Notch信号通路在胶质瘤干细胞上皮间充质转化中的意义

田 伟，张 娟

（邯郸市中心医院，河北 邯郸 056001）

Notch信号通路在胶质瘤干细胞上皮间充质转化中的意义

田 伟，张 娟

（邯郸市中心医院，河北 邯郸 056001）

目的探索Notch信号通路在胶质瘤干细胞上皮间充质转化中的意义，以期为临床提供实践价值。方法选取我院2015年1月～2016年12月间接治的30里人脑胶质瘤手术患者作为本次研究对象，利用免疫磁珠法对人脑胶质瘤干细胞进行提取和分离，并进行体外细胞培养，同时利用免疫组法以及荧光定量PCR对相关指标进行检测，探索Notch信号通路在胶质瘤干细胞上皮间充质转化中机制。结果经分析对比发现，正常脑组织的NOTCH-1蛋白阳性区域分析发现，其蛋白雷击光密度值为（296.1±28.4），低度恶性胶质瘤患者的NOTCH-1蛋白累积光密度为（5038±119.8），高度恶性胶质瘤患者的NOTCH-1蛋白累积光密度为（12001±137.8）.相比于正常脑组织患者而言，高度和低度恶性胶质瘤患者的NOTCH-1蛋白表达水平明显偏高，且高度恶性胶质瘤患者明显高于低度恶性胶质瘤患者NOTCH-1蛋白表达水平，NOTCH-1、CBF-1以及HES-1基因在CD133+中表达水平均明显高于在CD133-胶质瘤细胞，上述差异显著（P＜0.05），具有统计学意义。结论Notch信号通路在胶质瘤干细胞上皮间充质转化中的表达水平高，在人脑胶质瘤干细胞增殖过程中对NOTCH-1、CBF-1以及HES-1等关键基因具有重要的调控作用，对于治疗胶质瘤具有积极的意义。

Notch信号通路；胶质瘤；干细胞上皮间；意义

Notch基因在不同脊椎动物和无脊椎动物中均具有较高的表达，且在基因结构上具有较强的保守性，对于细胞发育以及增值分化过程中具有较强的调节作用。临床医学研究发现，在神经干细胞以及前体细胞分化增殖过程中，NOTCH-1信号通路发挥关键作用。而针对Notch信号通路在胶质瘤干细胞上皮间充质转化中的相关研究较少。为此，本文选取我院接治的30例人脑胶质瘤患者作为本次研究对象，利用免疫磁珠法对人脑胶质瘤干细胞进行提取和分离，并进行体外细胞培养，同时利用免疫组法以及荧光定量PCR对相关指标进行检测，探索Notch信号通路在胶质瘤干细胞上皮间充质转化中机制。具体研究报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2015年1月～2016年12月间接治的30里人脑胶质瘤手术患者作为本次研究对象，其中男性17例，女性13例，年龄在23～68岁，平均年龄为（43±3.1）岁，低度恶性胶质瘤和高度恶性胶质瘤患者分别为15例。此外选择同期20例接受颅内减压术治疗患者的正常新鲜脑组织作为参照，其中本次研究所用的CHG-5胶质瘤细胞株以及U251恶性胶质瘤细胞株均由我院细胞室培养。

1.2 方法

利用免疫磁珠法对人脑胶质瘤干细胞进行提取和分离，并进行体外细胞培养，同时利用免疫组法以及荧光定量PCR对相关指标进行检测。具体包括以下内容：①细胞培养：采用免疫磁珠法对胶质瘤新鲜样本、CHG-5以及U251细胞株进行分选，随后在实验室培养分离出的胶质瘤干细胞，并将含血清培养基和无血清培养基内加入细胞培养液，每瓶细胞数控制在1×105个，培养温度设定在37℃，二氧化碳浓度控制在5%、湿度控制在95%，培养基换液时间每隔2天一次，持续培养5d，待细胞传代并生长正常后进行后续实验；②NOTCH-1信号通路基因表达检测：借助荧光定量PCR法检测NOTCH-1信号通路相关基因检测，同时对胶质瘤干细胞的总RNA进行Trizol法予以提取，对HES-1、NOTCH-1以及CBF-1基因进行检测，其中选取GAPDH作为内参基因；③检测NOTCH-1蛋白的表达：对正常人脑组织标本以及人脑胶质瘤组织进行病理学冰冻切片，采用SBC方法免疫组化染色NOTCH-1蛋白，待染色完成后，借助显微镜对其进行切片检测，其中阳性区域为棕黄色，并对阳性区域进行ImagProPlus6.0测定其累计光密度值。

1.3 疗效评价标准

对比分析正常人脑组织中的NOTCH-1蛋白表达与人脑胶质瘤组织NOTCH-1表达，同时对NOTCH-1信号通路相关基因在人脑胶质瘤干细胞增殖过程中的表达情况。

1.4 统计学分析

本次研究全部数据采用统计学软件SPSS 21.0处理分析，其中计数资料采用x2检验，计量资料采用（s）表示，并以t检验，其中组间差异显著（P＜0.05），表示具有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同脑组织切片蛋白表达对比

经分析对比发现，正常脑组织的NOTCH-1蛋白阳性区域分析发现，其蛋白雷击光密度值为（296.1±28.4），低度恶性胶质瘤患者的NOTCH-1蛋白累积光密度为（5038±119.8），高度恶性胶质瘤患者的NOTCH-1蛋白累积光密度为（12001±137.8）。相比于正常脑组织患者而言，高度和低度恶性胶质瘤患者的NOTCH-1蛋白表达水平明显偏高，且高度恶性胶质瘤患者明显高于低度恶性胶质瘤患者NOTCH-1蛋白表达水平，上述差异显著（P＜0.05），具有统计学意义。

2.2 人脑胶质瘤干细胞增殖过程中NOTCH-1信号通路在上皮间充质转化情况

随机抽取2株胶质瘤细胞，对比同株胶质瘤分离得到的CD133-胶质瘤细胞。其中两株胶质瘤细胞均来源于病例分型，分别为多形性胶质母细胞瘤Ⅳ级和星型细胞瘤Ⅱ级，此外对比CHG-5细胞株以及U251细胞株，结果统计发现，NOTCH-1、CBF-1以及HES-1基因在CD133+中表达水平均明显高于在CD133-胶质瘤细胞，且差异显著（P＜0.05），具有统计学意义。见表1。

表1 NOTCH信号通路人脑胶质瘤干细胞上皮间充质转化情况（s）

表1 NOTCH信号通路人脑胶质瘤干细胞上皮间充质转化情况（s）

类别 NOTCH-1 HES-1 CBF-1 CD133- CD133+ CD133- CD133+ CD133- CD133+星型细胞瘤Ⅱ级 1.0 5.5±1.3 1.0 6.0±0.8 1.0 7.4±1.5多形性胶质母细胞瘤Ⅳ级 1.0 6.0±1.2 1.0 4.8±1.0 1.0 4.6±0.7 U251细胞株 1.0 7.8±1.6 1.0 4.1±0.7 1.0 4.3±0.8 CHG-5细胞株 1.0 10.4±1.8 1.0 4.7±1.1 1.0 5.1±0.9

3 讨 论

胶质瘤是临床上一种危害性较大的中枢神经系统恶性肿瘤，且病情恶化迅速，对患者的生命带来极大的威胁。但临床对于胶质瘤的治疗通常包括化疗、放疗以及外科手术或者免疫抑制治疗等方法，且效果不甚理想。为进一步探索NOTCH信号通路在胶质瘤干细胞上皮间充质转化中的机制，从而为治疗人脑胶质瘤提供新的解决方案。通过本文的研究不难发现，比于正常脑组织患者而言，高度和低度恶性胶质瘤患者的NOTCH-1蛋白表达水平明显偏高，且高度恶性胶质瘤患者明显高于低度恶性胶质瘤患者NOTCH-1蛋白表达水平（P＜0.05），NOTCH-1、CBF-1以及HES-1基因在CD133+中表达水平均明显高于在CD133-胶质瘤细胞，且差异显著（P＜0.05），Notch信号通路在胶质瘤干细胞上皮间充质转化中的表达水平高，在人脑胶质瘤干细胞增殖过程中对NOTCH-1、CBF-1以及HES-1等关键基因具有重要的调控作用，对于治疗胶质瘤具有积极的意义。

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本文编辑：吴玲丽

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ISSN.2095-8242.2017.010.1859.02

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