B族链球菌核酸检测在产前筛查中可行性研究

张龙绘+李利+刘睿

[摘要] 目的 探讨B族链球菌核酸检测在产前筛查中的可行性。方法 将2012年4月～2016年8月期间于我院产检的1000例孕妇作为研究对象，于35～37孕周期间采集孕妇肛周及阴道分泌物后做PCR检测与细菌培养，分别比较两种方法对B族链球菌的阳性检出率，随后分别抽取B族链球菌阳性与阴性各100例孕妇，比较两组的分娩方式、新生儿并发症、产妇并发症发生情况。结果 PCR检测方法的阳性检出率为8%（80/1000），明显高于细菌培养检测方法的阳性检出率4%（40/1000）；阳性组产妇产后出血、早产、胎膜早破及新生儿窒息、败血症、感染等并发症发生率均高于阴性组（P<0.05）。结论 应用PCR检测方法能够提高B族链球菌的阳性检出率，尽早对B族链球菌为阳性的孕妇采取恰当的干预措施，可降低母婴并发症发生率，保证母婴健康平安。

[关键词] B族链球菌；产前筛查；可行性；研究

[中图分类号] R715.3 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2017）06-64-03

[Abstract] Objective To explore the feasibility of B-streptococcal nucleic acid detection in prenatal screening. Methods 1000 pregnant women tested in our hospital from April 2012 to August 2016 were selected as the subjects. After 35-37 gestational weeks， the perianal and vaginal secretions were collected for PCR and bacterial culture. The positive rate of B-type streptococcus was determined by the two methods. Then， 100 pregnant women with positive and negative B streptococcus were randomly selected. The delivery mode， incidence of neonatal complications and maternal complications were compared between the two groups. Results The positive detection rate of PCR was 8%（80/1000）， which was significantly higher than that of bacterial culture test （4%， 40/1000）. The positive group had postpartum hemorrhage， premature labor（P<0.05）. The incidence of neonatal asphyxia， sepsis and infection is higher than that of negative group（P<0.05）. Conclusion PCR detection method can improve the positive rate of B streptococcus， as soon as possible on the B group of streptococcus positive pregnant women to take appropriate intervention measures. It can reduce the incidence of maternal and child complications， to ensure maternal and child health and safety.

[Key words] Group B Streptococcus； Prenatal screening； Feasibility； Research

分娩過程中，引起产妇与新生儿一并出现感染的病菌主要是B族链球菌（GBS）[1]，它属于革兰阳性菌，已有研究表明[2]，B族链球菌呈阳性和母婴结局、胎膜早破等现象有密切相关，检测孕妇B族链球菌是保证母婴健康、安全的重要手段[3]。早在20世纪90年代，CDC便制订了B族链球菌的检测、筛查及处理指南[4]，AAP、ACOG提倡怀孕35～37周的孕妇进行B族链球菌的产前筛查[5]，并对阳性者及早干预，把产妇的产褥病发病率及新生儿败血症感染率控制在最低范围内[6]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究对象为2012年4月～2016年8月期间于我院产检的1000例孕妇，纳入标准：单胎妊娠、无流产、死胎病例，对本研究内容知晓且自愿参与者。排除两周内有夫妻生活者、使用抗生素者。孕妇孕周35～37周，年龄24～40岁，平均（29.3±3.2）岁；初产妇832例、经产妇168例。1000名产妇全部接受B族链球菌感染的产前筛查，将检测出的B族链球菌呈阳性的100例孕妇作为阳性组，再随机抽取100例B组链球菌为阴性的孕妇作为阴性组。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

标本采集：将孕妇外阴分泌物擦拭干净，在阴道内小心插入两根拭子，旋转一周采集位于阴道1/3处的分泌物，之后在肛门内插入拭子，于肛门括约肌上缘2～3cm处旋转一周采取直肠标本，标本采集完成后分别进行PCR检测与细菌培养。

PCR检测：使用Vortex振荡器将带有拭子的标本运输液管快速震荡均匀，之后从均匀的运输液中提取悬浊液，将其置于1.5mL的离心管内，13000转离心5min，弃上清后在离心管内倒入1mL拭子浸泡液，混合均匀后再次13 000转离心5min，弃上清后用50?L的拭子浸泡液重悬。将一管提取固形物置于菌液中，采用95℃干浴2min，之后高速震荡5min后瞬时离心；加入10?L内参照，95℃干浴2min后立刻冰浴备用。

细菌培养：在5%羊血培养基里放入标本，温度保持在35℃，培养时间为18h～1d，把可疑的圆形、灰白色的细菌取出后做接种培养，培养时间16h左右，应用细菌鉴定仪鉴别细菌的种类。

1.3 观察评定标准

比较PCR检测与细菌培养对B族链球菌的阳性检出率[7]；比较阳性组孕妇、阴性组孕妇的母婴并发症、分娩方式[8]。GBS阳性判断标准：FAM荧光信号有明显S形扩增曲线，CT值<33，Texas Red（内参）CT值<40，且本批实验阳参、阴参的检测结果与预期相符[9]。

1.4 统计学方法

本研究应用SPSS19.0统计学软件进行处理，计量资料以（）表示，组间比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，组间比较进行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PCR检测、细菌培养对GBS的阳性检出率比较

PCR检测法，检出GBS阳性80例、GBS阴性920例，检出率8%；细菌培养法，检出GBS阳性40例、GBS阴性960例，检出率4%（P<0.05），见表1。

2.2 GBS阳性组与阴性组孕妇的分娩方式比较

GBS阴性组剖宫产20例、顺产72例、产钳助产8例；GBS阴性组剖宫产18例、顺产73例、产钳助产80例（P>0.05），见表2。

2.3 GBS阳性组与阴性组母婴并发症发生率比较

GBS阳性组孕妇产后出血20例、早产17例、胎膜早破15例；GBS阴性组孕妇产后出血7例、早产6例、胎膜早破8例（P<0.05）；GBS阳性组新生儿感染16例、窒息8例、败血症4例，GBS阴性组新生儿感染6例、窒息2例、败血症1例，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

3 讨论

检测B族链球菌通常有两种方法，第一种是常规的细菌培养孕妇的直肠和阴道拭子，但越来越多的学者发现细菌培养极易出现GBS假阴性[10]，通过培养基来培养筛查细菌是妇产科协会推荐的方法，也是目前检测B族链球菌感染的常规手段，但细菌培养需要的时间比较长，要鉴定出阳性至少需要2d，如果鉴定阴性至少需要3d，而且细菌培养的免疫学敏感性会受到细菌量的影响[11]，如果细菌量不足就很难检测出GBS阳性，因此临床检测中漏诊现象时有发生。对产妇采取GBS检测，鉴于对B族链球菌携带的间歇性、暂时性特点的考虑，妊娠中期即使B族链球菌的检测呈阴性，那么到了妊娠晚期或者分娩期，孕妇仍有15%～20%的几率是B族链球菌呈阳性[12]。所以B族链球菌感染的检测和筛查最好在孕妇怀孕35～37周进行，由于常规的细菌培养检测漏诊情况较多，孕妇又面临分娩，所以临床需要一种方便、准确、耗时短、灵敏性高的B族链球菌检测方法。历经多年的改进，PCR核酸扩增检测技术已经从最初的定性诊断过度到现在的半定量、定量诊断，伴随核酸荧光标记技术不断进步，如今在B族链球菌的临床诊断中通常都会借助荧光定量PCR技术进行辅助检测[15]。有研究表明[16]：PCR在懷孕37周后的孕晚期B族链球菌的检测中极为关键，该技术有安全、高效、准确等诸多优点，核酸提取后仅需要2～4h就能得到检测结果，真正意义上实现了B族链球菌感染的高效筛查。本研究中，细菌培养检测出的B族链球菌阳性率为4%，而应用PCR技术检测出的B族链球菌阳性率则为8%，两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。

GBS感染极易导致产妇出现早产、羊膜腔感染、产褥感染、胎膜早破等并发症，还能让新生儿出现败血症、窒息、感染等问题。GBS对绒毛膜的穿透力和吸入能力非常强，已经成为医学界公认的导致羊膜腔感染及胎膜早破的致病菌，孕妇出现这些并发症之后，极易引发子宫腔感染，促进子宫收缩，继而导致晚期流产或早产等问题。GBS感染后，孕妇从下消化道开始、通过泌尿道、阴道和宫颈上行对胎膜造成感染，细菌产生的蛋白水解酶、炎症细胞的吞噬会让胎膜张力降低，随之造成胎膜破裂。与此同时，B族链球菌感染还会导致绒毛膜羊膜炎，引起胎膜绒毛水肿，最终造成胎膜早破。本研究中，GBS阳性组孕妇早产、产后出血及胎膜早破的发生率明显高于GBS阴性组（P<0.05）。综上所述，应用PCR检测方法能够提高B族链球菌的阳性检出率，尽早对B族链球菌为阳性的孕妇采取恰当的干预措施，可降低母婴并发症发生率，保证母婴健康平安。

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（收稿日期：2017-01-18）