党参可溶性粉的薄层色谱鉴别

乔美娟，晏永新，孙娜，孙耀贵，刘旭东，张向杰，李宏全

（1.山西农业大学动物科技学院，山西省新型中兽药协同创新基地，山西太谷030801；2.江西新世纪民星动物保健品有限公司，江西南昌330096；3.太原恒德源动保科技开发有限公司，山西太原030027；4.山西博锐生物工程有限公司，山西太原030031）

党参可溶性粉的薄层色谱鉴别

乔美娟1，晏永新2，孙娜1，孙耀贵1，刘旭东3，张向杰4，李宏全1

（1.山西农业大学动物科技学院，山西省新型中兽药协同创新基地，山西太谷030801；2.江西新世纪民星动物保健品有限公司，江西南昌330096；3.太原恒德源动保科技开发有限公司，山西太原030027；4.山西博锐生物工程有限公司，山西太原030031）

为了优选党参可溶性粉党参药材的薄层鉴别方法，建立其质量标准。以党参为对照药材，按照《中国兽药典》（2010版二部）附录方法，对党参可溶性粉进行薄层鉴别；通过不同前处理方法、展开系统和显色方法对党参可溶性粉中党参药材的鉴别，从中优选出党参可溶性粉的薄层鉴别条件。以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液为显色剂。结果表明，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品与党参对照药材在相应位置显相同颜色的污绿色斑点。优选出的方法可行性强、重复性好、专属性强，可以作为党参可溶性粉质量标准的薄层色谱鉴别方法。

党参可溶性粉；薄层色谱；质量标准

党参为桔梗科植物党参的干燥根，主产于山西、陕西、四川、甘肃及东北地区[1]，具有健脾益肺、养血生津之功效[2-3]。党参主要含有多糖及糖苷类、甾醇类、挥发油、生物碱类、三萜类、诸多必需氨基酸和无机元素等化学成分[4-5]，其中，主要含有党参皂苷和党参多糖等活性成分。党参多糖具有免疫增强[6-10]、抗应激[11]、抗氧化[12-13]和抗炎、增强胃肠道功能[14]等药理作用，在畜禽养殖的治疗与疾病预防上具有广泛的应用价值。目前，国内外迫切要求解决因滥用抗生素、化学药物和激素类药物所带来的肉、蛋、奶畜产品中药物残留的问题，中药制剂具有毒副作用小、增强机体免疫力、不易产生耐药性等诸多优点，具有广阔的市场前景。

党参在兽医临床中的用途很广，并已运用到绿色饲料添加剂中，以提高动物生产性能。以党参为主组成的方剂广泛应用于兽医临床中[15]，如参苓白术散、理中散、健鸡散和七补散等。近年来，党参制剂研制开发不多，主要以复方散剂的配伍开发为主，存在服用量大、有效成分利用低等问题。山西省新型中兽药协同创新基地实验室主要针对党参药材中党参多糖成分进行提取，采用现代先进的提取精制工艺，大大提高了有效成分的含量，该产品特点是使用剂量小、生物利用度高，并将其制成便于拌料与饮水的可溶性粉新剂型。经临床试验证明，党参可溶性粉具有增强机体免疫、抗氧化、抗应激、抗菌、抗病毒作用。随着兽药管理制度的不断完善，兽药产品的检验也更为全面与严格，高效液相技术和薄层色谱技术应用广泛。

本研究对党参可溶性粉中党参药材薄层色谱鉴别方法进行优化，旨在为党参可溶性粉申报三类新兽药制定党参药材的薄层色谱鉴别质量标准提供依据。

1 材料和方法

1.1 材料

党参（批号：121057—201206，供鉴别用，购自中国食品药品检定研究院）；党参可溶性粉（20150901，20150902，20150903，亳州市乾元动物药业有限责任公司）。

1.2 仪器

分析天平（CP225D型，Sartorius）；HH数显恒温水浴锅（HH-56型，江苏金坛市金城国胜实验仪器厂）；超声波清洗机（SB25-12D型，宁波新芝生物科技股份有限公司）；薄层色谱半自动点样仪（Linomat 5型，camag）；薄层色谱成像系统（Visualizer型，camag）；数控薄层显色加热器（TH-II型，上海科哲生化科技有限公司）；电动喷雾器（camag）；电热恒温干燥箱（KH-75AS型，康恒仪器有限公司）。

1.3 药剂

硅胶板（G型，青岛海洋化工有限公司）；正丁醇、甲酸、乙酸乙酯和三氯甲烷等试剂均为分析纯。

1.4 试验方法

1.4.1 供试品溶液的制备称取党参可溶性粉1 g，加稀盐酸20 mL、三氯甲烷30 mL，加热回流1 h，放冷，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷30 mL提取一次，合并三氯甲烷液，挥干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

1.4.2 对照药材溶液的制备称取党参对照药材2 g，加水50 mL，煎煮30 min，过滤，滤液浓缩至近干，加稀盐酸20 mL、三氯甲烷30 mL，加热回流1 h，放冷，分取三氯甲烷液，酸液再用三氯甲烷30 mL提取一次，合并三氯甲烷液，挥干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。

1.4.3 展开与显色吸取上述2种溶液各10 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

1.4.4 供试品薄层色谱鉴定取中试生产的3批供试品（批号：20150901，20150902，20150903），按

1.4.1 方法制备供试品溶液。照1.4.3方法进行展开与显色，置日光下检视。

2 结果与分析

2.1 确定提取方法和展开条件

图1供试品色谱中，斑点为灰色，样品与对照药材条带分离度均较差，且有拖尾现象，故不将其作为薄层试验方法；图2供试品色谱中，只有三氯甲烷样品处理组出现特征斑点，其余样品及对照药材处理组均未出现特征性斑点，且硅胶板易烤糊，故不将其作为薄层试验方法；图3供试品色谱中，对照药材色谱中斑点拖尾严重，呈条状且未出现特征斑点，分离效果差，故不将其作为薄层试验方法；图4供试品色谱中，供试品处理组可观察到2个明亮的黄色荧光点，对照药材相对应的斑点较暗且不清晰，增大对照药材点样量后斑点拖尾，故不将其作为薄层试验方法；图5供试品色谱中，供试品处理2组与对照药材处理2组对应位置处均可见一清晰斑点，背景颜色无干扰，可以作为党参可溶性粉党参定性鉴别的标准方法。

2.2 供试品点样量确定

为确定供试品与对照药材的点样量，本试验依次吸取供试品溶液2，5，10，15，20 μL，对照药材溶液10 μL进行点样，结果如图6所示。展开显色后发现，当供试品溶液点样量与对照药材溶液点样量一致，均为10μL时，斑点清晰且分离度较好。因此，将供试品与对照药材溶液的点样量均定为10 μL。

2.3 供试品薄层色谱鉴定

3批样品的供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的污绿色主斑点；鉴别图中斑点清晰，分离度好，3批样品与党参对照药材的Rf值依次为：0.298，0.297，0.295，0.303，0.307，相互之间无显著差异（图7），可以作为党参可溶性粉的党参药材薄层鉴别方法。

3 讨论与结论

《中国兽药典》对党参药材的薄层色谱鉴定的前处理需要使用D101型大孔吸附树脂柱，为了使试验操作更简洁，结合该药品的特点及文献报道，选取加热回流、超声、振摇提取等4种前处理方法、5种展开系统进行了考察。其中，以正己烷超声20min作为提取处理1组，以样品的水溶液经水饱和的正丁醇振摇提取的方式作为处理4组，发现这2个方法样品提取浓度低，斑点不易显现或颜色很浅，加大点样浓度后斑点易扩散、拖尾；乙醇回流提取作为处理3组，发现样品溶液斑点多成条状，以上3组均不适宜作为本试验样品的提取方法，最终选择了酸化的三氯甲烷液进行回流提取的处理2组方法。同时，结合试验结果，党参对照药材的前处理先经水回流提取后，再用酸液提取效果更好。

本研究参照文献[16-19]的试验方法考察了三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水（3∶8∶5∶2）、三氯甲烷-甲醇-水（11∶6∶2）的下层液、甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15∶5∶2）、乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）4个展开系统，结果显示，以前3种展开效果均不理想，最终考察选择三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸[20]（20∶4∶0.5）作为展开剂，斑点清晰，且易于显现。同时，结合显色剂喷洒流利程度、斑点显色时间以及背景与目标斑点对比度3个方面发现，10%硫酸乙醇溶液显色后背景无色，105℃稍加热即可显现污绿色的目标斑点，对比强烈，与10%磷钼酸溶液和5%硫酸乙醇溶液相比，更适宜作为本品的显色剂。

同时，试验对所建立的党参薄层色谱鉴别方法进行了耐用性试验，在23～29℃，44%～58%温湿度条件下对不同厂家的薄层板进行考察，结果显示，分离效果均较好。经反复试验证明，本试验方法目标斑点清晰，背景无干扰，供试品溶液色谱相互之间无显著差异，重现性较好，可将其作为党参可溶性粉申报三类新型兽药的质量标准，也可作为党参提取制剂的薄层色谱定性检测的参考方法。

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Identification of Water-soluble Dangshen Powder by TLC

QIAOMeijuan1，YANYongxin2，SUNNa1，SUNYaogui1，LIUXudong3，ZHANGXiangjie4，LI Hongquan1
（1.College ofAnimal Science and VeterinaryMedicine，Shanxi Agricultural University，NewType ofCooperative Innovation Base ofChinese VeterinaryDrugs in Shanxi，Taigu 030801，China；2.Jiangxi NewCenturyStar Animal Health Products Co.，Ltd.，Nanchang330096，China；3.Taiyuan Hengdeyuan Animal Health&TechnologyCo.，Ltd.，Taiyuan 030027，China；4.Shanxi Borui Biological EngineeringCo.，Ltd.，Taiyuan 030031，China）

Theaim of this study was to optimize the thin-layer chromatography（TLC）method of water-soluble Dangshen powder（WSDP）and toprovide basis for the establishment ofits qualitystandard.The WSDP was determined byTLC method in accordance with the standards in the appendix of Chinese Veterinary Pharmacopoeia（2010 Edition,2nd Section）and Dangshen was as a control. Dangshen contained from WSDP was identified and the TLC conditions were optimized via different pretreatment methods,developing systems and coloration methods.Under the condition of TLC with Chloroform-ethyl acetate-formic acid（20∶4∶0.5）as a developing solvent,10%alcoholic solution of sulfuric acid as a chromogenic reagent.The results showed that the samples showed clear dark green spots at 105℃in the same position with the control′s.The optimized TLC condition could be used as an identified method for WSDP qualitystandard with the advantages ofhigh feasibility,better repeatabilityand specific.

water-soluble Dangshen powder;thin-layer chromatography（TLC）;qualitystandard

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.05.15

S567.5＋3

：A

：1002-2481（2017）05-0732-04

2017-02-21

农业科技成果转化资金项目（2014GB2A300003）

乔美娟（1991-），女，山西太原人，在读硕士，研究方向：中药调节动物免疫功能及其分子机制。李宏全为通信作者。