IL-17基因多态性与胃癌易感性的关系

殷珍珍王晓燕姜相君

作者单位：266000 青岛1青岛大学医学院；2青岛市市立医院消化内二科；3青岛市市立医院国际门诊

基础研究

IL-17基因多态性与胃癌易感性的关系

殷珍珍1，2王晓燕3姜相君2

作者单位：266000 青岛1青岛大学医学院；2青岛市市立医院消化内二科；3青岛市市立医院国际门诊

目的 探讨白介素-17（Interleukin-17，IL-17）基因rs2275913、rs763780多态性与胃癌易感性的关系。方法 收集青岛地区355例汉族胃癌患者为胃癌组，同期进行健康体检的300名正常者为对照组，采集两组患者外周血，提取全血基因组DNA，PCR扩增目的基因片段，采用DNA直接测序法检测IL-17基因rs2275913、rs763780位点基因型，分析其位点多态性与胃癌易感性的关系。结果 胃癌组与对照组IL-17基因rs2275913位点基因型分布差异有统计学意义（χ2＝17.192，P＜0.001）。与GG基因型相比，携带AA基因型的个体胃癌发病风险增加，差异有统计学意义（χ2＝16.829，P＜0.05；OR＝2.891，95%CI＝1.721～4.857）；携带GA基因型的个体胃癌发病风险增加，但差异无统计学意义（χ2＝0.878，P＞0.05）。胃癌组与对照组相比，IL-17基因rs763780位点基因型分布差异无统计学意义（χ2＝1.381，P＞0.05）。结论 IL-17基因rs2275913 A等位基因的携带会增加青岛地区汉族人群胃癌发病风险，IL-17基因rs763780位点多态性与胃癌发病风险无明显相关性。

胃肿瘤；白介素-17（IL-17）；基因多态性；遗传易感性

胃癌是常见的恶性肿瘤，在全世界范围内发病率和病死率较高［1-2］。近年有关遗传易感性在胃癌发生发展过程中的作用得到越来越多的重视，但其具体致病机制尚不清楚。慢性炎症是导致疾病恶性转化的一个重要因素［3］。大量研究证明炎症相关基因的多态性可能与胃癌的发生发展有关，包括肿瘤坏死因子α（tumour necrosis factor-α，TNFα）、IL-1B、IL-1RN、IL-4、IL-6、IL-8和IL-10等［4-9］。白介素-17（Interleukin-17，IL-17）是一个新型细胞因子家族，包含IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和 IL-17F等6个蛋白成员。研究表明IL-17在慢性炎症性疾病及恶性肿瘤的发展过程中起重要作用［10］。rs2275913多态性位点位于IL-17A基因的启动子区，rs763780多态性位点位于IL-17F基因的外显子区。研究发现IL-17A和IL-17F在各种肿瘤组织中如乳腺癌、胃癌和非小细胞肺癌中呈过表达［11-13］。但目前有关IL-17与胃癌关系的研究结果不尽相同［14-17］。因此，本研究选取IL-17基因rs2275913、rs763780多态性位点，探讨其与胃癌发生发展的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集2014年12月至2015年12月于青岛市市立医院就诊的胃癌患者355例（胃癌组），所有患者均经组织病理学证实，并排除合并其他恶性肿瘤或器官功能障碍。同时选取同期青岛市市立医院健康体检中心的健康体检者300名为对照组，对照组与胃癌组患者的性别、年龄情况匹配。两组研究对象均为青岛地区汉族人群，且两组人群无血缘关系。外周血液标本采集均得到研究对象或其亲属的知情同意。研究方案经青岛大学医学临床学院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 全血基因组DNA提取 抽取研究对象清晨空腹外周静脉血液2 mL，置于EDTA抗凝管中，采用血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型，天根生化科技有限公司）提取受试者基因组DNA，用紫外分光光度检测DNA的浓度，将提取的DNA于－20℃冰箱保存。1.2.2 PCR扩增目的基因片段 以IL-17基因组序列为依据，设计IL-17基因rs2275913、rs763780位点PCR引物。rs2275913位点引物序列：上游引物为5'-GCCCTTCCCATTTTCCTTCAGA-3'，下游引物为5'-CCA ATCAACTGGGGATGGATGA-3'；rs763780位点引物序列：上游引物为5'-CTGTTTCCATCCGTGCAGGTC-3'，下游引物为5'-TGGTGACTGTTGGCTGCACCT-3'。PCR反应体系总体积25μL，含DNA模板4μL，上下游引物各1μL，10×Taq Plus Buffer 5μL，dNTP Mixture 4μL，Taq Plus DNA聚合酶（天根生化科技有限公司）0.5μL，加入ddH2O补足至25μL。PCR反应条件：预变性 95℃5 min；95℃变性30 s，62℃退火30 s，72℃延伸30 s，共35个循环；72℃终末循环10 min。取PCR产物2μL，行2%琼脂糖凝胶电泳。

1.2.3 DNA测序分析基因型 目的基因片段成功扩增后，采用ABI 3730测序仪（上海英潍捷基公司）进行测序。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行统计分析。对人群基因型频率分布进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验，组间比较采用χ2检验。采用χ2检验分析人口统计学和生活方式等特征及各基因型频率在胃癌组与对照组间差异。分析rs2275913、rs763780位点基因型与胃癌易感性的关系，以OR及95%CI表示相对危险度。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

355例胃癌患者中，男性199例，女性156例；300名健康对照人群中，男性162名，女性138名。胃癌组患者的平均年龄为（58.2±10.1）岁，对照组人群为（55.6±8.5）岁。胃癌组患者吸烟、幽门螺杆菌感染阳性的人数明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组饮酒人数差异无统计学意义（χ2=0.251，P=0.617）。见表1。

表1 两组一般资料比较［n（%）］

（续表）

2.2 IL-17基因rs2275913、rs763780位点基因型

IL-17基因rs2275913位点PCR扩增得到的目的片段长度为196 bp，测序显示有GG纯合型、GA杂合型和AA纯合型三种基因型；rs763780位点PCR扩增得到的目的片段长度为184 bp，测序显示有CC纯合型、CT杂合型和TT纯合型三种基因型。

2.3 Hardy-Weinberg遗传平衡检验

Hardy-Weinberg遗传平衡检验结果显示，胃癌组与对照组基因型频率的观察值与期望值差异无统计学意义（P＞0.05），提示IL-17基因rs2275913和rs763780位点基因型频率符合遗传平衡定律，所选样本具有青岛地区人群代表性。见表2。

2.4 IL-17基因多态性与胃癌易感性的相关性

胃癌组与对照组相比，IL-17基因 rs2275913位点基因型分布不同，差异有统计学意义（χ2=17.192，P＜0.001）；与GG基因型相比，携带AA基因型的个体胃癌易感性较高，差异有统计学意义（χ2=16.829，P＜0.05；OR=2.891，95%CI=1.721～4.857），携带GA基因型的个体胃癌发病风险增加（OR=1.172，95%CI=0.841～1.634），但差异没有统计学意义（χ2=0.878，P＞0.05）。胃癌组与对照组相比，IL-17基因rs763780位点基因型分布差异无统计学意义（χ2=1.381，P＞0.05）。见表3。

表2 IL-17基因rs2275913、rs763780位点基因型Hardy-W einberg遗传平衡检验

表3 IL－17基因位点基因型与胃癌发病风险的关系［n（%）］

3 讨论

大量研究证实慢性炎症与胃癌的发生发展有关［18-19］。IL-17作为一种重要的促炎细胞因子，可将单核细胞和中性粒细胞聚集至炎症反应的微环境中，通过各种细胞类型如间叶细胞和骨髓细胞，诱发多种细胞因子的产生及分泌趋化因子［20］。此外，IL-17在促进抗菌肽的表达及促进宿主防御感染中亦发挥重要的作用［21］。目前关于IL-17与胃癌的关系，多项研究认为IL-17可促进血管形成，促进肿瘤增殖和抑制凋亡，调控肿瘤的免疫应答，从而促进肿瘤发生发展。IL-17A和IL-17F是由Th17细胞表达，与调节局部组织炎症反应密切相关［22］。研究证实，在恶性肿瘤病变过程中，IL-17A和IL-17F在固有免疫和适应性免疫应答中起重要作用［23］，多项研究亦证实IL-17A和IL-17F参与胃癌的发展［24-25］。但对于IL-17A和IL-17F与胃癌发病风险之间的关系，不同的研究结果具有争议性。一项日本的研究证明IL-17A rs2275913 G＞A多态性与胃癌易感性相关，并影响胃癌的发展［26］。国内学者Zhang等［27］为探究IL-17基因多态性、幽门螺杆菌感染与汉族人群胃癌患病风险的关系，进行一项包含了260例胃癌患者和512名健康者的病例对照研究，测定IL-17基因三个启动子位点的基因型（rs2275913 G＞A、rs3748067 C＞T和rs763780 T＞C）。结果显示，rs2275913 AA基因型和rs3748067 TT基因型与胃癌发病风险增加相关。此外还观察到相对于幽门螺杆菌阴性的个体，携带rs2275913 AA基因型和rs3748067 TT基因型的幽门螺杆菌阳性个体罹患胃癌的风险明显增加。一项纳入7个独立病例对照研究，共3 210例胃癌患者和3 889名健康对照者的M eta分析结果显示，IL-17基因rs2275913 G＞A和rs763780 T＞C与亚洲人群胃癌发病风险有显著相关性［28］。然而一些研究却报道了相反的结果。Wu等［29］认为，在中国人群中，IL-17A rs2275913 G＞A基因多态性与胃癌易感性不相关；Gao等［30］在中国人群中的病例对照研究亦未发现IL-17A rs2275913 G＞A基因多态性与胃癌患病风险的相关性。以上研究结果的差异性可能与IL-17在不同人群中的基因型分布、研究设计以及样本量大小不同有关。

本研究采用病例-对照研究分析了IL-17基因rs2275913、rs763780位点多态性与胃癌发病风险的关联。研究结果显示，胃癌组rs2275913 AA基因型分布频率（19.4%）显著高于对照组（8.3%），风险基因型AA与胃癌易感性增加密切相关（OR＝2.891）。这提示rs2275913 A等位基因的携带可能会增加青岛地区汉族人群胃癌发病风险。本研究还发现rs763780位点CT基因型和TT基因型相对于CC基因型的胃癌发病风险增加，但是两组基因型分布频率差异无统计学意义（P＞0.05），提示rs763780位点多态性与青岛地区汉族人群胃癌易感性无明显相关性。但本研究样本量较小，这可能限制了相关性的统计功效，存在一定局限性。此外，IL-17基因多态性对胃癌易感性的作用可能被潜在的其他因子影响，因此有关结论尚需进一步验证。

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［2016-11-23收稿］［2017-01-28修回］［编辑 罗惠予］

Relationship between IL-17 gene polymorphism and gastric cancer

Yin zhenzhen1，2，Wang Xiaoyan3，Jiang Xiangjun2（1Medical College of Qingdao University；2Department of GastroenterologyⅡ，Qingdao Municipal Hospital；3International Clinic，Qingdao Municipal Hospital，Qingdao 266000，P.R.China）

Jiang Xiangjun.E-mail：drjxj@163.com

Objective To investigate the role of Interleukin-17（IL-17）single-nucleotide polymorphisms（SNPs）rs2275913 and rs763780 in the development of gastric cancer.M ethods A total of 355 Han Chinese patients with gastric cancer and 300 healthy Han Chinese controls were enrolled from the Qingdao area.Genomic DNA was extracted from peripheral blood，and rs2275913 and rs763780 genotypes were determined using PCR-based DNA sequence analysis and direct DNA sequencing.Relationships between the sequences and risk of gastric cancer were explored.Results Frequencies at IL-17 rs2275913 differed significantly between the cancer group and healthy group（χ2=17.192，P＜0.001）.Subjects with the AA genotype were obviously more susceptible to gastric cancer than those with the GG genotype（χ2=16.829，P＜0.05；OR=2.891，95%CI=1.721-4.857）.The GA genotype was associated with an increased risk of gastric cancer relative to the GG genotype，but the trend did not achieve significance（χ2=0.878，P＞0.05）. Frequencies at IL-17 rs763780 were similar between the cancer group and healthy group（χ2=1.381，P＞0.05）.Conclusions The A allele of IL-17 rs2275913 is associated with increased susceptibility to gastric cancer in Han Chinese from Qingdao.IL-17 rs763780 SNPs show no association with risk of gastric cancer.

Gastric neoplasms；Interleukin-17；Gene polymorphisms；Susceptibility

R735.2

A

1674-5671（2017）01-05

10.3969/j.issn.1674-5671.2017.01.10

青岛市市南区科技发展资金资助项目（2014－14－040－YY）

姜相君。E-mail：drjxj＠163.com