类风湿关节炎患者RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R水平表达情况

徐 辉，陈永平

（重庆三峡中心医院 风湿科，重庆404000）

类风湿关节炎患者RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R水平表达情况

徐 辉，陈永平

（重庆三峡中心医院 风湿科，重庆404000）

目的：探讨类风湿关节炎（RA）患者核因子κB受体活化因子（RANK）及其配体（RANKL）、半胱氨酸蛋白酶-1（caspase-1）、白介素-18（IL-18）、IL-33及B淋巴细胞表面表达的B淋巴细胞刺激因子受体（BAFF-R）水平表达情况。方法：临床纳入RA患者72例，同时纳入70例健康体检者作为研究的对照组。分别检测RA组患者以及对照组外周血RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R等水平。结果：①RA组RANK、RANKL表达率差异无显著性；但RA组RANK在CD3+T淋巴细胞、CD14+单核细胞、中性粒细胞上的表达强度要明显低于对照组，差异有显著性；RA组与对照组RANKL表达强度差异无显著性；②RA组caspase-1及其下游因子IL-18、IL-33水平均明显高于对照组，差异有显著性；相关性分析显示，caspase-1与IL-18、IL-33呈现正相关；③RA 组BAFF-R水平明显高于对照组，差异有显著性。结论：通过对RA患者进行外周血RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R水平检测，能够综合评估病情的进展。另外，RA的发生及发展是多种机制共同作用的结果。

类风湿关节炎；核因子κB受体活化因子；半胱氨酸蛋白酶；白介素；B淋巴细胞表面表达的B淋巴细胞刺激因子受体

类风湿关节炎（RA）是临床上较为常见的一种自身免疫性疾病，其以慢性破坏性关节病变为主要临床特征［1］。随着病情的进展，滑膜炎症以及过度增生能够导致软骨与骨发生进行性的破坏，研究影响到患者的生活质量［2］。目前，临床对于RA的发病机制尚不明确，因此尚无治疗本病的特效方法。研究表明，核因子κB受体活化因子（RANK）及其配体（RANKL）水平与骨破坏的发生存在密切的联系［3］。而半胱氨酸蛋白酶-1 （caspase-1）及其下游因子白介素-18（IL-18）、IL-33等炎症因子被证实能够上调RANKL的表达［4］。由于RA是一种与T、B淋巴细胞均有密切联系的自身免疫性疾病，因此淋巴细胞在RA的免疫致病机理中有着十分重要的作用。B淋巴细胞表面表达的B淋巴细胞刺激因子受体（BAFF-R）是近年来临床发现的一种BlyS特异性III型跨膜蛋白，在机体免疫机制中扮演着重要的作用［5］。为进一步探讨RA）患者RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R水平表达情况，笔者对我院收治的72例RA患者进行了临床资料的回顾性研究，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究共纳入RA患者72例，均为我院2010年1月～2015年10月收治的病例。另外，研究纳入同时期内70例健康体检者作为研究的对照组。RA组：男性33例，女性39例，年龄29～63岁，平均年龄（42.1±8.4）岁，病程2～15年，平均病程（7.6±2.4）年；对照组：男性30例，女性40例，年龄26～65岁，平均年龄（42.5±8.2）岁。两组患者性别、年龄等资料差异均无显著性（P＞0.05），有可比性。

1.2 纳入标准 ①年龄≥18岁；②符合RA临床诊断标准，参考美国风湿病学会（ACR）于2009年制定的相关诊断标准。

1.3 排除标准 ①合并有其他自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮、干燥综合征等；②合并有骨性关节炎者；③既往有中枢神经系统疾病者；④合并有感染性疾病者。

1.4 研究方法 取RA组与对照组患者外周血，并对RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R等水平进行检测。①细胞表面RANK、RANKL水平检测：采用流式细胞术，分别取RA组与对照组患者外周血50μl，分别加入RANK、RANKL30μl，室温避光条件下反应30min，PBS振洗2次，加入兔抗羊IgG-Cy3 150μl，室温避光静置20min，PBS振洗2次，兔血清封闭10min，加入鼠抗人CD14-PerCP 10μl，室温避光静置20min，加入红细胞裂解液3ml，震荡摇匀后室温避光静置10min。经离心机1500转/min离心5min，弃上层清液，加入0.01mol/LPBS 300μl混匀，采用流式细胞仪进行检测；②caspase-1、IL-18、IL-33水平检测：取外周血3ml，经离心机3000转/min离心15min后得到上层血清。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法对血清中caspase-1、IL-18、IL-33水平进行检测；③BAFF-R水平检测：采用流式细胞术，在2个流式检测管中加入外周血100μl，分别加入20μl异硫氰基荧光素标记的抗CD19单抗、BAFF-R单抗以及抗CD19单抗、双色同型对照免疫球蛋白，混匀后室温避光反应15min，加入1 ×FACS溶血素2ml，混匀后室温避光反应10min。经离心机1500转/min离心5min，弃上层清液，PBS振洗2次，再次经离心机1500转/min离心5min，弃上层清液，加入4%多聚甲醛0.5ml，采用流式细胞仪进行检测。

1.5 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件包进行统计数据的处理以及分析，计量资料用mean±SD表示，组间计量资料比较采用两样本t检验，相关性分析采用Spearman法，以P＜0.05为差异表明存在具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组外周血各种细胞上RANK、RANKL水平比较 RA组RANK、RANKL表达率差异无显著性（P＞0.05）；但RA组RANK在CD3+T淋巴细胞、CD14+单核细胞、中性粒细胞上的表达强度要明显低于对照组，差异有显著性（P＜0.05）；RA组与对照组RANKL表达强度差异无显著性（P＞0.05），见表1。

表1 两组外周血各种细胞上RANK、RANKL水平比较（例，s）

2.2 两组caspase-1、IL-18、IL-33水平比较 RA组caspase-1及其下游因子IL-18、IL-33水平均明显高于对照组，差异有显著性（P＜0.05），见表2。相关性分析显示，caspase-1与IL-18、IL-33呈现正相关（r=0.822，r=0.849，P＜0.05）

表2 两组caspase-1、IL-18、IL-33水平比较（例，s）

2.3 两组BAFF-R表达阳性率比较 RA组BAFF-R水平为（6.9±3.0）%，对照组BAFF-R水平为（3.1± 1.3）%，差异有显著性（t=9.745，P＜0.05）。

3 讨论

RA属于以关节组织慢性炎症病变为主的一种全身性疾病，病变过程中伴随着滑膜的慢性炎症以及血管翳的形成［6-7］。随着病程时间的增加，患者多个关节的骨与软骨组织均受到较大程度的破坏，最终导致关节功能的丧失。目前研究表明，破骨细胞的增殖以及活化在本病骨侵蚀过程中扮演着重要的作用［7-8］。其中，RANK、RANKL在破骨细胞的分化及成熟过程中起着重要的作用。国外有研究报道，RA患者外周血RANKL mRNA显著高于健康人，说明RANKL mRNA可能在RA的形成、发展中有密切的联系［9-10］。本研究通过流式细胞仪对RA患者以及健康体检者外周血RANK、RANKL蛋白表达情况进行了研究。结果显示，与对照组比较，RA患者外周血阳性细胞的表达率并无明显统计学差异。该结果表明，RANKL系统的表达存在明显的转录后调节。但是，本研究也发现RA组外周血RANK在各种细胞上的表达强度均要明显低于对照组。该结果表明，RANK在各种细胞上的表达强度可能与严重的发展以及转归存在密切的联系，但具体机制如何尚需要进行深入的研究。

近年来，研究发现NALP3炎性复合体在RA患者滑膜等组织中呈现显著的高表达［11-12］。其中，caspase-1是NALP3炎性复合体重要的组织部分，属于与机体炎症反应密切相关的一种蛋白酶。研究证实，caspase-1下游的IL-18与IL-33在RA的发生及发展过程中发挥着重要的作用［13］。虽然目前对于IL-18 与IL-33炎症因子在RA中的研究较多，但是对于caspase-1的相关研究尚较少。因此，本研究对RA组以及对照组血清caspase-1、IL-18以及IL-33等水平进行了对比。结果显示，RA组caspase-1、IL-18以及IL-33等水平均明显高于对照组，而近年来，一些研究发现caspase-1具有促进细胞凋亡，加重软骨破坏的作用，因此RA患者该指标的水平显著升高，说明caspase-1、IL-18以及IL-33可能参与的RA的发生与发展。为此我们通过进一步分析发现，caspase-1与IL-18、IL-33呈现明显的正相关（P＜0.05），表明IL-18、IL-33作为caspase-1的下游因子参与了RA的发生及发展全过程，与文献报道一致［14］。

B淋巴细胞刺激因子（Blys）属于肿瘤坏死因子超家族的成员，目前研究发现其在B淋巴细胞的生长、发育以及分化过程中，均起到重要的免疫调控作用，其能够通过诱导B细胞的增殖、分化以及分泌免疫球蛋白，以提高机体的体液免疫应答［15-16］。随着研究的不断深入，目前发现Blys存在3个受体，分别为B细胞成熟抗原（BCMA）、重组人肿瘤坏死因子受体13b（TACI）以及BAFF-R［17］。其中，BAFF-R属于BlyS特异性III型跨膜蛋白，其只能够与BlyS分子发生特异的结合，而无法与其它肿瘤坏死因子家族的任何配体结合［18］。研究发现，BAFF-R能够通过可溶性形式阻断BlyS与细胞膜上受体进行结合，进而抑制NF-κB激活以及外周血B细胞产生免疫球蛋白［19］。本研究发现，RA组BAFF-R水平明显高于对照组。表明Blys参与了RA的发生及发展，而BAFF-R水平检测可以作为预测RA患者病情的另一个重要指标，与文献报道一致［20］。

综上所述，通过对RA患者进行外周血RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R水平检测，能够综合评估病情的进展。另外，RA的发生及发展是多种机制共同作用的结果。

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Expression of RANK, RANKL, caspase-1, IL-18, IL-33 and BAFF-R in RA patients

Xu Hui, Chen Yong-ping
(Rheumatism Dep. of ChongQing Three Gorges Central Hospital, ChongQing 404000, China)

Objective To study the expression of RANK, RANKL, caspase-1, IL-18, IL-33 and BAFF-R in RA patients.Methods 72 RA patients were selected and 70 healthy check-ups were selected as control group. The level of RANK, RANKL, caspase-1, IL-18, IL-33 and BAFF-R for RA group and control group was detected. Results ①The expression rate of RANK and RANKL for RA group and control group was not significantly different; the expression intensity of RANK in CD3+T lymphocyte cell, CD14+monocyte and neutrophile granulocyte for RA group was significantly lower than that of control group ; the expression intensity of RANKL for RA group and control group was not significantly different ; ②The level of caspase-1, IL-18, IL-33 for RA group was significantly higher than that of control group ; according to the correlation analysis, the expression of caspase-1 was positively correlated with the expression of IL-18 and IL-33; ③ The level of BAFF-R for RA group was significantly higher than that of control group. Conclusion For RA patients, the detection of RANK, RANKL, caspase-1, IL-18, IL-33 and BAFF-R can make a comprehensive evaluation on the illness progress. In addition, the genesis and development of RA is contributed to the concurrent action of multiple mechanisms.

RA RANK; caspase; IL; BAFF-R

R593.22

A

1673-016X（2017）02-0100-04

2017-01-22

陈永平，E-mail:cqsxzxyyfskxh@163.com