率也随之升高，两者联合对于宫颈病变的预防和早期诊治有重要的临床应用价值。

液基薄层细胞检测；高危型；人乳头瘤病毒-DNA；宫颈病变

车洪智,女,(1983- ),本科学历，主管检验师。解放军总医院妇产科，从事妇科疾病的常规检测工作。

宫颈癌在女性生殖系统恶性肿瘤中有很高的发病率，仅次于乳腺癌。近年来，随着人们生活方式的改变，发病人群有逐年上升和年轻化的趋势，而且发病率也在不断的提高[1-2]。由于宫颈癌是一种可防可治的疾病，癌前病变是个时间相对较长的过程，因此宫颈病变可以通过早期筛查和早期干预来实现[3-4]。早期宫颈癌患者的5年治愈率可高达90%，因此早期进行宫颈病变的筛查，对于宫颈病变的预防和治疗有着重要的意义[5]。基于此，本研究探讨模式液基薄层细胞检测(thinprep cytologic test，TCT)技术与高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)检测与宫颈病变的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2016年1-6月解放军总医院就诊的224例TCT异常患者资料，年龄20～67岁，平均年龄(35.2±6.3)岁。依据HPV-DNA检测结果将其分为A组(182例)与B组(42例)。A组患者HPV(HC2)检测阳性；B组患者HPV-DNA(HC2)检测阴性，两组患者均有性生活史，并均行阴道镜下宫颈组织活检，且两组比较无差异，具有可比性。

1.2 资料纳入标准

所有患者TCT异常，A组患者HPV-DNA(HC2)结果为阳性，B组患者为阴性；所有患者均行阴道镜下宫颈组织活检。

1.3 仪器与材料

TCT采用Thinprep2000(美国HOLOGIC公司)制片机制片；ZoomScope光学阴道镜(美国华莱士，WALLACH ZOOMSCOPE)；CX31显微镜(日本，OLYMPUS)；保存液为新柏氏PreservCyt Solution细胞保存液(北京豪洛捷有限公司)；HPV采用Hybrid Capture DML2000仪器进行检测，核酸检测试剂盒(德国QIAGEN公司)。

1.4 检测方法

(1)TCT诊断标准。按照贝塞斯达宫颈脱落细胞分类系统(the Bethesda system，TBS)分为：①未见上皮内细胞病变或恶性肿瘤(negative for intraepithelial lesion or malignancy，NILM)；②无明确诊断意义的非典型鳞状细胞(atypical squamous cells of undetermined signification，Asc-us)；③非典型腺细胞(atypical glandular cells，AGC)；④不能排除高级别鳞状上皮内病变的非典型鳞状上皮细胞(atypical squamous cells cannot exclude HSIL，Asc-H)；⑤低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesion，LSIL)；⑥高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesion，HSIL)；⑦鳞状细胞癌；⑧腺癌。涂片质量控制符合TBS-NCI标准，且患者在检查前7 d禁止性生活及阴道用药，处于非经期。ASC-US及以上为TCT异常。

(2)HPV-DNA检测。采用专用的HPV采集毛刷采集宫颈脱落细胞标本，用基因杂交捕获二代技术(HC2)检测13种HPV-DNA高危亚型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)，通过碱变性、基因杂交、捕获、化学发光以及信号放大等技术在分子水平定性定量检测病毒DNA，检测值＞1 pg／ml即判断为阳性，其原理如图1所示。

图1 HPV-DNA检测原理示意图

(3)宫颈活检及病理检测。采用窥器将宫颈全部暴露，进行醋酸和碘试验，最后在碘不着色的可疑区域多点取材送病理，病理结果根据病变程度分为炎症、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias，CIN)、鳞癌及腺癌四型。

1.5 统计学方法

应用SPSS22.0统计学软件进行数据处理，计数资料采用卡方检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 典型TCT图片

OLYMPUS显微镜镜下阅片所示：HSIL图片背景存在坏死物或癌性背景，细胞核异型性明显，如细胞核梭形深染，呈茄样变；鳞癌图片背景伴炎性细胞、坏死物及细胞碎片等癌性背景明显，细胞核增大，不规则染色质增多，粗颗粒分布不均匀，出现块状碳核。两种典型TCT结果如2图所示。

图2 HSIL和鳞癌典型图例(×400)

2.2 两组病理结果比较

A组182例患者进行阴道镜检查，其病理结果显示：炎症61例，CIN、鳞癌及腺癌121例；B组42例患者进行阴道镜检查，其病理结果显示：炎症25例，CIN、鳞癌及腺癌17例，两组比较差异有统计学意义(x2=9.758，P＜0.05)，见表1。

表1 两组病理结果比较[例(%)]

2.3 HPV-DNA感染与宫颈病变的关系

三项不同病理结果HPV阳性感染率：宫颈炎症患者86例，HPV-DNA阳性61例，阳性率为70.93%；宫颈CIN患者128例，HPV-DNA阳性111例，阳性率为86.72%；宫颈鳞癌及腺癌患者10例，HPV-DNA阳性9例，阳性率为90.00%。随着宫颈病变级别的升高，HPV-DNA的阳性率也升高，见表2。

表2 HPV-DNA检测不同宫颈病变阳性率

3 讨论

近年来，宫颈病变的筛查方法层出不穷，到目前为止，TCT和HPV-DNA(HC2)检测是两项比较先进成熟的筛查技术。超薄细胞学检测采用特制的宫颈刷在宫颈管内顺时针转5圈，采集宫颈鳞柱状交界处脱落上皮细胞，将收集到标本的毛刷放入盛有ThinPrep保存液的小瓶内漂洗，收集细胞，使用ThinPrep 2000全自动制片机制片。该项检测技术改变了常规涂片的操作方法，避免了常规涂片过程中所引起的细胞过度干燥造成的假象，也克服了细胞聚集重叠和干扰成分的缺陷，其操作简单，细胞分布均匀，图像清晰，提高了标本的满意度及宫颈异常细胞的检出率[6]。

流行病学和生物学资料已证明，HPV感染是宫颈病变的主要原因，有研究显示，95%的宫颈癌标本中均可发现HPV[7]。因此，在宫颈癌的筛查中HPV-DNA检测是非常有意义的指标，而HPV持续感染使患宫颈癌的相对危险性增加250倍[8]。大多数HPV感染为一过性，多数在8～10个月可自行清除[9]。但是，HPV持续感染和宫颈病变密切相关，所以通过检测HPV-DNA进行宫颈病变筛查具有重要的临床应用价值[10-13]。

基因杂交捕获方法检测HPV-DNA重复性好，特异度高，且准确，结果比较稳定，在国内外开展的越来越多。本研究中回顾性分析了224例患者，其中TCT异常、HPV-DNA(HC2)阴性，阴道镜下组织活检的宫颈病变的检出率为40.48%，而TCT异常、HPV-DNA(HC2)阳性，阴道镜下宫颈组织活检的宫颈病变的检出率为66.48%，提高了26%。有研究报道显示，TCT异常和阴道镜检查，宫颈病变检出率为39.13%，TCT异常、HPV-DNA阳性和阴道镜检查，宫颈病变检出率为57.69%，明显可以看出，通过HPV-DNA检测联合TCT技术筛查可以提高宫颈病变的检出率，与本研究结论一致。

TCT联合HPV-DNA检查，对于女性宫颈病变的早期筛查，可以提高患者的早期诊断以及治疗，减少漏诊情况的发生[14]。此种方法不仅高效便捷，而且能够有效提高宫颈病变的阳性检出率，对于宫颈病变的早期预防和诊治具有重要的临床应用价值。

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A discussion of the correlation between membrane type TCT in combination with HPV-DNA(HC2) detection and cervical lesions/

CHE Hong-zhi, MA Fei, FU Yu-rong, et al//
China Medical Equipment,2017,14(3):76-79.

Objective: To discuss the correlation between membrane type thinprep cytologic test (TCT) in combination with high risk human papilloma virus (HPV) (HC2) and cervical lesions. Methods: The 224 patients with abnormal TCT were divided into two groups ( A group, 182 cases, HPV (HC2) positive; B group, 42 cases, HPV (HC2) negative ) based on the detection results of HPV-DNA, and their documents were retrospectively analyzed. The pathological diagnosis results were taken as the golden standard to compare the two groups. Results: In A group, 121 cases were diagnosed as CIN, squamous carcinoma and adeno carcinoma (the percent was 66.48%); in B group, 17 cases were diagnosed as CIN, squamous carcinoma and adeno carcinoma (the percent was 40.48%); and there was statistical difference between them (x2=9.758, P＜0.05). Conclusion: The method of TCT in combination with HPV (HC2) can effectively improve the positive detection rate of cervical lesions, and the results reveal the infection rate of HPV increases with the increase of the cervical lesion grade. The combination of them is important in clinical application of the prevention, early diagnosis and treatment for cervical disease.

Thinprep cytology test; High risk; Human papilloma virus-DNA; Cervical lesions

1672-8270(2017)03-0076-04

R446.63

A

10.3969/J.ISSN.1672-8270.2017.03.021

2016-11-15

①解放军总医院妇产科 北京 100853

②沧州市中西医结合医院检验科 河北 沧州 061001

*通讯作者：jsf0912@aliyun.com

[First-author’s address] Department of Gynaecology and Obstetrics, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China.