菏泽市牡丹区238例手足口病病例核酸检测分析

刘芳+卞学丽

[摘要] 目的 掌握菏泽市牡丹区手足口病病原学流行特征，为疫情研判和防控提供科学依据。 方法 应用实时荧光定量PCR对2013年1月～2016年12月采集的238例手足口病标本进行检测，并对结果进行分析。 结果 238例手足口病病例标本中，肠道病毒核酸阳性184例（77.31%）。其中EV71阳性95例，占阳性标本总数的51.63%（95/184）；CoxA16阳性32例，占17.39%（32/184）；其他肠道病毒57例，占30.98%（57/184）。EV71型病毒在2013年和2015年呈高发流行，2014年和2016年呈低发流行。CoxA16型病毒在2013年和2015年未检测到，2014年和2016年均有一定程度的流行。184例实验室确诊病例中1～3岁年龄散居儿童占67.39%。男女性别的比例为2.02。 结论 EV71型病毒是牡丹区HFMD的主要病原体。

[关键词] 牡丹区；手足口病；实时荧光定量PCR；EV71

[中图分类号] R512.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）08-0143-03

[Abstract] Objective To understand the epidemiological characteristics of hand-foot-mouth disease in Mudan district of Heze city， and provide scientific evidence for evaluation and prevention of epidemic situation. Methods The samples of 238 hand-foot-mouth disease cases collected from January 2013 to December 2016 were analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR， and the results were analyzed. Results Of the 238 cases of hand-foot-mouth disease， 184 cases（77.31%） were positive for nucleic acid of enteroviruses. Among them， EV71 was positive in 95 cases， accounting for 51.63%（95/184） of the total number of positive cases； CoxA16 was positive in 32 cases， accounting for 17.39%（32/184）； other enteroviruses were in 57 cases， accounting for 30.98%（57/184）. EV71 virus was highly prevalent in 2013 and 2015， and was lowly prevalent in 2014 and 2016. CoxA16 virus was not detected in 2013 and 2015， and was prevalent in 2014 and 2016 to a certain degree. Among 184 laboratory confirmed cases， scattered children with 1～3 years of age accounted for 67.39%. The sex ratio of male to female was 2.02. Conclusion EV71 virus is the main pathogen of HFMD in Mudan District.

[Key words] Mudan district； Hand-foot-mouth disease； Real-time fluorescence quantitative PCR； EV71

手足口病（hand-foot-mouth disease，HFMD）是全球范圍广泛流传的一种传染病，容易出现一定程度的暴发，造成社会、医疗和家庭的严重负担[1]。HFMD发病以5岁以下婴幼儿常见，是我国法定报告管理丙类传染病[2]。引起HFMD的病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属，有二十多种，人肠道病毒71型（Human enterovirus 71，EV71）、柯萨奇病毒A组（CoxA）中的16型最为常见，另外CoxA4、5、9、10型及B组的2、5型也较常见[3]。CoxA16感染的症状较轻，EV71感染性最强，并且除引发手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹症状外，还可引起脑膜炎、脑炎、弛缓型瘫痪等严重的神经系统并发症[4]。近年来，牡丹区手足口病持续高发，是当前严重的公共卫生问题之一。本文对2013年1月～2016年12月间在牡丹区区域内采集的238例HFMD病例标本的核酸检测结果进行分析，探讨其流行规律，为今后更科学的防控HFMD提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

牡丹区疾病预防控制中心从定点医院菏泽市传染病医院对HFMD临床诊断病例随机采样，2013年1月～2016年12月共采集居住地为牡丹区的病例标本共238份。

1.2 方法

发病3 d内采集患者的肛拭子标本，在低温条件下运送至菏泽市疾病预防控制中心手足口病检测实验室，-20℃保存，需长期保存的标本存于-70℃冰箱。肛拭子样本充分震荡，4℃下高速离心，吸出上清液提取核酸。采用瑞士 Roche公司Roche High Pure Viral RNA Kit试剂盒提取标本病毒核酸，达安生物科技有限公司肠道病毒通用（EV）型、肠道病毒71（EV71）型、柯萨奇病毒A16（CoxA16）型荧光测定试剂盒配制反应体系，实时荧光定量PCR仪（ABI，StepOnePlus）进行核酸扩增反应。反应如下：逆转录50℃ 15 min；预扩增95℃ 15 min；扩增94℃ 15s→55℃ 45 s（收集荧光），40个循环。反应结束后，待检样品FAM通道呈典型S型扩增曲线且Ct值≤38，则报告为阳性；无典型S型扩增曲线或Ct值>38，则报告为阴性。

1.3 统计学方法

利用Microsoft Excel软件建立数据库，对标本资料和结果进行录入及分析处理。

2 结果

2.1 检测结果

2013年1月～2016年12月牡丹区共采集238份HFMD临床诊断病例标本，EV核酸检测阳性184例，检出率77.31%（184/238）。其中EV71阳性95例，占阳性标本总数的51.63%（95/184）；CoxA16阳性32例，占17.39%（32/184）；其他肠道病毒57例，占30.98%（57/184）。

2.2 年度分布

2013年1月～2016年12月采集样品的阳性率各年分别为90.32%（56/62），64.41%（38/59），71.43%（35/49）和80.88%（55/68）。2013年85.71%（48/56）的阳性病例是EV71型病毒感染，占绝对优势；其他肠道病毒阳性占14.29%（8/56）；未检测到CoxA16型病毒阳性。2014年EV71型和CoxA16型均有阳性感染，比例分别为28.95%（11/38）和26.32%（10/38），另有44.74%（17/38）的阳性病例是其他肠道病毒感染。2015年EV71型再次成为优势病毒株，占77.14%（27/35）；其他肠道病毒占22.86%（8/35）；无CoxA16型阳性病例。2016年EV71型阳性占16.36%（9/55）；CoxA16型阳性占40.00%（22/55）；其他肠道病毒阳性占43.64%（24/55）。见表1。

2.3 人群分布

184例肠道病毒阳性病例中，男123例，占66.85%；女61例，男占33.15%。男女性别的比例为2.02。年龄最大9岁，最小3个月。以1～组和2～组病例最多，1～3岁幼童占67.39%（124/184），5岁以下儿童共占97.28%（179/184）。见表2。

3讨论

1957年新西兰首次报道HFMD，1958年分离出CoxA16型肠道病毒，1959年提出HFMD命名，1972年美国首次确认EV71型病毒，此后这两种病毒型别交替出现成为HFMD的主要病原体[5]。

对HFMD病病原体各型别的感染情况进行监测与分析，以掌握当地HFMD病原体的流行趋势，可对该病的治疗和防控提供准确可靠的实验室依据[6]。通过临床症状和体征难以确定病原体类型，目前，HFMD的病原学检测技术主要包括病毒分离、血清学检测、RT-PCR和实时荧光定量PCR等方法。实时荧光定量PCR方法避免了前两種方法不能满足标本量大、时间紧迫的问题，又因省去了常规RT-PCR扩增后产物要进行电泳分析的步骤，所以无论从敏感性、特异性与速度上都是最具有优势的HFMD的病原学检测技术[7，8]。

应用实时荧光定量PCR方法检测采集的238例HFMD临床诊断病例样本，EV核酸检测阳性184例，检出率77.31%。其中EV71占阳性标本总数的51.63%，CoxA16占17.39%，其他肠道病毒占30.98%。EV71型病毒在2013年和2015年呈高发流行，2014年和2016年呈低发流行。CoxA16型病毒在2013和2015年未检测到，2014年和2016年均有一定程度的流行。这表明EV71型病毒是牡丹区HFMD的主要病原体，并且EV71型和CoxA16型病毒的流行程度均具有隔一年一变化的特征。这与周边相邻地区的流行特征相似[9，10]。这一间隔式流行特征对本区HFMD的流行趋势判断具有重要意义。

对健康人群的研究表明[11，12]，约44%新生儿体内具有从母体获得的EV71抗体，1个月后抗体水平迅速降低，1～23月龄的婴幼儿抗体阳性率仅为0.8%，2～5岁儿童抗体阳性率每年提高约12%，15岁以上人群血清抗体阳性率超过50%，因此5岁以下（尤其是3岁以下）儿童是HFMD的高发人群。牡丹区的184例实验室确诊病例中，1～3岁幼童占67.39%，5岁以下共占97.28%。男女性别的比例为2.02，表明男童比女童更易感染HFMD，这可能是和男童活动量大且卫生习惯较差有关。这些人群分布的特征与其他地区的研究结果一致[13，14]。对菏泽市HFMD儿童病例EV71型抗体水平的检测分析表明[15]，男童EV71 IgM抗体阳性率显著高于女童，男童的EV71急性感染发病率显著高于女童。

目前手足口病疫苗虽已上市，但因属二类疫苗且价格较高，接种率有限，而且此疫苗仅用于预防EV71型病毒感染的HFMD，所以手足口病的预防和控制工作需继续保持警惕性，在传染源、传播途径和易感人群等各个环节采取积极有效的防控措施，不能掉以轻心。

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